この研究は、中国国家自然科学基金会(助成金第82270352号)、北京研究病棟建設臨床研究プロジェクト(2022-YJXBF-04-03)、国家高レベル病院臨床研究資金(2022-NHLHCRF-YSPY-01)、Capital's Founds for Health Improvement and Research(健康改善研究のための資本財団)(第2022-1-4062号)、National Key Clinical Specialty Discipline Construction Program(助成金第2020-QTL-009号)、中国心臓病学会財団(No.CSCF2021B02)。

すべての実験は、北京大学の動物管理および使用委員会によって承認されました。本研究では、8-12週齢の雄C57マウスを使用しました。動物は商業的な供給源から入手しました( 資料の表を参照)。
1.動物の調理
<ol><li>脱毛クリームを使用して、胸部から髪を取り除きます( 材料の表を参照)。次に、手順2に続いて超音波画像の取得に進みます。</li>
</ol>2. IR手術前の超音波画像診断
<ol><li>マウスをイソフルラン誘導チャンバー( 材料の表を参照)に入れてマウスを麻酔し、1.5〜2.0 L / min O2 の流れで1.5%の濃度でイソフルラン送達を開始します。</li>
	<li>麻酔をかけたマウスを生理学的モニタリングプラットフォーム(超音波システムのイメージングプラットフォーム、 材料の表を参照)上の仰臥位に配置します。生理学的モニタリングテーブルの銅シートに少量の導電性ゲルを塗布し、その上にマウスの足を低粘着テープで固定して、ECGと呼吸に関する生理学的情報を取得します。内蔵のウォーミングプラットフォームを使用して、体温を37〜38°Cに保ちます。 注:ガス麻酔器の制御スイッチをチャンバーからマスクに切り替え、この間、麻酔薬の投与量を1.5%に一定に保ちます。この時点でのマウスの心拍数は、約350〜450拍/分である必要があります。</li>
	<li>乾燥を防ぐために、イメージングの前に眼科用獣医軟膏を目に塗布します。.</li>
	<li>40 MHzリニアプローブ9 (マウス用MS550プローブなど)を使用して経胸壁心エコー検査を行います(図1A)。 注:超音波装置にはMS550プローブが装備されています。</li>
	<li>超音波透過ジェル( 材料の表を参照)をたっぷりと塗布して、最適な画質を確保します。</li>
	<li>プローブとプラットフォームの位置を調整して、修正された胸骨傍長軸(PLAX)を形成します view9 (図1A)Bモードで左前下行動脈(LAD)を検査します。簡単に言うと、傍胸骨長軸ビューを使用して、プラットフォームを横方向に整列させ、プローブとプラットフォームの間に小さな角度で配置して心臓を画像化します。</li>
	<li>Bモードで適切な心臓セクションを見つけ、タッチスクリーンで カラードップラー をアクティブにします(図1B)。LAD(白い矢印)は、左心室壁内で識別できます(図1B)。リアルタイムの赤色は、血流の方向(つまり、血流がプローブに向かっている)を示します。 注:X軸を調整することにより、カラードップラーは、この画像ウィンドウ内で完全なLAD(大動脈洞から遠位枝部位まで)を視覚化できます。</li>
	<li>プローブを少し動かして正しい位置を見つけ、肺静脈の血流の影響を減らします。 注:肺静脈の血流の影響を減らすには、プローブをわずかに調整し、LADを肺静脈と区別します。LADは左心室壁を走り、肺静脈は左心房に流れ込みます。カラードップラーを使用してLADを見つけ、Bモードを使用して適切なセクションを選択します。</li>
	<li>カラードップラーモードでLADを視覚化した後、 パルス波(PW) ボタンを押してPWモードに切り替えます。黄色のインジケーターラインを冠状動脈に配置し、流れの方向と平行になるようにします。次に、[ クリップを保存] ボタンを押して、ベースラインデータを記録します。</li>
	<li>イソフルラン濃度を3%に上げ、30秒待ちます。流速が時間とともに徐々に増加することを確認してください。 Save Clip ボタンを頻繁に押すと、最高の血流速度がキャプチャされます。 注:イソフルラン刺激により心臓がより激しく働き、心臓とLADが動く可能性があります。PWモードの画像がキャプチャまたはシネ保存されたら、 PWモード をクリックして、黄色のインジケータラインがLAD上にあることを確認します。ずれが発生した場合は、黄色のインジケーターラインを血流点に少し調整して、記録を続行してください。このプロセスには、迅速な習得と切り替えが必要です。</li>
	<li>冠状動脈血流画像を収集した後、麻酔薬をオフにし、プローブを正常なPLAXビューに調整します。マウスの心拍数が約500 bpmまでゆっくりと増加するのを待ってから、プローブを胸骨傍短軸切片(PSAX)に切り替えてマウスの心機能を測定します。</li>
	<li>心エコーイメージングが完了したら、動物をプラットフォームから取り出し、自宅のケージで回復させます。ジェルを取り出し、低体温症を防ぐために動物を乾燥させます。</li>
	<li>Peak Vel 関数ツールと LV 関数ツールを使用して、画像からそれぞれピーク拡張期速度と心臓収縮期関数を取得します。</li>
	<li>CFR を、最大流量での拡張期ピーク冠状動脈流速 (CFV) とベースラインでの拡張期ピーク CFV の比として計算します。</li>
</ol>3. 心筋虚血再灌流法
注:最初の測定はベースラインであり、その後、同じ動物に対して手術が行われました。

