涙液のバイオシェディング研究におけるアデノ随伴ウイルスベクターの検出のための検証可能な液滴デジタルポリメラーゼ連鎖反応アッセイ

私たちのプロトコルは、複雑なマトリックス中のアデノ随伴ウイルスベクターを定量します。正確な検出と定量は、臨床試験でのパフォーマンスを評価するために不可欠です。このプロトコルは、特に、優れた実験室慣行に準拠した分子研究の設計における現在の規制のギャップを埋めることを目的としています。

ウイルスベクター開発の一環として、規制当局はベクターバイオシェディングの評価を要求しています。ddPCRは、標準曲線を使用せずに正確な定量を可能にし、qPCRと比較して感度が向上するため、この評価に有望な技術です。涙液などの臨床現場で遭遇する複雑なマトリックスでの正確な定量は、PCRの干渉と阻害のために検証が困難な場合があります。

臨床サンプルの量が限られていると、アッセイの感度が十分に低下した場合、まれなイベントを検出する能力が制限される可能性もあります。私たちのアプローチは、規制された研究で使用するアッセイを検証するために、再現性と適応性のあるddPCRベースのフレームワークを開発します。この方法は、特定のDNA抽出ステップを回避し、より合理化されたバリデーションを可能にし、堅牢性と再現性を確保するためにアッセイ性能を評価するための明確な基準を提供します。

このプロトコルは、ここに示されているように、涙中のAAVの検出だけでなく、あらゆるウイルスベクター排出研究に適用できる可能性があります。これにより、目的に合った複数の規制されたプログラムを開発できる、堅牢で反復可能なフレームワークが作成されます。