Bu teknik, kan şekeri konsantrasyonlarını etkilemeden farelerde Beyin Omurilik Sıvısı veya BOS glikoz seviyelerini arttırır. Bu, yüksek BOS glikoz seviyelerinin hayvanın beyin fonksiyonu üzerindeki doğrudan etkilerini araştırmaya yardımcı olur. Bu teknik, yüksek BOS glikozunun bilişsel işlev bozukluğu üzerindeki teolojik rolünü araştırmak için hayvan modelleri oluşturabilir.
Bilişsel işlevi geliştirmek için yeni moleküler hedeflerin keşfine yol açar. Yöntem ayrıca, yüksek BOS glikoz seviyelerinin farelerde nörodejeneratif bozuklukların fenotiplerine aracılık etmek için yeterli olup olmadığını belirlemeye yardımcı olacaktır. Kanül kurulumunun uygun şekilde monte edilmesine ve astarlanmasına ve kanülün beyne doğru koordinatlarda yerleştirilmesine dikkat edilmelidir.
Ozmotik Minipump İmplantasyonu ameliyatına başlamak için anestezi uygulanan fareyi stereotaksik çerçeveye yerleştirin. Hayvanın kafasını kesici çubuğa takın. Anesteziyi korumak için burnu burun konisi ile örtün ve izofloran akışını burun konisine %1,5 ila 2 oranında bağlayınVücut ısısını korumak için farenin altına bir ısıtma yastığı yerleştirin.
Cerrahi bölgeyi dezenfekte ettikten ve bir kesi yaptıktan sonra kafatası yüzeyini bir spatula ile açığa çıkarın ve varsa kanı pamuklu uçlarla silin. Bol miktarda kanama varsa bir koterizatör kullanın. Kraniyal dikişleri açığa çıkarmak için% 3 hidrojen peroksit içine batırılmış bir pamuk ucu ile ovalayın.
Mikroskop altında çalışırken, kafatası koordinatlarında gezinmek için bregma ve lambda'yı not alın. Bregma'da tüm koordinatları sıfıra ayarlayın. Elektrikli bir matkabı dikkatlice ve kırılmadan kullanarak dura mater, bregma'nın 0,5 milimetre arka tarafında ve sağa doğru orta çizgiye 1 milimetre yanal koordinatlarda bir delik açın.
Bir hemostat yerleştirin ve mini pompa için bir cep yapmak üzere yavaşça açıp kapatın. Pompayı akış modülatörünün ucundan tutarak, kesilmiş deriden oluşturulan cebe doğru itin. Kanülün alt tarafına biraz yapıştırıcı uygulayın ve kanül tutucusuna sabitleyin.
Kanülün tıkanmadığından ve çözeltinin düzgün aktığından emin olun. Daha sonra kanülü delinmiş delikten yavaşça indirin, kafatası yüzeyine iki milimetre ventral. Yapıştırıcının katılaşmasını sağlamak için en az beş dakika orada bırakın.
Makas yardımıyla, kafatası yüzeyinden yerinden çıkmamasını sağlamak için kanülün üst kısmını klipsleyin. Ekstra destek için kanülü bir diş çimentosu tabakası ile örtün. Beyin omurilik sıvısı veya BOS toplanması için, uygun şekilde uyuşturulmuş fareyi stereotaksik çerçeveye yerleştirin.
Kafayı çerçeveye sabitledikten sonra, daha önce gösterildiği gibi, kafayı burun aşağı bakacak şekilde eğmek için düğmeleri döndürün. Cerrahi bölgeyi dezenfekte ettikten ve bir kesi yaptıktan sonra, desteği fare gövdesinden çıkarın ve farenin dikey olarak dinlenmesine izin verin, böylece boyun dorsal olarak tamamen uzar. Kavisli künt forsepsler kullanarak, küçük bir pencere oluşturmak için arka boyun kaslarını orta hattan hafifçe ikiye bölün.
Ardından, boyun kaslarını orta hattan çevreye nazikçe değiştirmek için ıslak bir pamuk ucu aplikatörü kullanın. Cisterna magna'nın şeffaf bir dura membranı olan üçgen bir pencere olarak açığa çıkıp çıkmadığını gözlemleyin. Kılcal ucun herhangi bir yüzeye temas etmemesini sağlarken mikro manipülatör tertibatını farenin yanındaki stereotaksik çerçeveye yerleştirin.
Kurulumu bozmadan kılcal ucu yavaşça kırın. Mikro manipülatördeki ilgili düğmeleri yavaşça hizalamak için döndürün ve kılcal ucu cisterna magna'ya doğru hareket ettirin. Kılcal uç cisterna magna membranına dokunduğunda bir miktar direnç hissedilir.
Zardaki herhangi bir kan damarına zarar vermemeye dikkat ederek düğmelerin yardımıyla ucu çok yavaş bir şekilde membrana doğru itin. Membran delindikçe, BOS negatif kılcal basınç nedeniyle bir kerede kılcal damar içine akar. Kılcal damarda yaklaşık 10 mikrolitre BOS toplanana kadar kurulumu birkaç dakika bekletin.
Kılcal damarı şırıngadan dikkatlice çıkarın ve bir mikrokap ampul dağıtıcısına takın. CSF'yi steril bir mikro santrifüj tüpüne aktarmak için ampule basın. Desteği farenin altına yerleştirin ve kafayı düzleştirmek için stereotaksik düğmeleri döndürün.
Yarayı naylon dikişlerle kapatın. Fareyi cihazdan çıkarmadan önce deri altından 300 mikrolitre steril salin enjekte edin. Ameliyattan yaklaşık 7 ila 10 gün sonra, dikişleri çıkarma zamanı gelene kadar hayvanlara ameliyat sonrası bakım verin.
Ameliyattan 10 gün sonra toplanan BOS, BOS ile aşılanan farelere kıyasla% 50 glikoz ile aşılanan farelerde glikoz seviyesinde yaklaşık altı kat artış gösterdi. Bununla birlikte, kan şekeri seviyeleri gruplar arasında farklı değildi. Beyindeki kanülü indirirken, geri çekin ve BOS'un delikten çıkıp çıkmadığını kontrol edin.
Cisterna magna'yı doğru bir şekilde tanımlamak ve BOS'un kanla kontaminasyonunu önlemek de hayati önem taşır. Bu teknik, beyin fonksiyonu üzerindeki etkisini test etmek için kan-beyin bariyerini geçemeyen herhangi bir ilacı vermek için de kullanılabilir. Çok sınırlı sayıda diyabet hayvan modeli vardır ve periferik ortamda glikoz homeostazını bozarlar.
Bununla birlikte, bu model, nöral fonksiyon üzerindeki glikoz regülasyonundaki beyne özgü değişiklikleri araştırmaya yardımcı olur.
