虚血性心拍における遺伝子治療の有効性を評価するための大型動物モデル

このプロトコルで使用される方法とイメージングモダリティは、臨床試験に進む前の虚血性心心臓における遺伝子治療の安全性と有効性の優れた画像を構成します。この技術の主な利点は、虚血モデルの低侵襲性だけでなく、心臓の低運動性であるがまだ生存可能な領域への遺伝子治療の正確な標的化でもあります。虚血手術、遺伝子導入、安楽死の前に経胸壁心エコー検査を行うことから始めて、検出可能な心膜液を評価し、心筋の緊張を判断します。

トランスデューサーをブタの脇の下の3番目または4番目の肋間スペースに配置し、ブタの胸骨を指すマーカーを使用して、僧帽弁レベル、乳頭筋、および頂端レベルで胸骨傍短軸ビューにアクセスします。次に、[取得]を押してクリップを保存します。虚血手術直前に冠動脈造影を行う場合は,6-Fカテーテルを透視指導下,ヨウ素造影剤を用いて右冠動脈,左上行冠動脈,左前下行動脈を画像化する.

オートインジェクターでのシネイメージングの場合、ボーラス持続時間を3秒、総容量を21ミリリットルに設定し、シングルを押して、はいを押して、5-Fピグテールカテーテルを介してヨウ素造影剤を左心室に投与します。安静時の動物のシネイメージングを行い、ドブタミンを静脈内投与し、ストレス誘発のために用量を増やします。毎分160拍の目標心拍数が達成されたら、シネイメージングを行い、ピグテールカテーテルを取り外します。

駆出率を計算するには、測定ソフトウェアを開き、問題の画像の心室分析を選択します。画像をスクロールして、拡張期と収縮期の時間枠を選択し、各時間枠の心室の輪郭を描くツールを選択します。慢性心筋虚血を誘導するために、遺伝子導入の14日前に、左冠状動脈にコイルを配置し、ボトルネックステントを左冠状動脈に滑走させ、ステントを第1対角線上に遠位に配置する。

ボトルネックを所定の位置に固定するために、ステントと内腔比が1.3のインデフレーターを使用して、動脈の公称圧力までステントを膨らませます。さらに15秒後、ステントを収縮させ、機器を動脈から引き込み、血管造影によってボトルネックステントの正しい配置を確認します。透視ガイダンスの下での血管造影と機能測定の後、電気解剖学的マッピングのために大腿骨シースを介して左心室にマッピングカテーテルを導入し、左心室から少なくとも100ポイントを収集し、[承認]をクリックしてポイントを承認します。

最終的なマップでは、実行可能性のために、基準として5ミリボルトを超えるユニポーラ電圧を使用します。そして運動低下のために、局所的な線形短縮をできるだけ低く、少なくとも12%と低いしかし好ましくは6%未満動物を安楽死させた後、胸腔から心臓を採取する。採取した心臓をすすぎたら、大動脈弁の上に18ゲージの針を置き、灌流ポンプに針を取り付けます。

750ミリリットルの1%パラホルムアルデヒドで心臓を灌流する。鋭利なナイフを使用して心臓を1センチメートルの厚さのスライスにスライスし、遺伝子導入領域からサンプルを4%パラホルムアルデヒドと液体窒素に収集します。染色用のサンプルを4%パラホルムアルデヒド中で4°Cで48時間保存します。

15O-water PETスキャンにより、円周方向のひずみ、駆出率、および心筋灌流を測定することにより、遺伝子治療の有効性を分析しました。組織サンプルは、心臓を電気解剖学的マップと比較することにより、遺伝子導入領域から直接収集できます。導入遺伝子発現および治療的血管新生は、β-ガラクトシダーゼ染色後の陽性細胞数の解析による免疫組織学的解析、および血小板/内皮細胞接着分子-1染色後の心筋毛細血管領域の解析により評価した。

ボトルネックステントの配置は、血管造影と遺伝子導入領域からのサンプル採取によって確認することが重要であり、心臓を電気解剖学的マップと比較することで確認できました。全体として、すべての測定を最も再現性の高い方法で行うことが重要です。