この研究は、吉林省科学技術局(YDZJ202201ZYTS181)の支援を受けた。

この動物実験は、長春中医薬大学倫理委員会によって承認されています(記録番号:2021214)。特異的病原体フリーC57BL/6Jマウス(8-10週、体重18-22g)の雌雄を、22°C、相対湿度65%の独立換気ケージに収容した。マウスは、水と食事を自由に利用できる適応摂食を7日行った後に実験を開始しました。
1. 薬剤の調製
<ol><li>LJZDの調製 注:使用された漢方薬は長春中医薬大学付属病院から購入し、本物の漢方薬であることが確認されました( 表1参照)。<ol><li>唐深(12g)、白珠(12g)、甘草(6g)、陳彡(12g)、江板霞(9g)を専用の陶器鍋に入れます( 材料表を参照)。1000 mLの蒸留水を加え、室温で1時間浸漬します( 図1Aを参照)。</li>
		<li>粉末12gをグラインダーで微粉末にし、別の容器に蒸留水300mLを室温で1時間浸します。</li>
		<li>専用の陶器鍋で上記の漢方薬を混ぜます。混合物を沸騰させ、300 mLの煎じ薬だけが残るまで中火で続けます。濾過には医療用ガーゼを使用し、濾液は室温で保存してください。</li>
		<li>1000mLの蒸留水を加え、上記の煎じ薬操作をもう一度繰り返します。医療用ガーゼを使用して再度ろ過します。濾液を混ぜ合わせ、150mLになるまで煮沸します。</li>
		<li>濃縮液を10,000× g で5分間遠心分離し、得られた上清をさらに中火で30mLに濃縮する。最終濃縮物を皿に移し、溶質だけが粉末として残るまで電気乾燥オーブンを使用して乾燥させます。</li>
		<li>上記の固体を秤量し、滅菌蒸留水に溶解して、マウスの1日投与量である0.2mL(114.16mg/mL)あたり22.85mgの薬物を含む溶液を得る。</li>
	</ol></li>
	<li>5-アミノサリチル酸の調製 注:5-アミノサリチル酸(5-ASA; 材料表参照)はUC-CRCに対して良好な予防効果があり、この研究23で陽性薬として使用されました。<ol><li>64 mg の 5-ASA 粉末を 200 mL の滅菌蒸留水に溶解して、1.82 mg/mL の 5-ASA 溶液を得ます。1匹のマウスの1日投与量は0.2mLでした。.</li>
	</ol></li>
	<li>AOM注入液の調製<ol><li>2.5 mLの滅菌蒸留水を25 mgのAOM粉末( 材料表を参照)に加え、ボルテックスミキサー( 材料表を参照)で混合して10 mg/mLのAOMストック溶液を作り、使用するまで-20°Cで保存します。</li>
		<li>AOM 原液を滅菌蒸留水で 10:1(1 mg/mL)に希釈して、AOM 注入液を調製します。</li>
	</ol></li>
</ol>2. UC-CRCモデルの確立
注:実験は、対照群、モデル群、LJZD群、および5-ASA群の4つのグループに分けられ、各グループに10匹のマウスがいました。対照群を除く他の群はAOMおよびDSSで治療された。
<ol><li>AOM注射液の腹腔内注射 注:7日間の適応給餌後、マウスに腹腔内注射によるAOM注射溶液(1 mg / mL)を投与しました( 図1Bを参照)。<ol><li>マウスの腹を上にして持ち、頭を少し下に向けます。背中の皮膚をつかんで腹部の皮膚を引き締め、1 mLのシリンジで腹部中央線上の両大腿部の根元の線の交点の約1cm右側に皮膚を突き刺します( 材料表を参照)。</li>
		<li>1 mLシリンジ針を皮膚下3〜5 mmの距離まで押し、腹部の正中線と平行に保ち、針を0.3〜0.5 mm腹腔に45°挿入します。.</li>
