組織損傷がない場合に頭痛に寄与する髄膜内でどのようなイベントが発生しますか?ラットにおける硬膜刺激モデルの以前の使用とは異なり、遺伝子改変マウスの広範なカタログの使用を可能にする。主な闘争は、頭蓋骨を注射器で触診することによって、ランドイド縫合糸と矢状縫合糸の交点を見つけることであろう。
まず、市販の内部カニューレと注入器を調整可能な溶融シリカプラスチックキャップで修正してマウス注入器を作成し、28ゲージガイドカニューレに挿入します。ノギスを使用して、注入器を曲げることなく注入器の溶融シリカプラスチックキャップを調整します。注入器の先端からシリカプラスチックキャップの端までの長さが6ミリメートルになるように注入器を調整します。
他のマウス系統のパイロット注射を行い、硬膜に正確に注入するように長さを調整します。次に、注入器の長端を8インチ以上のプラスチックチューブに取り付けて、5マイクロリットルの容積を保持する。チューブを挿入しながら、注入器にある金属部分とプラスチックストッパーの上部を完全にカバーし、気泡がラインに蓄積するのを防ぎます。
次に、マイクロシリンジを充填し、チューブのもう一方の端を10マイクロリットルのガラス製マイクロシリンジに取り付け、シリンジの金属部分にしっかりと密封します。次に、気泡形成を防ぐために、5マイクロリットルのPBSまたは合成間質液または他の任意のビヒクルでシリンジをバックフィルする。必要に応じて、ラインを車両であふれさせて、形成された気泡を消散させます。
あるいは、シリンジを予め充填し、接続した後、接続されたラインを通して流体を押し込む。車両充填ラインが効率的に作動したら、5マイクロリットルの溶液をハミルトンシリンジにロードします。マウスが完全に麻酔をかけられたら、滅菌眼科軟膏を目に塗布し、動物の頭を剃り、次にポビドンヨウ素とエタノールで皮膚を消毒する。
片手で動物の頭を固定し、もう片方の手で薬物を装填した注射器で注入器を持ちます。次いで、注入器を用いて、マウスの頭蓋骨上の矢状縫合糸および羊根状縫合糸の接合部を注意深くプローブし、位置特定し、および検証する。縫合糸が位置決めされ、注入器が所定の位置に収まったら、注入器が皮膚を貫通し、プラスチックストッパーまで接合部に落下するまで、注入器内をゆっくりと優しく前後に揺らし、6ミリメートルの注入器先端全体を接合部に挿入する。
次に、シリンジのプランジャーをゆっくりと押して、5マイクロリットルの流体を硬膜に排出します。試験日に、部屋に順応した後、それぞれのチャンバーからカップと一緒に1匹のマウスを取り外した。均等に分布した体重のためにカップを水平位置に保ちます, 不均等な重量分布は、動物の反応を変更または妨げる可能性があるため、.
マウスの入ったカップを、テストラックの下のテーブルに置かれた吸収パッドの上に置きます。次に、眼窩周囲フォンフライ試験のために、07グラムフォンフライフィラメントを目の間の顔の中心に置き、フィラメントに十分な圧力をかけてフォンフレイ毛をC字型の形成に曲げさせる。フィラメントの接触を約 3 ~ 5 秒間、またはマウスが頭部または足を使ってフィラメントをスワイプするまで維持します。
ディクソンアップダウン法に従うには、マウスがフィラメントに応答する場合は次の低重量フィラメントを適用し、それ以外の場合は、より高い重量フィラメントを適用します。この手順は、機械的に誘発された顔面過敏症に対する硬膜プロラクチンの効果を調べるために使用された。この研究の結果は、5マイクログラムの硬膜プロラクチンに応答して、雌性ICRマウスの顔面離脱閾値を有意に低下させることを実証した。
5マイクログラムのプロラクチンの10倍の低用量はまた、高用量のプロラクチンと同様に、顔面離脱閾値の低下を示した。プロラクチン注射は自発的な疼痛関連行動を生じ、それらはグリマスによって評価された。硬膜5マイクログラムのプロラクチンは、雌マウスにおいて有意なグリマシングを引き起こし、さらに雌片頭痛様行動における硬膜プロラクチンの明確な役割を実証したフォン・フレイフィラメントまたは顔面グリマスを用いた行動試験は、刺激が、傷害の不在下で、頭痛反応を引き起こすかどうかを決定する。
この技術は、頭蓋切除術およびその後の炎症によって引き起こされる警告を心配することなく、髄膜の炎症ベースのメカニズムを調査するために使用することができる。
