Les méthodes et modalités d’imagerie utilisées dans ce protocole constituent une excellente image de la sécurité et de l’efficacité de la thérapie génique dans le cœur ischémique avant de passer aux essais cliniques. Les principaux avantages de cette technique sont le faible caractère invasif du modèle d’ischémie, mais aussi le ciblage précis de la thérapie génique sur des zones hypokinétiques mais toujours viables du cœur. Commencez par effectuer l’échocardiographie transthoracique avant l’opération d’ischémie, le transfert de gènes et l’euthanasie pour évaluer tout liquide péricardique détectable et déterminer la souche myocardique.
Placez le transducteur dans le troisième ou quatrième espace intercostal sous l’aisselle du porc avec un marqueur pointant vers le sternum du porc pour accéder aux vues parasternales à axe court au niveau de la valve mitrale, du muscle papillaire et de l’apical. Appuyez ensuite sur Acquérir pour enregistrer un clip. Pour effectuer l’angiographie coronaire directement avant l’opération d’ischémie, utilisez un cathéter 6-F sous guidage fluoroscopique avec un agent de contraste iodé pour imager l’artère coronaire droite, l’artère coronaire ascendante gauche et l’artère descendante antérieure gauche.
Pour l’imagerie par cinéma dans l’auto-injecteur, réglez la durée du bolus à trois secondes et le volume total pour 21 millilitres, puis appuyez sur simple, et oui pour administrer un agent de contraste iodé dans le ventricule gauche via un cathéter 5-F en queue de cochon. Effectuer une imagerie cinée de l’animal au repos, puis administrer de la dobutamine par voie intraveineuse et des doses croissantes pour l’induction de stress. Une fois que la fréquence cardiaque cible de 160 battements par minute est atteinte, effectuez une imagerie cinée et retirez le cathéter en queue de cochon.
Pour calculer la fraction d’éjection, ouvrez le logiciel de mesure, sélectionnez l’analyse ventriculaire de l’image en question. Faites défiler l’image pour sélectionner une période, une dans la diastole et une dans la systole, puis sélectionnez un outil pour dessiner les contours ventriculaires de chaque période. Pour induire l’ischémie myocardique chronique, 14 jours avant le transfert de gènes, placez une bobine sur l’artère coronaire gauche, glissez l’endoprothèse goulot vers l’artère coronaire gauche et placez l’endoprothèse distale à la première diagonale.
Gonfler l’endoprothèse à la pression nominale dans l’artère, en utilisant un déflateur avec un rapport stent/lumen de 1,3 pour ancrer le goulot d’étranglement en place. Après 15 secondes supplémentaires, dégonfler l’endoprothèse, retirer l’équipement de l’artère et s’assurer de la mise en place correcte d’un stent goulot d’étranglement par angiographie. Après angiographie et mesures fonctionnelles sous guidage fluoroscopique, introduisez un cathéter de cartographie dans le ventricule gauche via la gaine fémorale pour la cartographie électro-anatomique, collectez au moins 100 points du ventricule gauche et cliquez sur accepter pour approuver un point.
Dans la carte finale, pour la viabilité, utilisez une tension unipolaire supérieure à cinq millivolts comme critère. Et pour l’hypokinésie, choisir un raccourcissement linéaire local aussi bas que possible, au moins aussi bas que 12% mais de préférence inférieur à 6%Après euthanasie l’animal, prélever le cœur de la cavité thoracique. Une fois le cœur récolté rincé, placez une aiguille de calibre 18 au-dessus de la valve aortique et fixez l’aiguille à une pompe à perfusion.
Perfuser le cœur avec 750 millilitres de paraformaldéhyde à 1%. Utilisez un couteau tranchant pour trancher le cœur en tranches d’un centimètre d’épaisseur et prélevez les échantillons de la zone de transfert de gènes en 4% de paraformaldéhyde et d’azote liquide. Conservez les échantillons pour les colorer dans du paraformaldéhyde à 4 % pendant 48 heures à quatre degrés Celsius.
L’efficacité de la thérapie génique a été analysée en mesurant la déformation circonférentielle, la fraction d’éjection et la perfusion myocardique par TEP 15O-eau. Les échantillons de tissus peuvent être prélevés directement dans la zone de transfert de gènes, en comparant le cœur à la carte électroanatomique. L’expression transgénique et l’angiogenèse thérapeutique ont été évaluées par analyse histologique immunitaire en analysant le nombre de cellules positives après coloration de la bêta-galactosidase et en analysant la zone capillaire myocardique, après coloration de la molécule d’adhésion plaquettaire / cellule endothéliale 1.
Il est important de confirmer la mise en place de l’endoprothèse goulot par angiographie et prélèvement d’échantillons dans la zone de transfert de gènes, ce qui pourrait être confirmé en comparant le cœur à la carte électroanatomique. Dans l’ensemble, il est crucial d’effectuer toutes les mesures de la manière la plus reproductible.