		<li>先端が腹筋を通過した後、オペレーターは突然の抵抗の喪失を感じます。続いて、シリンジを外側と後方に引いて、液体の浸透が起こるかどうかを観察します。そうでない場合は、AOM注入溶液を0.1 mL/10 gでマウスにゆっくりと押し込みます。</li>
	</ol></li>
	<li>2%DSS溶液のサイクリック刺激 注:各AOM誘発マウスに3週目、6週目、9週目に500 mLのDSS溶液を投与し、この期間中、マウスは自由に飲んだ。<ol><li>10 g の DSS に 500 mL の滅菌蒸留水を加えて 2% DSS 溶液を調製します ( 材料表を参照)。ボルテックスミキサーで混合し、使用するまで4°Cで保存してください。</li>
		<li>各AOM誘導マウスは、AOM誘導後3、6、および9週目に500 mLの2%DSS溶液を7日間自由に飲みます。</li>
	</ol></li>
</ol>3.薬物治療
注:成人の人間は、1日あたり63gのLJZDを必要とします。マウスとヒトの薬物投与量の換算式によると、マウスの等価実験用量(mg / kg)=ヒト用量(mg / kg)/体重(60kg)x 9.1であり、マウスの1日用量は約9.6 g / kgでした。
<ol><li>LJZD および 5-ASA 群を、調製した LJZD および 5-ASA 溶液 0.1 mL/10 g で、それぞれ 7 週目と 15 週目に胃強制経口投与で処理します。<ol><li>マウスの胃内投与については、以下の手順を行う。マウスを左手に持ち、右手で胃灌流装置を持ちます。注射針を口に挿入し、マウスの咽頭の後壁を滑り込ませます。マウスが飲み込むときに咽頭を滑り降り、前進を続けます。抵抗感があり、注射器を咽頭に押し込むことができたら、針を抜いて注射を完了します。</li>
	</ol></li>
	<li>対照群とモデル群を同量の生理食塩水で処理します( 材料表を参照)。</li>
	<li>各群のマウスを1日1回、投与期間中同じ時間に適切な薬剤で治療する。</li>
</ol>4. UC-CRCモデルとLJZDの有効性評価
<ol><li>疾患活動性指数スコア 注: 表2によると、疾患活動性指数(DAI)スコアは、マウスの体重減少、糞便粘度、および便出血を組み合わせて評価しました。<ol><li>適応摂食の開始から薬物治療の終了まで、マウスの体重を毎日記録します。</li>
		<li>各実験マウスの糞便の粘稠度を注意深く観察し、排便を正常、軟便、水様性下痢の3つの状態のいずれかとして記録します。</li>
		<li>実験動物の糞便出血を、出血なし、出血が少ない、便中の血液が見えるという3つの条件の1つとして記録します。</li>
	</ol></li>
	<li>血清中のIL-6レベルの検出<ol><li>マウスをLJZDまたは5-ASAで9週間治療します。左手でマウスの首の皮膚をつかみ、実験台を軽く押して外側褥瘡の位置を取り、マウスを固定します。ハサミでネズミのひげを切り落とします。マウスのひげをハサミで慎重に切り取り( 材料表を参照)、血液汚染を防ぎます。 注:自由に小刻みに動くことができないマウスは、適切に固定されていると見なされました。これが起こらない場合は、マウスを修正する必要があります。</li>
		<li>2%イソフルランを吸入してマウスを麻酔する。眼球の周りの皮膚をエタノールで殺菌します( 材料表を参照)。側面の目の皮膚をそっと押して、眼球をうっ血させて突き出させます。</li>
		<li>肘ピンセットで眼球を固定し、眼球を正確かつ迅速に取り除きます。遠心チューブに血液を滴下させます( 材料表を参照)。その過程で、マウスの心臓をタップして採血を高速化します。</li>
