טכניקה זו מגבירה את נוזל המוח השדרה או רמות גלוקוז CSF בעכברים מבלי להשפיע על ריכוז הגלוקוז בדם שלהם. זה עוזר לחקור את ההשפעות הישירות של רמות גלוקוז גבוהות CSF על תפקוד המוח של החיה. טכניקה זו יכולה לבסס מודלים של בעלי חיים כדי לחקור את התפקיד התיאולוגי של גלוקוז CSF גבוה יותר על תפקוד קוגניטיבי.
מה שהוביל לגילוי מטרות מולקולריות חדשות לשיפור התפקוד הקוגניטיבי. השיטה גם תסייע לקבוע אם רמות גלוקוז גבוהות של CSF מספיקות כדי לתווך פנוטיפים של הפרעות נוירודגנרטיביות בעכברים. יש לשים לב להרכבה והכנה נכונה של מערך הצינורית והחדרת הצינורית במוח בקואורדינטות הנכונות.
כדי להתחיל את הניתוח להשתלת מיני-משאבה אוסמוטית, הניחו את העכבר המורדם על המסגרת הסטריאוטקסית. התאימו את ראש בעל החיים למוט החותכת. כסו את האף עם חרוט האף כדי לשמור על ההרדמה וחברו את זרימת האיזופלואור לקונוס האף בקצב של 1.5% עד 2% הניחו כרית חימום מתחת לעכבר כדי לשמור על טמפרטורת הגוף.
לאחר חיטוי אזור הניתוח וביצוע חתך לחשוף את פני הגולגולת עם מרית לנגב את הדם, אם בכלל, עם קצות כותנה. השתמש בצורבי אם אתה מדמם בשפע. שפשפו עם קצה כותנה טבול במי חמצן 3% כדי לחשוף את התפרים הגולגולתיים.
בעבודה תחת מיקרוסקופ, שימו לב לברגמה ולמבדה כדי לנווט בקואורדינטות הגולגולת. הגדר את כל הקואורדינטות לאפס בברגמה. באמצעות מקדחה חשמלית בזהירות וללא קרע את הדורה מאטר ליצור חור בקואורדינטות 0.5 מילימטר אחורי לברגמה ו 1 מילימטר לרוחב לקו האמצע לכיוון ימין.
הכנס hemostat ולפתוח בעדינות ולסגור אותו כדי ליצור כיס עבור משאבת mini. החזקת המשאבה מקצה אפנן הזרימה דוחפת אותה דרך העור החתוך לתוך הכיס שנוצר. מורחים מעט דבק על החלק התחתון של הצינורית, ומקבעים אותו במחזיק הצינורית.
יש לוודא שהצינורית אינה סתומה והתמיסה זורמת כראוי. לאחר מכן מורידים את הצינורית באיטיות דרך החור שנקדח, שני מילימטרים גחונים אל פני הגולגולת. השאירו אותו שם לפחות חמש דקות כדי לאפשר לדבק להתמצק.
בעזרת מספריים, חתכו את החלק העליון של הצינורית כדי לוודא שהיא לא תזוז משטח הגולגולת. כסו את הצינורית בשכבה של מלט דנטלי לתמיכה נוספת. עבור נוזל מוחי או אוסף CSF, מקם את העכבר המרדים כראוי על המסגרת הסטריאוטקסית.
לאחר קיבוע הראש על המסגרת, כפי שהודגם קודם לכן, סובב את הידיות כדי להטות את הראש כך שהאף פונה כלפי מטה. לאחר חיטוי אזור הניתוח וביצוע חתך להסיר את התמיכה מגוף העכבר ולתת לעכבר לנוח אנכית כך הצוואר הוא מוארך לחלוטין גבי. בעזרת מלקחיים קהים מעוקלים, חתכו בעדינות את שרירי הצוואר האחוריים מקו האמצע ליצירת חלון קטן.
לאחר מכן השתמשו באפליקטור קצה כותנה רטוב כדי להזיז בעדינות את שרירי הצוואר מקו האמצע לפריפריה. שימו לב אם ה-cisterna magna חשוף כחלון משולש עם קרום דורה שקוף. הנח את מכלול המיקרו מניפולטור על המסגרת הסטריאוטקסית שליד העכבר תוך הבטחה שקצה הנימים לא ייגע בשום משטח.
שברו בעדינות את קצה הנימים מבלי להפריע להתקנה. סובב את הידיות המתאימות על מניפולטור המיקרו כדי ליישר לאט ולהזיז את קצה הנימים לכיוון מגנה cisterna. התנגדות מסוימת מורגשת ברגע שקצה הנימים נוגע בקרום cisterna magna.
לאט מאוד לדחוף את הקצה כנגד הממברנה בעזרת הידיות נזהר לא לפגוע בכלי דם כלשהם בקרום. כאשר הממברנה מנוקבת, CSF זורם לתוך הנימים בבת אחת עקב לחץ נימי שלילי. השאירו את ההתקנה למשך מספר דקות עד כ 10 מיקרוליטר של CSF נאסף נימים.
בזהירות להסיר את הנימים מן המזרק ולצרף אותו למתקן נורה microcap. לחץ על הנורה כדי להעביר את CSF לתוך צינור מיקרו צנטריפוגה סטרילי. מקם את התמיכה מתחת לעכבר וסובב את הידיות הסטריאוטקסיות כדי ליישר את הראש.
סוגרים את הפצע עם תפרים בניילון. להזריק 300 מיקרוליטר של מלוחים סטריליים תת עורית לפני הסרת העכבר מן המנגנון. תן טיפול לאחר הניתוח לבעלי החיים עד שהגיע הזמן להסיר את התפרים, כ 7 עד 10 ימים לאחר הניתוח.
CSF שנאסף 10 ימים לאחר הניתוח הראה עלייה של בערך פי שישה ברמת הגלוקוז בעכברים, עם 50% גלוקוז בהשוואה לזה בעכברים עם CSF. עם זאת, רמות הגלוקוז בדם לא היו שונות בין הקבוצות. תוך כדי הורדת הצינורית במוח, משכו אותה לאחור ובדקו אם CSF יוצא מהחור.
כמו כן חיוני לזהות נכונה cisterna magna ולמנוע זיהום של CSF עם דם. טכניקה זו יכולה לשמש גם כדי לספק כל תרופה שאינה מסוגלת לחצות את מחסום הדם-מוח כדי לבחון את השפעתה על תפקוד המוח. יש מספר מוגבל מאוד של מודלים של בעלי חיים של סוכרת, והם מפריעים להומאוסטזיס גלוקוז בסביבה הפריפריאלית.
מודל זה, לעומת זאת, מסייע לחקור שינויים ספציפיים במוח בוויסות גלוקוז על התפקוד העצבי.