<ol><li>ペントバルビタールナトリウム(60 mg / kg)でマウスを麻酔し、鎮痛剤カルプロフェン(5 mg / kg、皮下注射)を投与します。外科的処置全体を通して、予め温めた加熱パッド(37°C)を使用してください。つま先をつまむ反射やまばたき反射に対する離脱反射がないため、適切な麻酔の深さを確保します。マウスの仰臥位を加熱パッドに置き、眼科用軟膏を目に塗布して、目が乾燥するのを防ぎます。人工呼吸器のための気管内挿管の実施:首の毛を取り除く前後に、ベタジンまたはクロルヘキシジンと70%アルコールの3つの交互のスクラブでその領域を消毒します。気管の位置を特定し、カテーテルをそっと挿入します。次に、マウスを人工呼吸器(120呼吸/分で吸気潮汐量250μL)に接続します( 材料の表を参照)。</li>
	<li>前胸部の皮膚を、ベタジンまたはクロルヘキシジンと70%アルコールを交互に3回入れて消毒します。第4肋間腔で左開胸術10 を行うことにより、心臓を露出させます。</li>
	<li>左前下行動脈(LAD)を5-0シルク縫合糸( 材料表を参照)を使用してスリップノットで結紮し、左心房付属器の根元から1〜2mm下に挿入します。ステッチ方向が左心房付属器の下端と平行であることを確認してください。虚血性心筋の局所的な色濃化 により 、すべてのマウスの虚血を視覚的に確認します。</li>
	<li>LAD動脈を30分間閉塞します11.30分後、結紮糸を放出し、心筋の以前に変色した領域の発赤を1〜2分間観察することにより、再灌流を確認します。</li>
	<li>冠状動脈閉塞/再灌流後、胸部を層状に閉じ、マウスが約30分間回復するのを待ちます11。</li>
</ol>4. IR手術後の超音波画像診断
<ol><li>再灌流後1時間、3時間、5時間、8時間、24時間、および48時間で、セクション2で概説した手順に従って、CFRを再度測定します。これらの測定値を、虚血再灌流(IR)手順の前に得られたCFR値と比較します。</li>
</ol>5. 統計分析
<ol><li>適切な統計解析ソフトウェアを使用して、統計解析を実行します( 資料の表を参照)。 注:対応のあるサンプル間の連続変数の比較には、データが正規分布している場合は対応のある t検定 を利用します。非正規分布のデータの場合、または正規性の仮定が満たされない場合は、フリードマンの分散分析を使用します。 p < 0.05 を統計的に有意であると考えます。</li>
</ol>