		<li>採取した血液を室温で30分間保存し、3,500× g で10分間遠心分離します。上清を採取し、IL-6含有量検出キットの指示に従ってIL-6レベルを検出します( 材料表を参照)。</li>
	</ol></li>
	<li>結腸直腸組織の分離<ol><li>採血後、動物倫理に従って5%の過剰摂取イソフルランと子宮頸部脱臼を吸入してマウスを安楽死させます( 資料表を参照)。</li>
		<li>マウスを極低温解剖学的環境に保管します。マウスを仰臥位で固定します。下腹部の毛をハサミで切り、エタノールで殺菌します。</li>
		<li>まぶた鉗子で2つの大腿根と腹部正中線の交点をつまみます( 材料表を参照)。はさみで横切開を約1〜1.5cm切ります。</li>
		<li>横切開の中間点から剣状突起に向かって腹部の正中線に沿って縦方向の切開を切ります。</li>
		<li>肛門の方向に大腸周囲組織を切除し、結腸直腸を周囲の組織から分離します。大腸を傷つけないように注意してください。</li>
		<li>腹部の皮膚を横に押して、結腸直腸を完全に露出させます。まぶた鉗子で腹腔から結腸直腸を取り除き、肛門から盲腸までのセグメントを切り取ります(除く)。全長は約10cm。得られた結腸直腸組織を4°Cの生理食塩水に保存します。</li>
	</ol></li>
	<li>直腸の長さと重さの評価<ol><li>生理食塩水を5mLの針( 材料表参照)で4°Cで抽出し、結腸直腸の内部を洗い流します。次に、結腸を吸収紙の上に置き、組織の水分を吸収します。</li>
		<li>結腸直腸組織の重さを量り、A4用紙に置いて長さを測定します。</li>
	</ol></li>
	<li>大腸の腫瘍の数を測定する<ol><li>大腸を縦に切って完全に広げ、大腸内の腫瘍の数と大きさを観察します。</li>
	</ol></li>
	<li>結腸直腸の病理学的分析<ol><li>結腸直腸を4%パラホルムアルデヒドで24時間固定します。固定された直腸組織を溶融パラフィンに埋め込み、組織凍結ミクロトームによって厚さ5μmで連続的に切片化します。</li>
		<li>Hou et al.24の手順に従って、切片をキシレンで脱ワックスし、次いで段階濃度のエタノールで脱水します。ヘマトキシリン溶液で5分間染色した後、切片を純水ですすいでください。その後、0.5%エオシン溶液で1分間染色します( 材料表参照)。</li>
		<li>再度グラジエント脱水とキシレン透明処理を行う。切片を密封し、光学顕微鏡(材料表を参照)で観察し、Xie et al.25によって説明されているように写真を撮ります。</li>
	</ol></li>
	<li>大腸の免疫組織化学的分析<ol><li>上記の方法に従って切片を脱ワックスし、脱水する。Gok et al.26 によって記述されているように、高圧熱修復技術で切片の抗原を修復します。</li>
		<li>切片を内因性ペルオキシダーゼ遮断薬に室温で15分間浸します。ヤギの血清で切片を密封します( 材料表を参照)。</li>
		<li>一次抗体ZO-1(1:1000)、オクルージン(1:1000)、KI67(1:500、 材料表参照)を切片に加え、4°Cで一晩インキュベートします。 切片をPBSバッファー( 材料表参照)で洗浄し、汎用二次抗体(1:5000、 材料表参照)を添加し、37°Cで30分間インキュベートします。</li>
		<li>DABソリューション( 材料表を参照)を発色用のセクションに追加します。切片をヘマトキシリン溶液で対比染色します。</li>
		<li>脱水し、透明化し、切片を再び密封します。光学顕微鏡でタンパク質の発現を観察します。</li>
	</ol></li>
</ol>

