大動脈バンディングのこの新しい技術は、より少ない変動とより高い再現性でマウスの圧力過負荷心肥大の誘発を可能にします。大動脈の周りに固定直径のゴムリングを配置すると、横方向大動脈の流速が一貫して増加し、再現性のある心肥大が発生します。この手順は、げっ歯類の麻酔と顕微手術の技術をすでに経験している人、またはガイドできる経験のある人がいる人が実行する必要があります。
まず、顕微鏡下でOリングをハサミまたはメスを使用して1回カットし、大動脈の周りに配置できるようにします。8-0で接続された針でカットに近い各リング側を突き刺します非吸収性縫合糸、および糸を引っ張ります。カットし、片側に2〜3センチメートル、反対側に2センチメートルを残して、最後のステップで大動脈の周りにOリングを固定します。
手術の前に、結紮助剤を取り、片方のリング側の糸の端を結紮助剤の穴に通します。Oリングが取り付けられたライゲーションエイドを脇に置いて配置します。麻酔をかけたマウスの左胸部の毛皮を剃ります。
次に、挿管前にマウスをイソフルラン充填チャンバーに戻し、十分な鎮静を行います。動物の体温を摂氏37度に維持するために、手術の前に加熱パッドをオンにします。加熱パッドを直腸プローブに接続して、マウスの体温を自動的に維持します。
加熱パッドの周りに輪ゴムを伸ばして、前歯をプレートに固定します。麻酔をかけたマウスを加熱パッドの仰臥位に置きます。動物の前歯の上に輪ゴムを置き、プレートの首を伸ばします。
気管内挿管のための気管の開口部の良好な視認性のために、喉に光源を集中させる。片手で口をそっと開き、もう一方の手で挿管補助具と小さな鉗子を配置します。舌をそっと動かして気管の開口部をきれいにします。
気管内チューブを気管に導入し、一方、挿管補助具を保持し続けます。気管内チューブの位置を3方向活栓を介してマウスの人工呼吸器に接続し、正しい気管内チューブの位置を確認します。製造元の指示に従って、適切な換気を監視します。
足指挟み反射チェックで十分な麻酔深度を確認します。手術中の乾燥を避けるために、眼科用軟膏を目に塗ります。市販の消毒液を使用して手術部位を消毒します。
はさみを使用して、剣状突起と左腋窩の間の線の中央に0.5〜1センチメートルの長さの皮膚切開を行います。鉗子を使用して筋肉層を下にある肋骨から分離し、2つの5ミリメートルの開創器を切開部に配置して胸郭を露出させます。左開胸術を開始するには、マイクロスプリングハサミを使用して、第2肋骨と第3肋骨の間の肋間筋を1〜2ミリメートル切開します。
胸腔を開き、45度の角度の鉗子で切開を広げます。胸部開創器を3本入れて胸腔を開き、視認性を向上させます。大動脈弓を露出させるには、細かい先端の45度の角度の鉗子で胸腺と脂肪組織をアーチから持ち上げて穏やかに分離してみてください。
片手で45度の角度の鉗子で大動脈弓を露出させます。一方、ライゲーション補助剤に接続されたOリングを、先ほど取り付けた片側のネジ山を介して配置します。大動脈弓の下の結紮補助具を使用して、腕頭動脈と左総頸動脈の間の横大動脈の頭蓋側に尾から糸を通します。
結紮補助具と大動脈弓の間の両方の糸を鉗子で慎重に取ります。結紮補助具を取り外し、両側の糸を引っ張って、Oリングをアーチの周りにそっと配置します。位置決めが成功したら、Oリングを糸と外科用結び目で固定します。
両側で開かないように、追加の結び目を作ります。Oリングの結紮後、3つの胸部開創器を切開部から取り外します。必要に応じて、胸部を温かい0.9%等張塩溶液で満たして、胸部から残留空気を取り除きます。
縫合のために胸郭切開部を露出させるには、2つの5ミリメートルの開創器をもう一度取って皮膚を側面に保持します。2つまたは3つの6-0非吸収性縫合糸で胸部を閉じます。2つの開創器を取り外し、3〜5本の4-0吸収性縫合糸で皮膚を閉じます。
次に、イソフルランとモニターをオフにします。人工呼吸器の流出を2秒間つまんで、肺を再膨張させます。手術の1日後、狭窄の最大流速を測定し、超音波を使用して狭窄を確認します。
測定には、超音波システムと30メガヘルツの周波数のトランスデューサープローブを備えた心エコー検査を使用します。麻酔をかけた動物を仰臥位の加熱パッドに置き、加熱パッドを直腸プローブに接続して体温を摂氏37度に維持し、4つのマウス足センサーを使用してECGで心拍数を監視します。正常に実行されたOリング大動脈バンディングは、超音波によって測定されるように狭窄上の流速を増加させる。
この測定では、トランスデューサーヘッドを胸骨傍右側に配置し、2次元イメージングによって大動脈弓を局在化させます。カラードップラーを使用して大動脈の血流を視覚化し、狭窄上の血流速度をパルス波ドップラーで測定します。左右の総頸動脈を2次元イメージングで可視化します。
トランスデューサーヘッドを首の左右に45度の角度で水平に配置し、パルス波ドップラーを使用して血流速度を決定します。大動脈弁狭窄症の誘導の成功は、パルス波ドップラー超音波によって測定された大動脈の狭窄上の血流速度の増加によって見られました。さらに、左右の総頸動脈間の血流速度比をOリング大動脈バンディングの機能マーカーとして決定した。
術後2週間で左室後壁と拡張期の脳室内中隔径の増加を認めた.さらに、心機能の進行性の悪化は、左心室駆出率の低下を測定することによって文書化されました。.大動脈弓の周りにOリングを固定しながら、最適な結果を得るには、両側のリングを結び目で閉じることが重要です。
