この技術は、マウスの脳脊髄液またはCSFグルコースレベルを、血糖値に影響を与えることなく増加させます。これは、動物の脳機能に対する高CSFグルコースレベルの直接的な影響を調査するのに役立ちます。この技術は、認知機能障害に対する高CSFグルコースの神学的役割を探るための動物モデルを確立することができる。
認知機能を改善するための新しい分子標的の発見につながります。この方法はまた、高いCSFグルコースレベルがマウスにおける神経変性疾患の表現型を媒介するのに十分であるかどうかを決定するのに役立つ。カニューレのセットアップの適切な組み立てとプライミング、および正しい座標での脳内のカニューレの挿入に注意を払う必要があります。
浸透圧ミニポンプ移植の手術を開始するには、麻酔をかけたマウスを固定装置固定装置フレームに置きます。動物の頭を切歯バーに合わせます。麻酔を維持するために鼻コーンで鼻を覆い、1.5〜2%の割合でイソフルオランの流れを鼻コーンに接続します体温を維持するためにマウスの下に加熱パッドを置きます。
手術部位を消毒し、切開を行った後、ヘラで頭蓋骨の表面を露出させ、もしあれば、綿の先端で血液を拭きます。大量に出血する場合は焼灼剤を使用してください。3%過酸化水素に浸した綿の先端でこすり、頭蓋縫合糸を露出させます。
顕微鏡下で作業し、ブレグマとラムダをメモして頭蓋骨の座標をナビゲートします。ブレグマですべての座標をゼロに設定します。電気ドリルを注意深く使用し、硬膜を破裂させずに、ブレグマの後方0.5ミリメートル、正中線の横方向1ミリメートルの座標に右に向かって穴を開けます。
止血材を挿入し、軽く開閉してミニポンプ用のポケットを作ります。ポンプをフローモジュレーターの先端から保持し、切開した皮膚を通して作成されたポケットに押し込みます。カニューレの下側に接着剤を塗布し、カニューレホルダーに固定します。
カニューレが詰まっておらず、溶液が適切に流れていることを確認してください。次に、頭蓋骨の表面に対して2ミリメートル腹側のドリル穴を通してカニューレをゆっくりと下げます。接着剤が固まるまで、少なくとも5分間そのままにしておきます。
はさみの助けを借りて、カニューレの上部をクリップして、頭蓋骨の表面から外れないようにします。カニューレを歯科用セメントの層で覆い、追加のサポートを行います。脳脊髄液またはCSF収集の場合は、適切に麻酔されたマウスを定位固定装置フレームに置きます。
前に示したように、頭をフレームに固定した後、ノブを回して、鼻が下を向くように頭を傾けます。手術部位を消毒して切開した後、マウスの体からサポートを外し、首が背側に完全に伸びるようにマウスを垂直に休ませます。湾曲した鈍い鉗子を使用して、正中線から後頸部の筋肉をそっと二等分して、小さな窓を作ります。
次に、濡れた綿の先端アプリケーターを使用して、首の筋肉を正中線から末梢にそっと移動させます。大槽が透明な硬膜を持つ三角形の窓として露出しているかどうかを観察します。マイクロマニピュレータアセンブリをマウスの隣の固定装置フレームに置き、毛細管の先端が表面に触れないようにします。
セットアップを妨げることなく、キャピラリーチップをそっと壊します。マイクロマニピュレーターの対応するノブを回してゆっくりと位置合わせし、毛細管先端を槽マグナに向かって動かします。毛細血管の先端が大槽膜に触れると、いくらかの抵抗が感じられます。
膜の血管を傷つけないように注意しながら、ノブの助けを借りて先端を膜に非常にゆっくりと押し付けます。膜が貫通すると、CSFは負の毛細管圧のために一度に毛細管に流入します。約10マイクロリットルのCSFがキャピラリーに集まるまで、セットアップを数分間放置します。
シリンジからキャピラリーを慎重に取り外し、マイクロキャップ電球ディスペンサーに取り付けます。電球を押して、CSFを滅菌マイクロ遠心チューブに移します。マウスの下にサポートを置き、脳定位固定ノブを回して頭を水平にします。
ナイロン縫合糸で傷を閉じます。マウスを装置から取り外す前に、300マイクロリットルの滅菌生理食塩水を皮下注射する。手術後約7〜10日で縫合糸を取り除く時期になるまで、動物に術後ケアを与えます。
術後10日目に採取したCSFは、50%グルコースを注入したマウスでは、CSFを注入したマウスと比較して、グルコースレベルが約6倍に増加した。しかし、血糖値は群間で異ならなかった。脳内のカニューレを下げながら、カニューレを後ろに引っ込めて、CSFが穴から出てくるかどうかを確認します。
また、大槽を正しく識別し、CSFの血液による汚染を防ぐことも重要です。この技術は、血液脳関門を通過できない薬物を送達して、脳機能への影響をテストするためにも使用できます。糖尿病の動物モデルは非常に限られており、末梢環境におけるグルコース恒常性を乱します。
しかし、このモデルは、神経機能に対するグルコース調節における脳特異的な変化を調査するのに役立ちます。