Liujunzi煎じ薬:UC-CRC予防のための効果的な治療法

著者は何も開示していません。

大腸がんは世界で最も多いがんの1つであり、毎年約1,148,000人が新たに発症し、576,000人以上が死亡しています。大腸がんは、遺伝性、散発性、UC-CRC31など、さまざまな原因に応じて3つのタイプに分けることができます。UCなどの炎症性腸疾患患者における大腸がんの発生率は、一般集団のそれよりも有意に高い。UCは、典型的な腺腫-腺癌経路とは異なる炎症性-がん経路を介?...

大腸がん(CRC)は、一般的な消化器悪性腫瘍であり、世界で3番目に多い悪性腫瘍であり、世界で2番目に多い死因であり、世界のがん発生率の10%、がん関連死全体の9.4%を占めています1,2。遺伝的要因、慢性炎症、高脂肪食、糖尿病、および異常な腸内細菌叢は、大腸がんの危険因子です3,4。その中で、炎症性腸疾患、特に潰瘍性大腸炎(UC)は、CRC 5,6の明らかな危険因子です。UC関連CRC(UC-CRC)は、大腸の慢性炎症に基づく炎症、非定型過形成、および癌の移行過程であり、CRC 7,8の典型的な腺腫-腺癌発生モデルとは異なります。一般集団と比較して、炎症性腸疾患の患者では大腸がんのリスクが約10〜40倍高くなります9。
現在、大腸がんの標準治療は依然として手術であり、腫瘍の位置と病期に応じて、放射線療法、全身薬物療法、またはその両方の組み合わせが可能です10。これらの伝統的な治療法は大きな進歩を遂げていますが、大腸がんの不均一性と再発率が高いため、予後は不良であり、治療効果は理想的ではありません11,12。したがって、早期発見、早期診断、総合的治療が大腸がん患者の生存率向上の鍵であり、特に大腸がんから大腸がんへの転換に注意を払うことが重要である。長年にわたり、伝統的な漢方薬(TCM)は、その副作用が限られ、有効性が高いため、UC-CRCまたは慢性胃炎の治療において多くの注目を集めてきました。弁証法的治療に基づいて、さまざまな世代の有名な漢方医が、黄旗建中煎じ薬13、思順子煎じ薬14、思神丸薬15など、多数の古典的な処方箋を作成しました。
劉潤子煎じ薬(LJZD)は、明代に編纂されたYi Xue Zheng Zhuanの作品に由来し、TCM16の古典的な処方箋です。表1に示すように、LJZDは、Codonopsis pilosula (Franch.)ナンフ。(Dangshen)、Poriaのココス(Schw.)オオカミ(Fuling)、Atractylodesのmacrocephala Koidz。(Baizhu)、Glycyrrhiza uralensis Fisch。(ガンカオ)、柑橘類のreticulata Blanco(Chenpi)およびPinellia ternata(Thunb。気を補充し、脾臓を強化し、湿気を乾燥させ、痰を解消する効果があるブライト(Banxia)。現代の臨床現場では、慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍の治療によく使用されます。現代の薬理学的研究は、LJZDおよび修正LJZDがUCおよび消化管癌の補助療法において高い適用価値を有することを示している17,18,19。
現在、UC-CRCマウスモデルを構築するには多くの方法がありますが、アゾキシメタン(AOM)/デキストラン硫酸ナトリウム(DSS)誘導マウスモデルは、最も広く使用されているUC-CRCモデルです。臨床症状、形態学的、および病理学的観察により、このモデルがヒトのUC-CRCと非常によく似ていることが証明されています20,21。まず化学発がん物質AOMで発がんを誘導し、その後マウスを黄砂の炎症刺激環境に連続的に曝露して、腸管粘膜上皮の継続的な損傷と修復をシミュレートし、UC-CRCマウスモデルを構築することを基本原理とする22。本研究の目的は、短期的にAOMの腹腔内注射とDSSの周期的刺激によるUC-CRCのマウスモデルを確立し、UC-CRCに対する薬物の効果とLJZDの分子メカニズムを評価して、UC-CRCの治療に科学的根拠を提供することです。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-amino salicylic acid</td>
			<td>Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td>3819413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>NO 210726210100853716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slip</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>10212432C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB color development kit</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>2005289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dewatering machine&#160;</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JJ-12J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran sulfate sodium</td>
			<td>Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>MB5535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin-eosin dye</td>
			<td>Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>B1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-6</td>
			<td>Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd</td>
			<td>MM-0163M2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd</td>
			<td>R510-22-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KI67 primary antibody</td>
			<td>Google Biotechnology Inc</td>
			<td>GB121141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Object slide</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>10212432A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Occludin primary antibody</td>
			<td>Affnity</td>
			<td>DF7504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orthostatic optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathological microtome</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZO-1 primary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab221547</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of coloproctitis cancer model in mice and evaluation of therapeutic effect of chinese medicine

