Автоматизированное вибратомное секционирование легочной ткани, внедренной агарозой, для мультиплексной флуоресцентной визуализации

Этот протокол особенно полезен на крупных животных моделях трансплантации и регенерации легких, таких как свиньи, где мы можем брать образцы небольших кусочков в течение долгого времени. Этот метод может помочь нам лучше понять пространственную биологию, используемую в этих моделях. Этот метод позволяет получить минимально обработанные срезы легких, пригодные для иммунофлуоресцентной визуализации без необходимости извлечения антигена, и был эффективен со всеми антителами, протестированными на сегодняшний день.

Эта процедура может быть адаптирована для вырезания немного более толстых срезов, скажем, около одного миллиметра, которые затем могут быть использованы в светолистовой флуоресцентной микроскопии для изучения пространственной экспрессии белка в более трехмерном объеме. В нашем исследовании изучаются факторы, влияющие на отторжение трансплантата легких, и разрабатываются методы лечения для уменьшения отторжения с использованием нашей модели свиньи. Этот метод помогает понять пространственные изменения белка, влияющие на результаты трансплантации после операции.

В настоящее время мы используем этот метод для изучения ландшафта пространственной экспрессии белка в нашей модели трансплантации легких свиньи. Мы надеемся, что это поможет нам лучше понять механизмы, лежащие в основе наших экспериментальных методов лечения. Ключ к успеху здесь заключается в вибратомных наблюдениях, высоких амплитудах лопастей и более низких силовых скоростях, на которые следует обратить внимание, если секционирование идет плохо.