心臓弁移植は、抗凝固を必要とせずに体細胞成長が可能な耐久性のある心臓弁を提供する可能性を秘めた新しいタイプの移植として提案されています。この技術は実用的であり、心臓弁移植免疫生物学を研究するための以前の方法よりも簡単です。ラットを麻酔した後、解剖はさみを使用して、剣状突起から胸骨の切り欠きまで皮膚を切開する。
そして、心臓への最適なアクセスが達成されるまで、胸骨の両側、側方の肋骨を切断することによって胸骨摘出術を行う。左心房にヘパリンを注入する。仙骨化後、胸腺を切除して大きな血管の視覚化を改善します。
その後、上行大動脈でブロック上の心臓を無名動脈のレベルまで取り除きます。心臓切除術の直後にドナー心臓を滅菌ペトリ皿に入れた後、氷冷冷保存バッファー中で、鉗子とVannas Spring はさみを使用して、大動脈根だけが大動脈弁に近位にある1ミリメートルの心室袖口で残るまで心臓を解剖します。大動脈弁を開くには、左副鼻腔と非冠状動脈洞の間のバルサルバの洞を開くために縦方向に切断し、3つの小葉すべてを視覚化します。
各大動脈弁リーフレットを個別に切除するには、鈍い鉗子を使用してリーフレットの端をつかみ、Vannas Spring はさみを使用して、1つのコミスシュアから環状まで切り取り、次のコミスアシュアに向かってリーフレットを切除します。切除した小葉をレシピエントラットに移植する準備ができるまで氷冷保存緩衝液に保管するが、冷蔵保存から4時間以内にすべての小葉を移植する。レシピエントラットが完全に麻酔をかけられたら、加熱パッドで手術中ずっと体温を摂氏36〜38度に維持する。
次に、ラットを右側方リカンベント位置に置き、左腎臓にアクセスします。手術前にブプレノルフィンをレシピエントラットの皮下に投与する。そして、はさみを使用して、側面の皮膚を縦方向に1インチ切り込みます。
同様に、下にある腹壁を切開する。親指と人差し指を使用して、湾曲した鉗子を使用しながら背側および腹側に軽い圧力をかけます。腹部と皮膚の切開部を通して腎臓の尾軸を持ち上げます。
同様に腎臓の頭蓋端を外在化させる。あるいは、腎周囲脂肪を掴み、軽い張力で上に引っ張ることによって腎臓を外在化してもよい。外在化したら、温かい生理食塩水を腎臓に拭き取って腎臓をしっとりと保ちます。
嚢下ポケットを作成するには、まず、腎嚢が下にある実質と明確に区別できるように、1組の鈍い鉗子を使用して腎嚢に軽い圧力をかけることから始めます。同時に別の鈍い鉗子を使用して、カプセルを慎重につかみ、静かに上に引っ張ってカプセルに穴を開けます。鈍い鉗子で、大動脈弁リーフレットを収容するために約2ミリメートルのスペースが作られるまで切開部を延長する。
1組の鉗子で切開部の端を持ち上げ、鈍いプローブを腎嚢の下に進めながら、弁小葉よりわずかに大きい浅い嚢下ポケットを発達させる。取り出された大動脈弁の移植を開始するには、端の線維性カプセルを持ち上げて、大動脈小葉を鈍い鉗子で嚢下ポケットに進めます。切開部および腎嚢は開いたままにしておくことができる。
切開端に適用される対抗牽引を使用して、腎臓を解剖学的位置に静かに押し戻します。実行中の滅菌外科用縫合糸で腹部切開部を閉じ、ステープルで皮膚を閉じます。手術後、ラットを食物と水にアクセスできる加熱パッド上の清潔なケージに入れます。
必要に応じて、6〜12時間ごとにレシピエントラットにブプレノルフィンを投与し、痛みを和らげます。日常的な創傷治癒および痛みまたは苦痛の徴候を評価するために動物を毎日監視する。そして、手術の7〜10日後にホッチキスを外します。
代表的な画像は、実施のための腎嚢の下の大動脈弁小葉の位置を示す。そして、レシピエントラット内で3日、7日、28日後、移植された組織の検索と回収が容易になりました。大動脈弁小葉は、同系動物における異所性移植後も本来のアーキテクチャを保持していた。
アレルゲン性移植における免疫応答を比較するためのベースラインとしてのこのモデルの有用性を実証する。ヘマトキシリンおよびエオジン染色による組織学は、7日後の同系移植における弁小葉が構造的に無傷であり、浮腫性腫脹の徴候を有さないことを明らかにした。移植後の弁小葉の構造的完全性は、平滑筋アクチンおよびCD31に対する免疫組織化学によってさらに確認された。
大動脈弁の小葉は非常に繊細です。バルブを損傷することなく、それらを非常に慎重に取り扱うことが重要です。腎嚢下、心臓弁移植は、異所性心臓弁移植を簡素化する。
これにより、顕微手術能力が限られている研究者は、心臓弁移植の免疫生物学を探求することができます。