虚血後のCFR変化:微小血管機能障害への影響

<ol>
	<li>O'Farrell, F. M., Mastitskaya, S., Hammond-Haley, M., Freitas, F., Wah, W. R., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+pericytes+mediate+coronary+no-reflow+after+myocardial+ischaemia.">Capillary pericytes mediate coronary no-reflow after myocardial ischaemia.</a> Elife. 6, e29280 (2017).</li><li>Dimitrow, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transthoracic+Doppler+echocardiography-noninvasive+diagnostic+window+for+coronary+flow+reserve+assessment.">Transthoracic Doppler echocardiography-noninvasive diagnostic window for coronary flow reserve assessment.</a> Cardiovascular ultrasound. 1, 4 (2003).</li><li>Picano, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+echocardiography:+a+historical+perspective.">Stress echocardiography: a historical perspective.</a> The American Journal of Medicine. 114 (2), 126-130 (2003).</li><li>Lim, D. S., Kim, Y. H., Lee, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+flow+reserve+is+reflective+of+myocardial+perfusion+status+in+acute+anterior+myocardial+infarction.">Coronary flow reserve is reflective of myocardial perfusion status in acute anterior myocardial infarction.</a> Catheterization and Cardiovascular Interventions: Official Journal of The Society For Cardiac Angiography &amp; Interventions. 51 (3), 281-286 (2000).</li><li>Feldman, L. J., Himbert, D., Juliard, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reperfusion+syndrome:+relationship+of+coronary+blood+flow+reserve+to+left+ventricular+function+and+infarct+size.">Reperfusion syndrome: relationship of coronary blood flow reserve to left ventricular function and infarct size.</a> Journal of the American College of Cardiology. 35 (5), 1162-1169 (2000).</li><li>Cortigiani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+flow+reserve+during+dipyridamole+stress+echocardiography+predicts+mortality.">Coronary flow reserve during dipyridamole stress echocardiography predicts mortality.</a> JACC Cardiovascular imaging. 5 (11), 1079-1085 (2012).</li><li>Han, B., Wei, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+coronary+hemodynamic+changes+evaluated+by+intracardiac+echocardiography+during+myocardial+ischemia+and+reperfusion+in+a+canine+model.">Proximal coronary hemodynamic changes evaluated by intracardiac echocardiography during myocardial ischemia and reperfusion in a canine model.</a> Echocardiography (Mount Kisco, NY). 25 (3), 312-320 (2008).</li><li>Kelm, N. Q., Beare, J. E., LeBlanc, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+coronary+flow+reserve+after+myocardial+ischemia+reperfusion+in+rats.">Evaluation of coronary flow reserve after myocardial ischemia reperfusion in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 148, e59406 (2019).</li><li>Batra, A., Warren, C. M., Ke, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+P21-activated+kinase-1+induces+age-dependent+increased+visceral+adiposity+and+cardiac+dysfunction+in+female+mice.">Deletion of P21-activated kinase-1 induces age-dependent increased visceral adiposity and cardiac dysfunction in female mice.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 476 (3), 1337-1349 (2021).</li><li>Lv, B., Zhou, J., He, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myocardial+infarction+and+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+in+mice.">Induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 179, e63257 (2022).</li><li>Huang, G., Lu, X., Duan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCSK9+knockdown+can+improve+myocardial+ischemia/reperfusion+injury+by+inhibiting+autophagy.">PCSK9 knockdown can improve myocardial ischemia/reperfusion injury by inhibiting autophagy.</a> Cardiovascular Toxicology. 22 (12), 951-961 (2022).</li><li>Lenzarini, F., Di Lascio, N., Stea, F., Kusmic, C., Faita, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+isoflurane-induced+vasodilation:+a+Doppler+ultrasound+study+of+the+left+coronary+artery+in+mice.">Time course of isoflurane-induced vasodilation: a Doppler ultrasound study of the left coronary artery in mice.</a> Ultrasound in Medicine &amp; Biology. 42 (4), 999-1009 (2016).</li><li>Chowdhury, S. A. K., Rosas, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Echocardiographic+characterization+of+left+ventricular+structure,+function,+and+coronary+flow+in+neonate+mice.">Echocardiographic characterization of left ventricular structure, function, and coronary flow in neonate mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 182, e63539 (2022).</li><li>Sadauskiene, E., Zakarkaite, D., Ryliskyte, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+evaluation+of+myocardial+reperfusion+by+transthoracic+Doppler+echocardiography+and+single-photon+emission+computed+tomography+in+patients+with+anterior+acute+myocardial+infarction+.">Non-invasive evaluation of myocardial reperfusion by transthoracic Doppler echocardiography and single-photon emission computed tomography in patients with anterior acute myocardial infarction .</a> Cardiovascular Ultrasound. 9, 16 (2011).</li><li>Bax, M., de Winter, R. J., Schotborgh, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-+and+long-term+recovery+of+left+ventricular+function+predicted+at+the+time+of+primary+percutaneous+coronary+intervention+in+anterior+myocardial+infarction.">Short- and long-term recovery of left ventricular function predicted at the time of primary percutaneous coronary intervention in anterior myocardial infarction.</a> Journal of the American College of Cardiology. 43 (4), 534-541 (2004).</li><li>Lee, S., Otsuji, Y., Minagoe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+evaluation+of+coronary+reperfusion+by+transthoracic+Doppler+echocardiography+in+patients+with+anterior+acute+myocardial+infarction+before+coronary+intervention.">Noninvasive evaluation of coronary reperfusion by transthoracic Doppler echocardiography in patients with anterior acute myocardial infarction before coronary intervention.</a> Circulation. 108 (22), 2763-2768 (2003).</li><li>Kelshiker, M. A., Seligman, H., Howard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+flow+reserve+and+cardiovascular+outcomes:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Coronary flow reserve and cardiovascular outcomes: a systematic review and meta-analysis.</a> European Heart Journal. 43 (16), 1582-1593 (2022).</li><li>Taqueti, V. R., Di Carli, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+microvascular+disease+pathogenic+mechanisms+and+therapeutic+options:+JACC+state-of-the-art+review.">Coronary microvascular disease pathogenic mechanisms and therapeutic options: JACC state-of-the-art review.</a> Journal of the American College of Cardiology. 72 (21), 2625-2641 (2018).</li><li>Wikstr&#246;m, J., Gr&#246;nros, J., Gan, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenosine+induces+dilation+of+epicardial+coronary+arteries+in+mice:+relationship+between+coronary+flow+velocity+reserve+and+coronary+flow+reserve+in+vivo+using+transthoracic+echocardiography.">Adenosine induces dilation of epicardial coronary arteries in mice: relationship between coronary flow velocity reserve and coronary flow reserve in vivo using transthoracic echocardiography.</a> Ultrasound in Medicine &amp; Biology. 34 (7), 1053-1062 (2008).</li></ol>

