ミニブタにおける単一段階組織工学尿路上皮管の手術モデル

まず、手術の12時間前に成長したゲッティンゲンのミニブタを絶食します。麻酔をかけたブタで標準的な下部正中線開腹術を行った後、腹膜間膀胱を傷口に引き寄せます。次に、膀胱前壁で予防的止血を行い、ジアテルミアで排尿筋を切開します。

次に、ハサミで内側の粘膜層を切断して、壁全体の膀胱セグメントを切除します。膀胱壁を高速吸収性の編組ランニング縫合糸で閉じ、近位の開口部を1平方センチメートル残します。切除した標本の粘膜層を無菌状態で慎重に解剖し、粘膜標本を1平方ミリメートルのマイクログラフトにミンチして足場を埋め込みます。

鉗子を使用して、粘膜粒子を1〜6の拡張比で適合した生分解性メッシュに配置します。マイクログラフトを上に向けてメッシュを、コラーゲン溶液で満たされた長方形の鋼型の内側に置きます。固化後、穴あき鋼板に載せたナイロンメッシュにハイドロゲルをスライドさせ、金型を静かに取り出します。

ナイロンメッシュを配置し、次にゲルの上に鋼板を配置して、ヒドロゲルから水を排出し、次に鋼板の上に120グラムの重りを置いて5分間受動的に圧縮します。圧縮後、ウェイトとナイロンメッシュをそっと取り外します。これで、移植片は外科的取り扱いの準備が整いました。

マイクログラフトをステントに向け、平らにした足場を生分解性ステントの周りで転がし、ゆっくりとした吸収性モノフィラメントを縫合糸で縦方向に所定の位置に縫合します。ステントをキャップに縫合することにより、ステントの内腔内に順行性結腸浣腸ストッパーを固定します 中断された非吸収性縫合糸。足場が完成したら、ゆっくりとした吸収性モノフィラメントランニング縫合糸を使用して、管状構造物を膀胱前壁の残りの開口部に吻合します。

巾着縫合糸で吻合を締め、導管の遠位端を結紮します。恥骨靭帯から腹膜フラップを採取し、管状の足場を縦方向にパッチします。尿道カテーテルを介して生理食塩水を注入して、吻合部の開存性を確認します。

右側の尾側乳腺の隣の正中線に対して横方向に経筋膜チャネルを鈍く解剖します。コンジットを皮下ポケットに入れ、吸収できない皮膚レベルの縫合糸でコンジットに印を付けます。腹筋の前筋筋膜を閉じた後、非吸収性モノフィラメントランニング縫合糸で皮膚を閉じます。

6週間の観察の終わりに、内視鏡検査で導管内腔の連続性と上皮の内層を検査します。コントラスト強化コンピューター断層撮影を実施して、コンジットの開存性を確保します。6週間の観察後、顕微鏡的足場組織評価では、宿主拒絶反応や感染の兆候は見られず、管状足場は開存しており、遮るものがありませんでした。

組織学的評価では、尿路上皮起源の層状管腔上皮が足場全体を覆っており、6週間後もまだ見える強化生体材料の残骸があることが示されました。