大腸がん(CRC)は消化器系の一般的な悪性腫瘍であり、世界で3番目に多い悪性腫瘍であり、悪性腫瘍関連死因の第2位となっています。潰瘍性大腸炎(UC)は前癌性病変であり、UC関連CRC(UC-CRC)は大腸がんの最も一般的なサブタイプです。したがって、合理的なUC-CRCモデルは、新薬開発の基礎であり、保証です。漢方薬(TCM)は、その優れた有効性により、UC-CRCの治療に広く使用されています。中医学の古典的な強壮剤処方として、Liujunzi煎じ薬(LJZD)はUC-CRCの治療に広く使用されています。本研究では、アゾメタンとデキストラン硫酸ナトリウムを併用してUC-CRCモデルを確立し、LJZDを投与した。このデータから、LJZDは、マウスの体重、大腸の長さ、病理学的および炎症的因子、大腸バリア機能、およびがんマーカーを使用して、UC-CRCのがん転移を効果的に抑制できることが確認されました。このプロトコルは、UC-CRC の予防と治療における TCM の有効性を評価するためのシステムを提供します。

Colorectal cancer (CRC) is a common gastrointestinal malignancy, the third most common malignancy, and the second most common cause of death in the world, accounting for 10% of the global cancer incidence and 9.4% of the total cancer-related death1,2. Genetic factors, chronic inflammation, high-fat diet, diabetes, and abnormal intestinal flora are risk factors for CRC3,4. Among them, inflammatory bowel disease, especially ulcerative coloproctitis (UC), is a clear risk factor for CRC5,6. UC-associated CRC (UC-CRC) is a transition process of inflammation, atypical hyperplasia, and cancer based on chronic inflammation of the colorectum, which is different from the typical adenoma-adenocarcinoma development model of CRC7,8. Compared with the general population, the risk of CRC is approximately 10-40 times higher in patients with inflammatory bowel disease9.
Currently, surgery is still the standard treatment for CRC, and depending on the location and stage of the tumor, radiation therapy, systemic drug therapy, or a combination of both are possible10. Although these traditional treatment modalities have made great progress, due to the high heterogeneity and recurrence rate of CRC, the prognosis is poor, and the treatment effect is not ideal11,12. Therefore, early detection, early diagnosis, and comprehensive treatment are key to improving the survival rate of CRC patients, and it is particularly important to pay attention to the transformation of UC to CRC. Over the years, traditional Chinese medicine (TCM) has attracted much attention in the treatment of UC-CRC or chronic gastritis due to its limited side effects and significant efficacy. Based on dialectical treatment, famous Chinese medicine practitioners of various generations have created a large number of classic prescriptions, such as Huangqi Jianzhong decoction13, Sijunzi decoction14, and Sishen pill15.
Liujunzi decoction (LJZD) originated from the works of Yi Xue Zheng Zhuan compiled in the Ming Dynasty and is a classic prescription in TCM16. As shown in Table 1, LJZD consists of six traditional herbs, including Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. (Dangshen), Poria cocos (Schw.) Wolf (Fuling), Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu), Glycyrrhiza uralensis Fisch. (Gancao), Citrus reticulata Blanco (Chenpi) and Pinellia ternata (Thunb.) Breit (Banxia), which has the effect of replenishing qi and strengthening the spleen, drying dampness, and resolving phlegm. In modern clinical practice, it is often used to treat chronic gastritis, gastric ulcers, and duodenal ulcers. Modern pharmacological research has shown that LJZD and modified LJZD have high application value in the adjuvant treatment of UC and digestive tract cancer17,18,19.
At present, there are many ways to construct UC-CRC mouse models, but the azoxymethane (AOM)/dextran sulfate sodium (DSS) induced mouse model is the most widely used UC-CRC model; the clinical symptoms, morphological, and pathological observations have proved that the model is very similar to human UC-CRC20,21. The basic principle is to first induce carcinogenesis with chemical carcinogen AOM and then continuously expose mice to the inflammatory stimulation environment of DSS to simulate the continuous damage and repair of intestinal mucosal epithelium, thereby constructing a UC-CRC mouse model22. The aim of this study is to establish a mouse model of UC-CRC by intraperitoneal injection of AOM and cyclic stimulation of DSS in the short term and to evaluate the effect of the drug and the molecular mechanism of LJZD on UC-CRC in order to provide a scientific basis for the treatment of UC-CRC.