著者らは、この論文で報告された研究に影響を与えたと思われる可能性のある既知の競合する商業的または金銭的関係がないことを宣言します。

この研究では、修正された胸骨傍長軸ビューを使用して、虚血再灌流後のCFRを動的に評価するプロトコルを提示します。主な知見は、IRマウスにおけるCFRの有意な減少を示しており、最も顕著な減少は再灌流後1時間で観察された。しかし、心機能は48時間以内に影響を受けませんでした。
CFRは心筋の血液供給の指標として機能し、冠動脈狭窄と冠動脈微小血管循環の両方を評価するための非侵襲的なアプローチを提供します。臨床試験では、CFR値が低いほど予後不良と関連していることが示されており14,15,16、16、14のCFRカットオフ値が最適であると確立されている。最近のメタアナリシスでは、CFRが0.1単位減少するごとに死亡リスクが16%増加することが示され、CFRはリスクの連続体を表しており、レベルが低いほど患者は臨床転帰が不良になりやすいことが示されています17。本研究では、再灌流時間の延長に伴ってCFRが増加する傾向を示したが、施術前よりは低いままであり、PCIによる犯人血管開口直後だけでなく、48時間経過時の患者モニタリングの重要性が強調された。さらに、CFRは冠状動脈微小血管機能障害の尺度として機能し、心筋組織灌流に対する限局性疾患、びまん性疾患、および小血管疾患の血行動態学的影響を統合します18。したがって、CFRは冠状動脈微小血管疾患の診断のための重要な非侵襲的技術です。LAD の CFR は死亡率の強力で独立した指標であるため 6,7、この研究は、臨床上の決定のための参照値を提供することを目的としています。さらに、超音波装置の使用は、医療費抑制環境での冠動脈造影の必要性を減らすことができる可能性があります。適切なトレーニングとテクノロジーのアップグレードにより、リスクの層別化を個々の患者のニーズに合わせて調整できます。
変更されたPLAXビューは、科学研究者の利便性と時間を節約します。この技術の継続的な改善により、他の冠状動脈微小血管疾患へのより広範な応用が容易になります。このプロトコルの主なステップには、冠状動脈の視覚化と高品質のPW速度画像の取得が含まれます。麻酔薬の濃度が上がると血流速度が徐々に増加するため、最大血流速度を逃さないように連続捕獲することをお勧めします。麻酔薬の濃度を上げると心拍数が変化する可能性があるため、測定中はほとんどカラードップラーモードに戻り、測定前後で一貫した位置を確保することをお勧めします。
冠状動脈の湾曲により、動脈全体を完全に表示することはできず、1つのセグメントのみでの測定につながります。オペレーターは、冠動脈の始点を測定して、冠動脈の最大血流速度のポイントをできるだけ正確に特定することを目指す必要があります。さらに、CFRは冠状動脈血流量の変化に基づいて決定するのが理想的ですが、この研究では血流量ではなく血流速度を使用しており、血管径の影響を見落としています。しかし、以前の研究では、CFRとCFVR(冠状動脈流速予備)19との間に強い相関関係が示されています。冠状動脈微小血管機能に関するさらなる研究は、虚血の複雑な変化を理解し、冠状動脈微小血管機能障害の理解を深めるのに役立つ可能性があります。

冠状動脈性心臓病は、世界中で主要な死亡原因の1つとなっています1。心虚血後に一次経皮的冠動脈インターベンション(PCI)によって原因となる冠動脈が再開された場合でも、冠動脈微小血管灌流はしばしば減少したままです。さらに、心筋1 に供給する下流の毛細血管での再灌流の保証はありません。この現象は「ノーリフロー現象」と呼ばれ、臨床進行や予後不良と関連しています。したがって、再灌流療法が成功した後に適切な微小血管リフローを達成することは、心筋の温存にとって重要になります。したがって、血行再建術後の微小血管機能の早期評価は、臨床診療にとって非常に重要です。
微小血管機能の評価には、微小循環抵抗(IMR)および充血性微小血管抵抗(HMR)の指標への侵襲的冠動脈内温度/圧力ガイドワイヤー、非侵襲的心血管磁気共鳴(CMR)、単一光子放出型コンピュータ断層撮影法(SPECT)、陽電子放出断層撮影法(PET)などのさまざまな技術を採用できます2.しかし、これらの方法は侵襲的または半侵襲的であり、高価で、しばしば容易に利用できないため、臨床的有用性が制限されています。一方、経胸壁ドップラー心エコー検査による冠動脈流入予備能 (CFR) の評価は、他の方法に見られるように患者を電離放射線にさらすことなく、非侵襲的で比較的単純で費用対効果の高いアプローチを提供します3。
これまでの研究では、マウスやラットのCFRを測定するために経胸壁ドップラー心エコー法が採用されてきましたが、プラットフォーム、マウス、プローブの間の複雑な角度を特定するには、オペレーターにとって課題が残っています。このプロトコルは、左前下行動脈 (LAD) 冠状動脈を特定し、修正胸骨傍長軸 (PLAX) ビューを使用して CFR を迅速に測定する簡単な方法を提供することにより、この問題を解決します。
さらに、犯人病変から遠位の梗塞関連動脈(IRA)で得られたCFRは、心筋造影心エコー検査(MCE)4によって評価された灌流状態と強い相関を示しています。また、急性心筋梗塞(AMI)5後の生存率と左心室(LV)機能の回復の予測マーカーとしても特定されています。さらに、CFR は、全死因死亡率と心血管系の有害な転帰の信頼できるマーカーとして確立されています 6,7。以前の報告では、心筋梗塞のラットモデルにおけるCFRを評価するための心エコー検査の使用が説明されています8。それにもかかわらず、虚血再灌流の初期段階におけるCFRは十分に研究されていません。したがって、この研究は、再灌流の初期段階にあるIRマウスの動的試験を通じて、微小血管機能障害を診断し、虚血再灌流の治療効果を評価するための参照値を提供します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5-0 silk suture</td>
			<td>Ningbo MEDICAL Needle Co., Ltd.</td>
			<td>210322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57 mice</td>
			<td>Peking University Health Science Center Department of Laboratory Animal Science</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilating agent</td>
			<td>Nair</td>
			<td>NAR-255-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode gel</td>
			<td>Cofoe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Frequency Ultrasound</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics, Inc.</td>
			<td>Vevo3100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>REWARD</td>
			<td>R510-22-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Linear array high frequency transducer</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics, Inc.</td>
			<td>MS550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Shanghai Alcott Biotech</td>
			<td>ALC-V9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Anesthesia Machine</td>
			<td>REWARD</td>
			<td>R530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS</td>
			<td>IBM Corp, Armonk, NY, USA</td>
			<td>version 23.0&#160;</td>
			<td>statistical analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound Gel</td>
			<td>Cofoe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab Software</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Verison 5.7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic assessments of coronary flow reserve after myocardial ischemia reperfusion in mice

