ヒト剥離乳歯由来の免疫表現型間葉系幹細胞の単一細胞選別

このプロトコルは、単一のプラットフォームでヒト間葉系幹細胞を正確に特徴付け、精製するための重要な方法を詳述し、幹細胞移植などの効率的なダウンストリームアプリケーションを可能にします。これは、人工幹細胞または天然幹細胞の正確な単一細胞選別を通じて分子および細胞遺伝学的アッセイを強化する臨床ラボにとって特に重要です。精製された幹細胞集団の単離に一般的に使用される方法は、免疫磁気分離、密度勾配、またはマイクロ流体細胞ソーティングなどの技術を指します。

インデックスソーティングなどの手法により、ソートされた各細胞のトランスクリプトーム情報を抽出できるシングルセルRNAプロファイリングにリンクできます。主な課題は、サンプル品質の維持、ソーティング中およびソーティング後の細胞密度や生存率など、細胞培養条件の最適化です。さらに、装置に適したノズルサイズを選択し、ソーターにタイムリーにアクセスできるようにすることも考慮されます。

このプロトコルは、イムノフェノタイピングと目的の細胞集団の選別のための精密な汚損パネルを示しています。標準化されたサンプル品質、最適な細胞生存率、細胞集団ソーティングの密度を保証し、FACSDivaソフトウェアでソーティング実験パラメータを定義します。この方法により、特定のバイオマーカーを発現する幹細胞集団の簡単な選択とイムノフェノタイピングが可能になります。

このシンプルなプラットホームにより、ターゲット集団に基づいた効率的な選別が可能になり、その後のダウンストリームアプリケーションのための精製サンプルの取得に役立ちます。