この方法は、片頭痛患者の主な苦情である羞明のための前臨床行動代理を提供する。この技術の主な利点は、検出が自動的に行われるため、非常に便利であることです。また、軽い嫌悪感や不安は、これらのテストを実施することによって区別することができます。
初日に、明暗アッセイ装置をオンにします。ライト強度を 27, 000 ルクスに設定します。ダークインサートを明暗室に入れます。
トラッキングソフトウェアを開き、新しいプロトコルを設定します。新しいプロトコル設定で、期間を 30 分に設定します。新しい分析設定で、期間ごとのデータビンを 300 秒に設定します。
新しいゾーン設定で、定義済みのゾーンを選択します。2 つ選択し、次に水平を選択します。チャンバーが録音のために水平方向に2つの等しいサイズのゾーンに分割されているかどうかを確認します。
試験に先立ち、マウスを試験室に1時間馴化させ、マウスの概日リズムを乱さないように室内を明るく保つ。明暗アッセイ用のすべての機器の電源がオンになっていることを確認し、マウスが試験室環境に完全に順応できるようにします。データ集録を選択し、マウスIDを入力してプロトコルを開始します。
引き出しを音減衰キュービクルの外側に引いて、明暗室と暗インサートにアクセスします。マウスをチャンバーのライトゾーンにそっと置き、引き出しをキュービクルの内側に押し込みます。ソフトウェアがマウスをすぐに検出し、アクティビティの記録を開始することを確認します。
30分後に録画が自動的に停止するのを待ちます。マウスをホームケージに戻します。アルコール臭の殺菌使い捨てワイプを使用してチャンバーと暗いインサートを清掃し、前のマウスが残した嗅覚の合図を根絶します。
4日目に、1日目に実行したすべてのステップを繰り返します。7日目に、1日目に行ったステップを繰り返すが、マウスが慣れるまでしか行わない。馴化後、CGRPを腹腔内にマウスに投与する。
その後、マウスを自宅のケージに戻します。30分後、プロトコルを再開し、前述のように明暗室でマウスを実行します。前述のようにチャンバーと暗いインサートを清掃します。
10 日目に、1 日目に実行したすべての手順を繰り返します。装置の電源を入れ、光強度を27,000ルクスに設定します。トラッキングソフトウェアを開き、前述のように新しいプロトコルを設定します。
新しいゾーン設定で、1 つを選択してから中央に続けます。周囲を 3.97 センチメートル、中央を 19.05 x 19.05 センチメートルに設定します。前に実証したように、マウスを試験室に慣れさせる。
マウスにCGRPを腹腔内に投与する。マウスを自宅のケージに戻します。30 分後、プロトコルを開始します。
引き出し引き出しを音減衰キュービクルの外側に引き出し、マウスをオープンフィールドチャンバーの中央にそっと置きます。引き出しをキュービクルの内側に押し込みます。マウスの行動を30分間追跡し、マウスを自宅のケージに戻します。
前のデモのように装置をクリーニングします。結果は、CGRPの腹腔内注射は、CD1およびC57ブラック6Jマウスにおける明暗アッセイにおいて明ゾーンで費やされる時間の持続時間を有意に減少させたが、CD1およびC57ブラック6Jマウスにおけるオープンフィールドアッセイにおいてマウスが中心で過ごした時間には影響しなかったことを明らかにした。CGRPによる処置はまた、マウスがダークゾーンで休む時間の量を増加させたが、CD1およびC57ブラック6Jマウスの両方において明ゾーンではそうではなかった。
後視床核におけるニューロンの光刺激は、対照ウイルス注射マウスと比較して、チャネルロドプシン-2注射マウスにおける明/暗アッセイにおいて、マウスが明ゾーンで過ごす持続時間の対応する減少をもたらした。暗ゾーンでは休息時間の増加が、ライトゾーンでは認められなかったが、チャネルロドプシン−2注射マウスの場合、対照ウイルス注入マウスと比較しても観察された。マウスを明暗室に入れるときは、できるだけ多くのストレスを避けるためにマウスを優しく扱う必要があることを覚えておくことが重要です。
この技術は、片頭痛および他の光恐怖症関連障害の根底にあるメカニズムを探求する道を開き、潜在的な治療法の前臨床的有効性をテストする。