心虚血後、上流の動脈で血流が成功裏に完全に回復した場合でも、心筋灌流が不十分であることがよくあります。「ノーリフロー現象」として知られるこの現象は、冠状動脈の微小血管機能障害に起因し、臨床転帰不良と関連しています。臨床現場では、冠動脈疾患の指標として、冠状動脈予備能(CFR)の減少が頻繁に使用されます。CFRは、薬理学的または代謝的要因によって誘発されるピーク流速と静止流速の比として定義されます。
このプロトコルは、脈波ドップラー測定を使用して虚血再灌流(IR)の前後のCFRの動的変化を評価することに焦点を当てました。この研究では、正常なマウスは、イソフルラン刺激下での安静時の値よりも最大2倍高い冠状動脈血流のピーク速度を増加させる能力を示しました。ただし、虚血再灌流後、1時間でのCFRは手術前のベースラインと比較して大幅に減少しました。時間の経過とともに、CFRは緩やかな回復を示しましたが、通常のレベルを下回ったままでした。収縮機能の維持にもかかわらず、微小血管機能障害の早期発見は非常に重要であり、実用的なガイドを確立することは、このタスクで医師を支援すると同時に、時間の経過に伴う心血管疾患の進行の研究を容易にする可能性があります。

この研究では、雄のC57マウス(BW~18-20 g)を使用して、CFRの動的変化を特徴付けました。修正されたPLAX画像は、LADの冠状動脈流動特性を評価するために採用されました(図1A、B)。CFRは、3%イソフルランによって誘発される最大血管拡張中の最大流速と1.5%イソフルラン濃度12,13のベースラインでの最大流速の比として計算されました。すべての測定と計算は、3つの連続した心周期にわたって繰り返され、平均化され、代表的な結果を図2に示します。
IR手術の前に、ベースラインCFRを測定し、マウスのCFR値は2.14±0.43付近で正常でした。しかし、IR手術後、IR手術後、再灌流1時間後のCFRはIR手術前と比較して有意に減少しました(1.18 ± 0.14 対 2.14 ± 0.43)(図3A)。この減少は、原因血管を開いた後も微小循環がすぐには回復しなかったことを示しました。再灌流時間が長くなるにつれて、CFR値は一貫して低いレベルにとどまり、3時間で1.21±0.20、5時間で1.39±0.33、8時間で1.44±0.38、24時間で1.34±0.36、再灌流後48時間で1.48±0.47の値となり、低灌流が少なくとも2日間持続する可能性があることを示唆しています(図3A)。さらに、1時間、3時間、5時間、8時間、24時間、および48時間でのCFR値の間に統計的な有意性はありませんでした。
マウスの心機能についてもモニタリングし、マウスでCFRを有意に低下させた場合、左心室心機能に有意な変化は見られませんでした(図3B)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65391/65391fig01.jpg"> 図1:修正された胸骨傍長軸図(A)は、LADの冠動脈速度を取得しながらのプローブとプラットフォームの位置を示しています。(B)は、LAD冠動脈上のパルス波速度センサーの配置を示しています。青色は超音波プローブから離れる動きを示し、オレンジ色は超音波プローブに近づく動きを示します。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65391/65391fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65391/65391fig02.jpg"> 図2:LADの脈波速度イメージングの視覚化と記録 (A)LAD冠状動脈の安静状態における脈波画像。(B) LAD 冠状動脈の最大充血性冠状動脈脈波画像。青色は超音波プローブから離れる動きを示し、オレンジ色は超音波プローブへの動きを示します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65391/65391fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65391/65391fig03.jpg"> 図3:冠動脈流予備能と駆出率の測定(A)虚血前および再灌流後1時間、3時間、5時間、8時間、24時間、および48時間後の動物におけるCFRの統計分析(n = 9)。(B)各時点(n = 9)における各グループからの駆出率の評価。*p < 0.05;データは平均 ± SD として表示され、対応のある t 検定とフリードマンの ANOVA で分析されました。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65391/65391fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

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著者スポットライト:マウスにおけるModified PLAX Viewを使用した冠動脈血流予備能のローカリゼーションとモニタリングの改善

本プロトコルは、左前下行動脈の迅速かつ正確な局在化のための修正された胸骨傍長軸ビューを説明しています。このアプローチは、マウスの心筋虚血再灌流後の冠状動脈血流予備能の動的変化の検査を容易にする一方で、よりシンプルでユーザーフレンドリーになるように設計されています。

マウスにおける心筋虚血再灌流後の冠動脈血流予備能の動的評価

After cardiac ischemia, there is often insufficient myocardial perfusion, even if flow has been successfully and completely restored in an upstream ...