著者スポットライト:大腸がんに対する伝統的な中国の治療法としてのLiujunzi煎じ薬

マウスにおける大腸肛門炎モデルの設定と漢方薬の治療効果評価

This study was on the prevention and treatment of coloproctitis cancer with traditional Chinese medicine. We aim to establish a mouse model for coloproctitis cancer and evaluate traditional Chinese medicine indicators. We confirmed that the Chinese medicine Liujunzi decoction is a effective treatment for coloproctitis cancer prevention.In the future, we will work to identify more sensitive biomarkers for colon and rectal cancer and screen Liujunzi decoction for therapeutic targets.

LJZDの煎じ薬は、 表1 の薬物の組成比および 図1AのTCMの煎じ薬方法に従って調製した。 図1Bに示した時点によると、マウスに7日目に 1mg/mLのAOMを腹腔内注射し、3週目、6週目、9週目に 2%DSSを含む飲料水をマウスに自由に投与した。UC-CRCマウスモデルは、15週目に 正常に確立されました。一方、マ?...

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このプロトコルはデキストランの硫酸塩ナトリウムと結合されるアゾメタンによって引き起こされる潰瘍性coloproctitis準のcolorectal癌のマウス モデルを提供する。このモデルは、大腸がんの予防と治療における伝統的な漢方薬化合物の有効性を評価するために使用されました。

Colorectal cancer (CRC) is a common malignancy of the digestive system and has become the third most common malignancy worldwide and the second leading ...

この研究は、漢方薬による大腸炎がんの予防と治療に関するものでした。大腸肛門炎がんのマウスモデルを確立し、漢方薬の指標を評価することを目指します。漢方薬「劉潤子煎じ薬」が大腸炎がん予防に有効な治療法であることを確認しました。将来的には、結腸がんや直腸がんのより感度の高いバイオマーカーの同定や、治療標的に対するLiujunzi煎じ薬のスクリーニングに取り組んでいきます。

establishment-coloproctitis-cancer-model-mice-evaluation-therapeutic

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment of Coloproctitis Cancer Model in Mice and Evaluation of Therapeutic Effect of Chinese Medicine

596 ビュー.  Changchun University of Chinese Medicine. この研究は、漢方薬による大腸炎がんの予防と治療に関するものでした。大腸肛門炎がんのマウスモデルを確立し、漢方薬の指標を評価することを目指します。漢方薬「劉潤子煎じ薬」が大腸炎がん予防に有効な治療法であることを確認しました。将来的には、結腸がんや直腸がんのより感度の高いバイオマーカーの同定や、治療標的に対するLiujunzi煎じ薬のスク?...

ビデオ: 著者スポットライト:大腸がんに対する伝統的な中国の治療法としてのLiujunzi煎じ薬

Colorectal cancer (CRC) is a common malignancy of the digestive system and has become the third most common malignancy worldwide and the second leading cause of malignancy-related death. Ulcerative coloproctitis (UC) is a precancerous lesion, and UC-associated CRC (UC-CRC) is the most common subtype of CRC. Therefore, a reasonable UC-CRC model is the cornerstone and guarantee of new drug development. Traditional Chinese medicine (TCM) has been widely used in the treatment of UC-CRC due to its good efficacy. As a classic tonic prescription of TCM, Liujunzi decoction (LJZD) has been widely used in the treatment of UC-CRC. In this study, a UC-CRC model was established by combining azomethane and dextran sulfate sodium, and the LJZD was administered. The data confirmed that LJZD can effectively inhibit cancer transition in UC-CRC by using mouse body weight, colorectal length, pathological and inflammatory factors, colorectal barrier function, and cancer markers. This protocol provides a system for evaluating the efficacy of TCM in the prevention and treatment of UC-CRC.

This protocol provides a mouse model of ulcerative coloproctitis-associated colorectal cancer induced by azomethane combined with dextran sulfate sodium. The model was used to evaluate the efficacy of traditional Chinese medicine compounds in the prevention and treatment of colorectal cancer.

