渗透压微型泵植入增加小鼠脑脊液中葡萄糖浓度

该技术增加小鼠的脑脊液或脑脊液葡萄糖水平，而不影响其血糖浓度。这有助于研究高脑脊液葡萄糖水平对动物大脑功能的直接影响。该技术可以建立动物模型来探索较高的脑脊液葡萄糖对认知功能障碍的神学作用。

导致发现新的分子靶点以改善认知功能。该方法还将有助于确定高脑脊液葡萄糖水平是否足以介导小鼠神经退行性疾病的表型。必须注意套管设置的正确组装和启动，并将套管以正确的坐标插入大脑。

要开始渗透微型泵植入手术，请将麻醉小鼠放在立体定位框架上。将动物的头部放在门牙杆上。用鼻锥盖住鼻子以维持麻醉，并以1.5至2%的速率将异氟烷流连接到鼻锥，在鼠标下方放置加热垫以保持体温。

消毒手术区域并切开后，用刮刀露出颅骨表面，并用棉签擦拭血液（如果有）。如果大量出血，请使用烧灼器。用蘸有 3% 过氧化氢的棉尖擦拭，露出颅缝线。

在显微镜下工作，注意前膛和λ以导航头骨坐标。在布雷格玛处将所有坐标设置为零。小心地使用电钻，不要破坏硬脑膜，在距前方0.5毫米的坐标处打一个孔，向右向后方至中线横向1毫米处打一个孔。

插入止血器并轻轻打开和关闭它，为迷你泵做一个口袋。从流量调节器的尖端握住泵，将其通过切开的皮肤推入创建的口袋中。在套管的底部涂上一些胶水，然后将其固定在套管支架中。

确保套管没有堵塞并且溶液正常流动。然后将套管缓慢地通过钻孔降低，腹侧到颅骨表面两毫米。将其放置至少五分钟，让胶水凝固。

在剪刀的帮助下，夹住套管的顶部，确保它不会从颅骨表面脱落。用一层牙科水泥覆盖套管以获得额外的支撑。对于脑脊液或脑脊液收集，将适当麻醉的小鼠放在立体定位框架上。

如前所述，将头部固定在框架上后，旋转旋钮以倾斜头部，使头部朝下。对手术区域进行消毒并切开切口后，从小鼠身体上取下支撑物，让小鼠垂直休息，使颈部完全向背侧伸展。使用弯曲的钝钳，将颈部后部肌肉与中线轻轻平分，以创建一个小窗口。

然后使用湿棉头涂抹器将颈部肌肉从中线轻轻移位到外围。观察水池是否暴露为具有透明硬脑膜的三角形窗口。将微型机械手组件放在鼠标旁边的立体定位框架上，同时确保毛细管尖端不接触任何表面。

轻轻地折断毛细管尖端，不要干扰设置。旋转微型机械手上的相应旋钮以缓慢对齐，并将毛细管尖端移向大池。一旦毛细管尖端接触大池膜，就会感觉到一些阻力。

在旋钮的帮助下非常缓慢地将尖端推到膜上，小心不要损坏膜中的任何血管。当膜被刺穿时，由于毛细管负压，脑脊液立即流入毛细血管。将设置放置几分钟，直到毛细血管中收集大约 10 微升的 CSF。

小心地从注射器中取出毛细管并将其连接到微型帽灯泡分配器上。按压灯泡将脑脊液转移到无菌微量离心管中。将支架放在鼠标下方并旋转立体定位旋钮以调平头部。

用尼龙缝合线缝合伤口。在将鼠标从装置中取出之前，皮下注射300微升无菌盐水。对动物进行术后护理，直到需要移除缝合线，大约在手术后 7 到 10 天。

手术后10天收集的脑脊液显示，与注入脑脊液的小鼠相比，注入50%葡萄糖的小鼠的葡萄糖水平增加了约6倍。然而，两组之间的血糖水平没有差异。在降低大脑中的套管时，将其缩回并检查脑脊液是否从孔中出来。

正确识别大池和防止血液污染脑脊液也很重要。这种技术也可用于输送任何无法穿过血脑屏障的药物，以测试其对大脑功能的影响。糖尿病的动物模型数量非常有限，它们扰乱了周围环境中的葡萄糖稳态。

然而，该模型有助于研究大脑葡萄糖调节对神经功能的特定变化。