私たちのプロトコルは、左前下行動脈の迅速かつ正確な局在化のための修正された胸骨傍長軸ビューを説明しています。このアプローチを使用して、マウスの心筋虚血再灌流後の冠動脈血流予備能の動的変化を研究しました。この研究では、科学研究者に時間を節約し、利便性を提供する修正されたPLAXビューを示しています。さらに、この研究では、CFRが塩基再灌流時間の延長を増加させたが、処置前よりも低いままであることがわかり、PCI後の早期モニタリングの重要性が浮き彫りになった。当社のプロトコルは、プラットフォーム、マウス、プローブ、およびマウスCFR間の複雑な角度を簡単に特定します。

dynamic-assessments-coronary-flow-reserve-after-myocardial-ischemia

Research

JoVE Journal

Biology

Dynamic Assessments of Coronary Flow Reserve after Myocardial Ischemia Reperfusion in Mice

870 ビュー.  Peking University China-Japan Friendship School of Clinical Medicine. 私たちのプロトコルは、左前下行動脈の迅速かつ正確な局在化のための修正された胸骨傍長軸ビューを説明しています。このアプローチを使用して、マウスの心筋虚血再灌流後の冠動脈血流予備能の動的変化を研究しました。この研究では、科学研究者に時間を節約し、利便性を提供する修正されたPLAXビューを示しています。さらに、この研究では、CFRが塩基再灌...

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Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these acrylics do not bond to the bone, screws have been used as anchors. However, in small experimental animals like finches or mouse, their craniums are very fragile and can not successfully hold the anchors. In this report, we propose a new application of light-curing dental resins for mounting base of electrodes or microdialysis probes in chronic experiments. This material allows direct bonding to the cranium. Therefore, anchor screws are not required and surgical field can be reduced considerably. Past experiences show that the bonding effect maintains more than 2 months. Conventional resin's window of time when the materials are pliable and workable is a few minutes. However, the window of working time for these dental adhesives is significantly wider and adjustable.

In this report, we propose a new application of light-curing dental resins for mounting base of electrodes or microdialysis probes in chronic experiments. This material allows direct bonding to the cranium.

慢性実験における実装電極やマイクロダイアリシスプローブ用光重合型歯科用接着性レジンの応用

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these ...

生物学

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current techniques used to view such processes are somewhat limited. The following protocol describes a new technique for mounting fixed and labeled Drosophila embryos for coronal viewing with confocal imaging. This method consists of embedding embryos between two layers of glycerin jelly mounting media, and imaging jelly strips positioned upright. The first step for sandwiching the embryos is to make a thin bedding of glycerin jelly on a slide. Next, embryos are carefully aligned on this surface and covered with a second layer of jelly. After the second layer is solidified, strips of jelly are cut and flipped upright for imaging. Alternatives are described for visualizing the embryos depending upon the type of microscope stand to be used. Since all cells along the dorsal-ventral axis are imaged within a single confocal Z-plane, our method allows precise measurement and comparison of fluorescent signals without photobleaching or light scattering common to 3D reconstructions of longitudinally mounted embryos.

Upright Imaging of Drosophila Embryos

Here we present a mounting protocol for stained Drosophila embryos in an upright position that allows imaging of cross-sections using Confocal microscopy.

の直立イメージングショウジョウバエ胚

Several well-known morphogenetic gradients and cellular movements occur along the dorsal/ventral axis of the Drosophila embryo. However, the current ...

Environmentally Induced Heritable Changes in Flax

Some flax varieties respond to nutrient stress by modifying their genome and these modifications can be inherited through many generations. Also associated with these genomic changes are heritable phenotypic variations 1,2. The flax variety Stormont Cirrus (Pl) when grown under three different nutrient conditions can either remain inducible (under the control conditions), or become stably modified to either the large or small genotroph by growth under high or low nutrient conditions respectively. The lines resulting from the initial growth under each of these conditions appear to grow better when grown under the same conditions in subsequent generations, notably the Pl line grows best under the control treatment indicating that the plants growing under both the high and low nutrients are under stress. One of the genomic changes that are associated with the induction of heritable changes is the appearance of an insertion element (LIS-1) 3, 4 while the plants are growing under the nutrient stress. With respect to this insertion event, the flax variety Stormont Cirrus (Pl) when grown under three different nutrient conditions can either remain unchanged (under the control conditions), have the insertion appear in all the plants (under low nutrients) and have this transmitted to the next generation, or have the insertion (or parts of it) appear but not be transmitted through generations (under high nutrients) 4. The frequency of the appearance of this insertion indicates that it is under positive selection, which is also consistent with the growth response in subsequent generations. Leaves or meristems harvested at various stages of growth are used for DNA and RNA isolation. The RNA is used to identify variation in expression associated with the various growth environments and/or t he presence/absence of LIS-1. The isolated DNA is used to identify those plants in which the insertion has occurred.

Growing some flax varieties under nutrient stress results in genomic variation within a subset of the genome and phenotypic variation. A complex insertion at a specific site is associated with growth under various nutrient regimes and with changes in gene expression around this site.

環境的に誘導されたフラックスの変化を遺伝

Some flax varieties respond to nutrient stress by modifying their genome and these modifications can be inherited through many generations. Also ...

