En raison de sa taille inconfortable, la drosophile est difficile à imager. Cette méthode démontre l’imagerie du comportement et de la morphologie des mouches à l’utilisation d’un stéréomicroscope. Ce protocole peut être utilisé à la fois pour la recherche scientifique et l’enseignement.
La démonstration de la procédure sera Ms.Li Tong et Mme Weng Yujia, des étudiants de premier cycle qui font de la formation en recherche sous ma direction. Pour commencer, faites une chambre d’observation du comportement des mouches, ou FBOC, en utilisant un bouchon de bouteille en plastique translucide d’environ 17 par 22 millimètres ou en coupant une section de 17 millimètres à partir de l’extrémité épaisse d’une pointe de pipette de cinq millilitres. Versez 1% de gélose dans le FBOC pour ajuster sa profondeur.
Si de la nourriture doit être placée dans le FBOC, versez la gélose pour obtenir une profondeur de 12 millimètres. Si la nourriture n’a pas besoin d’être placée dans le FBOC, versez la gélose à une profondeur de cinq millimètres pour suivre plus facilement les allées et venues des mouches des fruits. Si vous utilisez une pointe de pipette pour fabriquer un FBOC, placez la section de la pointe de la pipette de coupure dans une boîte de Petri de 35 ou 60 millimètres.
Versez le gel de gélose à 1% dans la boîte de Petri d’une épaisseur d’environ cinq millimètres et attendez que la gélose se solidifie et scelle le fond du FBOC. Versez ensuite le gel de gélose dans le FBOC à l’épaisseur souhaitée. Fabriquez une base FBOC en percant un trou de 10 millimètres de profondeur au centre d’un morceau de feuille de mousse d’éthylamine du même diamètre que le FBOC.
Insérez le FBOC dans le trou. Préparez des aliments pour mouches si nécessaire avec un milieu de levure, un régime artificiel ou du saccharose pur ou du glucose, selon le but de l’observation. Pour déterminer visuellement si les mouches se nourrissent, ajoutez des colorants alimentaires à la nourriture à une concentration finale de 12,5 milligrammes par 100 millilitres.
Versez les aliments préparés dans une boîte de Pétri à une hauteur de huit millimètres. Après la solidification, placez la nourriture sur un rectangle dessiné sur du papier et coupez la nourriture en conséquence et placez-la sur un morceau de plastique et coupez-la dans une pyramide quadrangulaire ou une pyramide quadrangulaire frustum pour permettre l’enregistrement du comportement des mouches sous différents angles lorsque les mouches atterrissent sur la nourriture. Coupez un morceau de plastique et utilisez une pince à épiler pour placer le plastique et la nourriture au centre du FBOC.
Versez 1% de gel de gélose dans une bouteille vide propre d’une épaisseur de 1 à 2 centimètres et placez-le à température ambiante pendant 1 à 2 heures. Transférez les mouches dans la bouteille et placez-la à 25 degrés Celsius pendant 36 heures ou plus. Refroidissez et inactivez les mouches dans de la glace pilée, triez-les sur un sac de glace et transférez-les au FBOC comme décrit précédemment.
Après avoir transféré les mouches au FBOC, couvrez-le avec 30 à 40 millimètres d’UV ou de filtre transparent pour que la caméra forme un complexe FBOC. Placez le complexe FBOC sous le stéréomicroscope pour observation. Illuminez le FBOC.
Montez des mini-lumières vidéo LED pour faire clignoter les supports de montage de sabots et placez les lumières sur les côtés gauche et droit du FBOC. Allumez les lumières et réglez la température de couleur à 5 000 à 5 600 Kelvin et la luminosité à 100% Allumez les lumières vidéo LED et ajustez le microscope à zoom stéréo jusqu’à ce que le bord du FBOC puisse être clairement vu à l’œil nu. Déplacez le FBOC au centre du champ de vision.
Fixez la pince de l’adaptateur universel de l’appareil photo numérique du télescope à un oculaire du stéréomicroscope. Ensuite, fixez un appareil photo numérique compact à l’adaptateur en toute sécurité en tournant alternativement la vis de montage de l’appareil photo et la vis de fixation de l’appareil photo. Allumez l’appareil photo numérique et tournez les boutons de réglage fin horizontaux / verticaux jusqu’à ce que le bord FBOC apparaisse clairement au centre du champ de vision circulaire lumineux sur l’écran LCD de l’appareil photo.
Faites pivoter la molette de mode en mode automatique de priorité d’ouverture. Appuyez sur le mode de mise au point du sélecteur multiple, choisissez macro en gros plan, puis appuyez sur le bouton OK. Déplacez le commutateur de zoom de l’extrémité grand angle à l’extrémité téléobjectif et zoomez sur l’image circulaire jusqu’à ce que sa partie centrale remplisse l’écran LCD complet.
Appuyez sur le bouton d’enregistrement du film et commencez à enregistrer le comportement de la mouche. Tournez le bouton de mise au point du microscope jusqu’à ce que les mouches du FBOC soient clairement visibles. Choisissez le comportement de la mouche qui vous intéresse pour l’observation ou l’enregistrement vidéo.
Tournez le bouton de zoom pour effectuer un zoom avant et arrière afin d’obtenir le grossissement souhaité pour l’observation ou l’enregistrement vidéo. La photographie représentative prise à travers le filtre UV est claire et nette, très similaire à la photographie prise lorsque le flacon de culture n’est pas recouvert. La qualité de la photo prise à travers le verre de la boîte de Petri est très médiocre et partiellement floue.
Une photographie tirée de l’enregistrement vidéo montrant les détails de chaque partie du corps de la mouche est montrée ici. Parce que l’appareil photo est connecté à un stéréomicroscope à zoom, il est très facile de prendre des photos panoramiques à des prises de vue rapprochées à l’aide du système de zoom. Grâce à ce protocole, le comportement des mouches peut être observé et documenté pour plusieurs angles de vision.
Par exemple, la mouche femelle frotte constamment l’ovipositeur avec ses pattes postérieures pendant le processus de ponte. Ce détail du comportement de ponte ne peut pas être vu clairement de côté. En utilisant cette méthode simple et économique, nous pouvons prendre un panoramique ou un gros plan du comportement et de la morphologie des mouches et obtenir une vidéo ou une photo de bonne qualité.
