Garip boyutu nedeniyle, Drosophila'yı imgelemesi zordur. Bu yöntem, stereo mikroskop kullanılarak sineklerin davranışının ve morfolojisinin görüntülenmesini göstermektedir. Bu protokol hem bilimsel araştırma hem de öğretim için kullanılabilir.
Prosedürü gösterenler, benim rehberliğimde araştırma eğitimi alan lisans öğrencileri Tong ve Bayan Weng Yujia Ms.Li olacak. Başlamak için, yaklaşık 17 ila 22 milimetre yarı saydam bir plastik şişe kapağı kullanarak veya beş mililitrelik pipet ucunun kalın ucundan 17 milimetrelik bir bölüm keserek bir sinek davranışı gözlem odası veya FBOC yapın. Derinliğini ayarlamak için FBOC'ye %1 agar dökün.
Yiyeceklerin FBOC'ye yerleştirilmesi gerekiyorsa, 12 milimetre derinlik elde etmek için agar dökün. Yiyeceklerin FBOC'ye yerleştirilmesi gerekmiyorsa, meyve sineklerinin nerede olduğunu daha kolay izlemek için agar'ı beş milimetre derinliğe dökün. FBOC yapmak için pipet ucu kullanıyorsanız, kesme pipet ucu bölümünü 35 veya 60 milimetre Petri kabına yerleştirin.
%1 agar jelini Petri kabına yaklaşık beş milimetre kalınlığında dökün ve agarın FBOC'nin tabanını katılaştırmasını ve sızdırmasını bekleyin. Daha sonra agar jelini istenen kalınlığa FBOC'ye dökün. FBOC ile aynı çapta bir etilaminin köpük tabakasının ortasında 10 milimetre derinliğinde bir delik açarak bir FBOC tabanı yapın.
FBOC'yi deliğe yerleştirin. Gözlemin amacına bağlı olarak maya ortamı, yapay diyet veya saf sakkaroz veya glikoz ile gerekirse sinek yemi yapın. Sineklerin beslenip beslenmediğini görsel olarak belirlemek için, 100 mililitre başına 12,5 miligramlık son konsantrasyona gıda boyaları ekleyin.
Hazırlanan yiyecekleri bir Petri kabına sekiz milimetre yüksekliğe dökün. Katılaşmadan sonra, yiyecekleri kağıda çizilmiş dikdörtgen bir yere yerleştirin ve yiyecekleri buna göre kesin ve bir plastik parçasına yerleştirin ve sinekler gıdaya inerken sinek davranışının farklı açılardan kaydedilmesine izin vermek için dörtgen bir piramit veya dörtgen frustum piramidi halinde kesin. Bir parça plastik kesin ve plastiği ve yiyecekleri FBOC'nin ortasına yerleştirmek için cımbız kullanın.
Temiz boş bir şişeye 1-2 santimetre kalınlığında% 1 agar jeli dökün ve 1-2 saat oda sıcaklığına yerleştirin. Transfer şişeye uçar ve 36 saat veya daha fazla bir süre boyunca 25 santigrat dereceye yerleştirin. Sinekleri ezilmiş buzda soğutun ve devre dışı bırakın, bir buz torbasında sıralayın ve daha önce açıklandığı gibi FBOC'a aktarın.
Sinekleri FBOC'ye aktardıktan sonra, 30-40 milimetre UV veya kameranın bir FBOC kompleksi oluşturması için net filtre ile örtün. FBOC kompleksini gözlem için stereo mikroskobun altına yerleştirin. FBOC'yi aydınlatın.
Sıcak ayakkabı montaj standlarını yanıp sönmek ve ışıkları FBOC'nin sol ve sağ taraflarına yerleştirmek için mini LED video ışıkları takın. Işıkları açın ve renk sıcaklığını 5.000 ila 5.600 Kelvin ve parlaklığı % 100'e ayarlayın LED video ışıklarını açın ve FBOC'nin kenarı çıplak gözle net bir şekilde görülene kadar stereo zoom mikroskobu ayarlayın. FBOC'yi görüş alanının ortasına taşıyın.
Evrensel teleskop dijital kamera adaptörünün kelepçesini stereo mikroskobun bir göz merceğine takın. Ardından, kamera montaj vidasını ve kamera sabitleme vidasını dönüşümlü olarak çevirerek adaptöre kompakt bir dijital kamera takın. Dijital kamerayı açın ve FBOC kenarı kameranın LCD ekranındaki parlak dairesel görüş alanının ortasında net bir şekilde görünene kadar yatay/dikey ince ayar düğmelerini çevirin.
Mod kadranını diyafram öncelikli otomatik moda döndürün. Çoklu seçicide odak moduna basın, makro yakın çekimini seçin ve tamam düğmesine basın. Yakınlaştırma anahtarını geniş açı ucundan telefoto ucuna taşıyın ve merkezi kısmı tam LCD ekranı doldurana kadar dairesel görüntüye yakınlaştırın.
Film kaydı düğmesine basın ve sinek davranışını kaydetmeye başlayın. FBOC'daki sinekler açıkça görünene kadar mikroskobun odak düğmesini çevirin. Gözlem veya video kaydı için ilgi çekici sinek davranışını seçin.
Gözlem veya video kaydı için istenen büyütmeyi elde etmek için yakınlaştırma düğmesini yakınlaştırmak ve uzaklaştırmak için çevirin. UV filtresinden çekilen temsili fotoğraf açık ve keskindir, kültür şişesi kapsanmadığında çekilen fotoğrafa çok benzer. Petri kabının camdan çekilen fotoğrafın kalitesi çok zayıf ve kısmen bulanık.
Video kaydından çekilen ve sineğin vücudunun her parçasının ayrıntılarını gösteren bir fotoğraf burada gösterilir. Kamera bir zoom stereo mikroskobuna bağlı olduğundan, yakınlaştırma sistemini kullanarak panoramikden yakın çekime kadar çekim yapmak çok kolaydır. Bu protokol kullanılarak, birden çok görüntüleme açısı için sinek davranışı gözlemlenebilir ve belgelenebilir.
Örneğin, dişi sinek, yumurta bırakma işlemi sırasında arka ayaklarıyla ovipositoru sürekli olarak ovalar. Bu yumurtlama davranışı detayı yandan net bir şekilde görülemez. Bu basit ve ekonomik yöntemi kullanarak, sineklerin davranışının ve morfolojisinin panoramik veya yakın çekimini alabilir ve kaliteli bir video veya fotoğraf elde edebiliriz.
