Autor em destaque: Importância da classificação de células únicas no isolamento de populações purificadas de células-tronco mesenquimais

Este protocolo detalha um método crucial para caracterizar e purificar com precisão as células-tronco mesenquimais humanas em uma única plataforma, permitindo aplicações eficientes a jusante, como o transplante de células-tronco. É particularmente significativo para laboratórios clínicos que aprimoram ensaios moleculares e citogenéticos por meio da classificação precisa de células tronco projetadas ou naturais. Os métodos comumente usados de isolamento de populações de células-tronco purificadas referem-se a técnicas como separação imunomagnética, gradiente de densidade ou classificação de células microfluídicas.

Uma técnica como a classificação de índice permite que ele seja ligado ao perfil de RNA de célula única que pode extrair informações transcriptômicas de cada célula classificada. Os principais desafios envolvem a manutenção da qualidade da amostra, a otimização das condições de cultura celular, incluindo a densidade e viabilidade celular durante e após a triagem. Além disso, a escolha de tamanhos de bicos adequados para o instrumento e a garantia de acesso oportuno aos classificadores também seriam consideradas.

Este protocolo ilustra um painel de coloração preciso para imunofenotipagem e classificação da população celular desejada. Ele garante a qualidade padronizada da amostra, a viabilidade celular ideal, a densidade para a classificação da população celular e define parâmetros experimentais de classificação no software FACSDiva. Este método permite uma seleção direta e imunofenotipagem da população de células-tronco expressando biomarcadores específicos.

Esta plataforma simples permite uma triagem eficiente com base na população-alvo, auxiliando e obtendo amostras purificadas para aplicações subsequentes a jusante.