医学

Preparation of Liujunzi Decoction (LJZD) for the Treatment of Ulcerative Coloproctitis-Colorectal Cancer  (UC-CRC)

To begin place Dang Shen, Bai Zhu, into a specialized ceramic pot. Add 1000 milliliters of distilled water and let it soak at room temperature for one hour. Using a grinder, grind 12 grams of Fu ling into a fine powder.Then, soak the powdered Fu ling in 300 milliliters of distilled water in a separate container for one hour at room temperature. Mix the prepared Chinese herbal mixture in the specialized ceramic pot. Boil the mixture and maintain it over medium heat until the decoction volume reduces to 300 milliliters.Combine the filtrate obtained from the decoction and continue boiling until the volume reduces to 150 milliliters. Then centrifuge the concentrated liquid at 10, 000 G for five minutes. Concentrate the obtained supernatant to 30 milliliters over medium heat.Transfer the final concentrate to a dish and dry it using an electric drying oven until only the solute remains as a powder. Now, weigh the obtained powder, and dissolve it in sterile distilled water to create the daily dosage for mice. To prepare five amino salicylic acid, weigh 64 milligrams of five amino salicylic acid powder, and dissolve it in 200 milliliters of sterile distilled water.

潰瘍性大腸肛門炎-結腸直腸癌(UC-CRC)の治療のためのLiujunzi煎じ薬(LJZD)の調製

Establishment of an Ulcerative Coloproctitis-Colorectal Cancer (UC-CRC) Model to Evaluate the Therapeutic Effect of Chinese Medicine

To begin, gently position the mouse with its belly up and the head slightly down. Grasp the back skin to secure the abdominal area and insert a one milliliter syringe needle, one centimeter to the right of the midline of the abdomen at the intersection of the line, connecting both thighs. Gradually insert the one milliliter syringe needle to a depth of three to five millimeters under the skin.Insert the needle approximately 0.3 to 0.5 millimeters into the abdominal cavity at a 45 degree angle. Once the needle tip passes through the abdominal muscle, notice a sudden decrease in resistance. Slowly inject 0.1 milliliters of the azoxymethane injection solution per 10 grams of body weight into the mice.Subsequently, retract the syringe gently. Then add 500 milliliters of sterile distilled water to 10 grams of DSS. To prepare a 2%DSS solution.Mix the solution with a vortex mixer and store at four degrees Celsius until use, administer the prepared LJZD and five amino salicylic acid solution daily at a consistent time via gastric gavage to the respective groups at week seven and week 15.

潰瘍性大腸炎-大腸癌(UC-CRC)モデルの確立による漢方薬の治療効果評価

Evaluation of an Ulcerative Coloproctitis-Colorectal Cancer (UC-CRC) Model and Efficacy of Liujunzi Decoction (LJZD)

To begin, establish the UC-CRC mouse model and administer the prepared LJZD and 5-ASA solution to the respective groups. After the drug treatment, monitor the weight of mice daily from the beginning of adaptive feeding until the end of drug treatment. Diligently observe and document the fecal consistency of each experimental mouse, categorizing it as normal, loose stools or watery diarrhea.Carefully document any fecal bleeding observed in the experimental animals, categorizing it into no bleeding, minimal bleeding, or visible blood in the stool. To separate the colorectal tissue, maintain the euthanized mice within a cryogenic anatomical environment. Secure the mice in a supine position.Using scissors, trim the lower abdominal hair and sterilize the area with ethanol. Using eyelid forceps, gently grasp the intersection point between the two thigh roots and the abdominal midline. Then use scissors to create a one to 1.5 centimeters long transverse incision.Perform a longitudinal incision along the median line of the abdomen, starting from the midpoint of the transverse incision to the xiphoid process. Carefully detach the peri-colorectal tissues in the direction towards the anus, separating the colorectum rom the surrounding tissue. Gently push aside the abdominal skin to fully expose the colorectum.Using eyelid forceps, extract the colorectum from the abdominal cavity and section it from the anus to the cecum. Preserve the collected colorectal tissues in saline at four degrees Celsius. The UC-CRC model group had a significant weight loss compared to the control group which was alleviated by LJZD treatment.LJZD treatment improved the disease activity index compared with the UC-CRC model group.