Clasificación unicelular de células madre mesenquimales inmunofenotipadas de dientes deciduos exfoliados humanos

Este protocolo detalla un método crucial para caracterizar y purificar con precisión las células madre mesenquimales humanas en una sola plataforma, lo que permite aplicaciones posteriores eficientes como el trasplante de células madre. Es particularmente importante para los laboratorios clínicos que mejoran los ensayos moleculares y citogenéticos a través de la clasificación precisa de células madre naturales o de una sola célula. Los métodos comúnmente utilizados de aislamiento de poblaciones de células madre purificadas se refieren a técnicas como la separación inmunomagnética, el gradiente de densidad o la clasificación celular microfluídica.

Una técnica como la clasificación por índice permite vincularla a un perfil de ARN de una sola célula que puede extraer información transcriptómica de cada célula clasificada. Los desafíos clave incluyen el mantenimiento de la calidad de la muestra, la optimización de las condiciones de cultivo celular, incluida la densidad celular y la viabilidad durante y después de la clasificación. Además, también se consideraría la elección de tamaños de boquilla adecuados para el instrumento y la garantía de acceso oportuno a los clasificadores.

Este protocolo ilustra un panel de tinción preciso para el inmunofenotipado y la clasificación de la población celular deseada. Garantiza la calidad estandarizada de la muestra, la viabilidad celular óptima, la densidad para la clasificación de la población celular y define los parámetros experimentales de clasificación en el software FACSDiva. Este método permite una selección directa y el inmunofenotipado de la población de células madre que expresan biomarcadores específicos.

Esta sencilla plataforma permite una clasificación eficiente en función de la población objetivo, ayudando y obteniendo muestras purificadas para aplicaciones posteriores.