マルチプレックス蛍光イメージングのためのアガロース包埋肺組織の自動ビブラトーム切片化

このプロトコルは、ブタなどの肺移植および再生の大型動物モデルで特に有用であり、時間の経過とともに小さな断片をサンプリングできます。この手法は、これらのモデルで作用する空間生物学をよりよく理解するのに役立ちます。この技術は、抗原賦活化を必要とせずに免疫蛍光イメージングに適した最小限の処理で肺切片を生成し、これまでに試験されたすべての抗体で有効です。

この手順は、わずかに厚い切片、たとえば約1ミリメートルを切断するために適応することができ、その後、ライトシート蛍光顕微鏡で使用して、より3次元のボリュームで空間的なタンパク質発現を研究することができます。私たちの研究では、肺移植の拒絶反応に影響を与える要因を調査し、ブタモデルを使用して拒絶反応を減らす治療法を開発しています。この手法は、術後の移植結果に影響を与える空間的なタンパク質の変化を理解するのに役立ちます。

現在、この手法を使用して、ブタ肺移植モデルにおける空間的タンパク質発現のランドスケープを調査しています。実験的治療のメカニズムの理解を深める一助となれば幸いです。ここで成功するための鍵は、ビブラトームの照準にあり、ブレードの振幅が大きく、力の速度が低いことは、セクショニングがうまくいかない場合に確認すべき重要なことです。