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the unique differentiation programs that are manifest during meiosis. Two principal methods have been developed to purify, to varying degrees, various meiotic fractions from both adult and immature animals: elutriation or Staput (sedimentation) using BSA and/or percoll gradients. Both of these methods rely on cell size and density to separate meiotic cells1-5. Overall, except for few cell populations6, these protocols fail to yield sufficient purity of the numerous meiotic cell populations that are necessary for detailed molecular analyses. Moreover, with such methods usually one type of meiotic cells can be purified at a given time, which adds an extra level of complexity regarding the reproducibility and homogeneity when comparing meiotic cell samples.
Here, we describe a refined method that allows one to easily visualize, identify, and purify meiotic cells, from germ cells to round spermatids, using FACS combined with Hoechst 33342 staining7,8. This method provides an overall snapshot of the entire meiotic process and allows one to highly purify viable cells from most stage of meiosis. These purified cells can then be analyzed in detail for molecular changes that accompany progression through meiosis, for example changes in gene expression9,10and the dynamics of nucleosome occupancy at hotspots of meiotic recombination11.

An efficient method to obtain highly purified viable meiotic fractions from mouse testis is described, which combines a refined cell dissociation protocol with fluorescent activated cell sorting (FACS). This method takes advantage of differences in the DNA content and nuclear density of discrete meiotic fractions.

マウス減数分裂細胞のフローサイトメトリーの精製

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae zygotes result from the fusion of haploid cells of distinct mating type (MATa, MATalpha) and give rise to corresponding stable diploids that successively generate as many as 20 diploid progeny as a result of their strikingly asymmetric mitotic divisions 2. Zygote formation is orchestrated by a complex sequence of events: In this process, soluble mating factors bind to cognate receptors, triggering receptor-mediated signaling cascades that facilitate interruption of the cell cycle and culminate in cell-cell fusion. Zygotes may be considered a model for progenitor or stem cell function.
Although much has been learned about the formation of zygotes and although zygotes have been used to investigate cell-molecular questions of general significance, almost all studies have made use of mating mixtures in which zygotes are intermixed with a majority population of haploid cells 3-8. Many aspects of the biochemistry of zygote formation and the continuing life of the zygote therefore remain uninvestigated.
Reports of purification of yeast zygotes describe protocols based on their sedimentation properties 9; however, this sedimentation-based procedure did not yield nearly 90% purity in our hands. Moreover, it has the disadvantage that cells are exposed to hypertonic sorbitol. We therefore have developed a versatile purification procedure. For this purpose, pairs of haploid cells expressing red or green fluorescent proteins were co-incubated to allow zygote formation, harvested at various times, and the resulting zygotes were purified using a flow cytometry-based sorting protocol. This technique provides a convenient visual assessment of purity and maturation. The average purity of the fraction is approximately 90%. According to the timing of harvest, zygotes of varying degrees of maturity can be recovered. The purified samples provide a convenient point of departure for "-omic" studies, for recovery of initial progeny, and for systematic investigation of this progenitor cell.

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

To purify zygotes of S. cerevisiae, haploid cells of opposite mating type were engineered to express red or green fluorescent proteins, co-incubated to allow zygote formation, and fractionated using a flow cytometry-based protocol. The highly-enriched fraction enables subsequent "-omic" studies, recovery of initial progeny, and systematic investigation of zygote morphogenesis.

のフローサイトメトリーベースの精製<em&gt; S.セレビ</em&gt;受精卵

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of different cell types in vitro and in vivo.1-5 Although there are literally thousands of publications using such dyes, some of the most commonly encountered cell tracking applications include monitoring of:
<ol>
	<li>stem and progenitor cell quiescence, proliferation and/or differentiation6-8</li>
	<li>antigen-driven membrane transfer9 and/or precursor cell proliferation3,4,10-18 and</li>
	<li>immune regulatory and effector cell function1,18-21.</li>
</ol>
Commercially available cell tracking dyes vary widely in their chemistries and fluorescence properties but the great majority fall into one of two classes based on their mechanism of cell labeling. "Membrane dyes", typified by PKH26, are highly lipophilic dyes that partition stably but non-covalently into cell membranes1,2,11. "Protein dyes", typified by CFSE, are amino-reactive dyes that form stable covalent bonds with cell proteins4,16,18. Each class has its own advantages and limitations. The key to their successful use, particularly in multicolor studies where multiple dyes are used to track different cell types, is therefore to understand the critical issues enabling optimal use of each class2-4,16,18,24.
The protocols included here highlight three common causes of poor or variable results when using cell-tracking dyes. These are:
<ol>
	<li>Failure to achieve bright, uniform, reproducible labeling. This is a necessary starting point for any cell tracking study but requires attention to different variables when using membrane dyes than when using protein dyes or equilibrium binding reagents such as antibodies.</li>
	<li>Suboptimal fluorochrome combinations and/or failure to include critical compensation controls. Tracking dye fluorescence is typically 102 - 103 times brighter than antibody fluorescence. It is therefore essential to verify that the presence of tracking dye does not compromise the ability to detect other probes being used.</li>
	<li>Failure to obtain a good fit with peak modeling software. Such software allows quantitative comparison of proliferative responses across different populations or stimuli based on precursor frequency or other metrics. Obtaining a good fit, however, requires exclusion of dead/dying cells that can distort dye dilution profiles and matching of the assumptions underlying the model with characteristics of the observed dye dilution profile.</li>
</ol>
Examples given here illustrate how these variables can affect results when using membrane and/or protein dyes to monitor cell proliferation.

