이 기술은 혈당 농도에 영향을 주지 않으면서 생쥐의 뇌척수액 또는 CSF 포도당 수치를 증가시킵니다. 이것은 높은 CSF 포도당 수치가 동물의 뇌 기능에 미치는 직접적인 영향을 조사하는 데 도움이 됩니다. 이 기술은 인지 기능 장애에 대한 더 높은 CSF 포도당의 신학적 역할을 탐구하기 위해 동물 모델을 확립할 수 있습니다.
인지 기능을 향상시키기 위한 새로운 분자 표적의 발견으로 이어집니다. 이 방법은 또한 높은 CSF 포도당 수치가 생쥐에서 신경 퇴행성 장애의 표현형을 매개하기에 충분한 지 여부를 결정하는 데 도움이 될 것입니다. 캐뉼라 설정의 적절한 조립 및 프라이밍과 올바른 좌표로 뇌에 캐뉼라를 삽입하는 데 주의를 기울여야 합니다.
삼투압 미니펌프 이식 수술을 시작하려면 마취된 마우스를 정위 프레임에 놓습니다. 동물의 머리를 앞니 막대에 맞 춥니 다. 마취를 유지하기 위해 코 콘으로 코를 덮고 이소 플루오란 흐름을 코 콘에 1.5-2 %의 속도로 연결하십시오마우스 아래에 가열 패드를 놓아 체온을 유지하십시오.
수술 부위를 소독하고 절개를 한 후 주걱으로 두개골 표면을 노출시키고 면봉으로 혈액을 닦아냅니다. 출혈이 심한 경우 소작제를 사용하십시오. 3% 과산화수소에 적신 면봉으로 문질러 두개골 봉합사를 노출시킵니다.
현미경으로 작업하면서 브레그마와 람다를 기록하여 두개골 좌표를 탐색합니다. bregma에서 모든 좌표를 0으로 설정합니다. 전기 드릴을 조심스럽게 사용하여 경막을 파열하지 않고 브레그마 뒤쪽 0.5mm, 오른쪽 정중선에서 측면 1mm 좌표에 구멍을 뚫습니다.
지혈제를 넣고 부드럽게 열고 닫아 미니 펌프용 포켓을 만듭니다. 유량 변조기의 끝에서 펌프를 잡고 절개 된 피부를 통해 생성 된 포켓으로 밀어 넣습니다. 캐뉼라 밑면에 접착제를 바르고 캐뉼라 홀더에 고정합니다.
캐뉼라가 막히지 않았는지, 용액이 제대로 흐르고 있는지 확인하십시오. 그런 다음 뚫린 구멍을 통해 캐뉼라를 천천히 내리고 복부에서 두개골 표면까지 2 밀리미터를 내립니다. 접착제가 굳을 수 있도록 최소 5분 동안 그대로 두십시오.
가위를 사용하여 캐뉼라 상단을 잘라 두개골 표면에서 떨어지지 않도록 합니다. 추가 지원을 위해 캐뉼라를 치과용 시멘트 층으로 덮으십시오. 뇌척수액 또는 CSF 수집의 경우 적절하게 마취된 마우스를 정위 프레임에 놓습니다.
앞에서 설명한 대로 머리를 프레임에 고정한 후 손잡이를 돌려 코가 아래를 향하도록 머리를 기울입니다. 수술 부위를 소독하고 절개한 후 마우스 본체에서 지지대를 제거하고 마우스를 수직으로 눕혀 목이 등쪽으로 완전히 펴지도록 합니다. 구부러진 뭉툭한 집게를 사용하여 정중선에서 뒤쪽 목 근육을 부드럽게 이등분하여 작은 창을 만듭니다.
그런 다음 젖은 면 팁 어플리케이터를 사용하여 목 근육을 정중선에서 주변으로 부드럽게 옮깁니다. cisterna magna가 투명한 경막 막이있는 삼각형 창으로 노출되어 있는지 관찰하십시오. 마이크로 매니퓰레이터 어셈블리를 마우스 옆의 정위 프레임에 놓고 모세관 팁이 표면에 닿지 않도록 합니다.
설정을 방해하지 않고 모세관 팁을 부드럽게 부수십시오. 마이크로 매니퓰레이터의 해당 손잡이를 돌려 천천히 정렬하고 모세관 끝을 수조 마그나 쪽으로 이동합니다. 모세관 끝이 수조 마그나 막에 닿으면 약간의 저항이 느껴집니다.
멤브레인의 혈관이 손상되지 않도록 주의하면서 손잡이를 사용하여 팁을 멤브레인에 매우 천천히 밀어 넣습니다. 멤브레인이 뚫리면 CSF는 음의 모세관 압력으로 인해 한 번에 모세관으로 흐릅니다. 약 10마이크로리터의 CSF가 모세관에 모일 때까지 몇 분 동안 설정을 그대로 두십시오.
주사기에서 모세관을 조심스럽게 제거하고 마이크로캡 전구 디스펜서에 부착합니다. 전구를 눌러 CSF를 멸균 마이크로 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 지지대를 마우스 아래에 놓고 정위 손잡이를 돌려 헤드의 수평을 맞춥니다.
나일론 봉합사로 상처를 봉합하십시오. 마우스를 장치에서 제거하기 전에 300 마이크로 리터의 멸균 식염수를 피하 주사하십시오. 수술 후 약 7-10 일 후에 봉합사를 제거 할 때까지 동물에게 수술 후 관리를하십시오.
수술 후 10 일 동안 수집 된 CSF는 CSF가 주입 된 마우스에 비해 50 % 포도당이 주입 된 마우스에서 포도당 수치가 약 6 배 증가한 것으로 나타났습니다. 그러나 혈당 수치는 그룹간에 차이가 없었습니다. 뇌의 캐뉼라를 낮추면서 다시 집어넣고 CSF가 구멍에서 나오는지 확인하십시오.
또한 cisterna magna를 정확하게 식별하고 혈액으로 CSF의 오염을 방지하는 것이 중요합니다. 이 기술은 또한 뇌 기능에 미치는 영향을 테스트하기 위해 혈액-뇌 장벽을 통과할 수 없는 모든 약물을 전달하는 데 사용할 수 있습니다. 당뇨병의 동물 모델은 매우 제한되어 있으며 말초 환경에서 포도당 항상성을 방해합니다.
그러나 이 모델은 신경 기능에 대한 포도당 조절의 뇌 특정 변화를 조사하는 데 도움이 됩니다.