Successful use of cell tracking dyes to monitor immune cell function and proliferation involves several critical steps. We describe methods for: 1) obtaining bright, uniform, reproducible label-ing with membrane dyes; 2) selecting fluorochromes and data acquisition conditions; and 3) choosing a model to quantify cell proliferation based on dye dilution.

細胞トラッキング染料を使用して細胞分裂監視のための最適化された染色と増殖モデリング方法

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed under anoxia for 20 hr&#160;(simulated ischemia), and subsequently moved to a normal atmosphere with food (simulated reperfusion). This experimental paradigm results in increased death and neuronal damage, and techniques are presented to assess organism viability, alterations to the morphology of touch neuron processes, as well as touch sensitivity, which represents the behavioral output of neuronal function. Finally, a method for constructing hypoxic incubators using common kitchen storage containers is described. The addition of a mass flow control unit allows for alterations to be made to the gas mixture in the custom incubators, and a circulating water bath allows for both temperature control and makes it easy to identify leaks. This method provides a low cost alternative to commercially available units.

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

A protocol is described that uses anoxia/starvation in C. elegans to model ischemia/reperfusion. Functional outcomes include increased mortality, visible abnormalities in GFP-labeled neuronal processes, and impaired behavioral responses that require neuronal function.

における虚血/再灌流のための無酸素飢餓モデル<em&gt; C.虫</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...

Floral-Dip Transformation of Flax (Linum usitatissimum) to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Agrobacterium-mediated plant transformation via floral-dip is a widely used technique in the field of plant transformation and has been reported to be successful for many plant species. However, flax (Linum usitatissimum) transformation by floral-dip has not been reported. The goal of this protocol is to establish that Agrobacterium and the floral-dip method can be used to generate transgenic flax. We show that this technique is simple, inexpensive, efficient, and more importantly, gives a higher transformation rate than the current available methods of flax transformation.
In summary, inflorescences of flax were dipped in a solution of Agrobacterium carrying a binary vector plasmid (T-DNA fragment plus the Linum Insertion Sequence, LIS-1) for 1 - 2 min. The plants were laid flat on their side for 24 hr. Then, plants were maintained under normal growth conditions until the next treatment. The process of dipping was repeated 2 - 3 times, with approximately 10 - 14 day intervals between dipping. The T1 seeds were collected and germinated on soil. After approximately two weeks, treated progenies were tested by direct PCR; 2 - 3 leaves were used per plant plus the appropriate T-DNA primers. Positive transformants were selected and grown to maturity. The transformation rate was unexpectedly high, with 50 - 60% of the seeds from treated plants being positive transformants. This is a higher transformation rate than those reported for Arabidopsis thaliana and other plant species, using floral-dip transformation. It is also the highest, which has been reported so far, for flax transformation using other methods for transformation.

Floral-Dip Transformation of Flax Linum usitatissimum to Generate Transgenic Progenies with a High Transformation Rate

Here, we present a protocol to transform flax using Agrobacterium-mediated plant transformation via floral-dip. This protocol is simple to perform and inexpensive, yet yields a higher transformation rate than the current available methods for flax transformation.

亜麻の花-DIP変換（<em&gt;アマ</em&gt;）高転換率のトランスジェニック子孫を生成するために、

Agrobacterium-mediated plant transformation via floral-dip is a widely used technique in the field of plant transformation and has been reported to be ...

Isolation of Mouse Coronary Endothelial Cells

Endothelial cells line the inner wall of blood vessels and play an important role in the regulation of vascular tone, vascular permeability, and new vascular formation. Endothelial cell dysfunction is implicated in the development and progression of many cardiovascular diseases including ischemic heart disease. To examine the function and characterization of coronary endothelial cells, cell isolation is the first step and it requires high purity and quantity to conduct subsequent experiments. This protocol describes an efficient method to isolate adult mouse coronary endothelial cells. The mouse heart is dissected and minced into small pieces. After the digestion of the heart using dispase and collagenase II, cells are washed&#160;and incubated with magnetic beads which are conjugated with anti-CD31 antibody. The beads with endothelial cells are washed several times and are ready to use in various applications, including imaging and molecular biological experiments. Efficient isolation yields approximately 104 cells per one heart with over 90% purity.

This protocol is prepared to share our method of isolating mouse coronary endothelial cells for the purpose of imaging or to conduct molecular biological experiments.

マウスの冠動脈内皮細胞の単離

Endothelial cells line the inner wall of blood vessels and play an important role in the regulation of vascular tone, vascular permeability, and new ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex signaling mechanisms underlying filopodial initiation, elongation and subsequent stabilization or retraction, it is crucial to determine the spatio-temporal protein activity in these dynamic structures. To analyze protein function in filopodia, we recently developed a semi-automated tracking algorithm that adapts to filopodial shape-changes, thus allowing parallel analysis of protrusion dynamics and relative protein concentration along the whole filopodial length. Here, we present a detailed step-by-step protocol for optimized cell handling, image acquisition and software analysis. We further provide instructions for the use of optional features during image analysis and data representation, as well as troubleshooting guidelines for all critical steps along the way. Finally, we also include a comparison of the described image analysis software with other programs available for filopodia quantification. Together, the presented protocol provides a framework for accurate analysis of protein dynamics in filopodial protrusions using image analysis software.

We present a software solution for semi-automated tracking of relative protein concentration along the length of dynamic cellular protrusions.

動的細胞突起におけるソフトウェア支援トラッキングのためのグラフィカルユーザインタフェース

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...