高速液体クロマトグラフィーを用いたマウス眼組織および非眼組織における食事性ビタミンA代謝物の定量分析

私たちの研究室では、2つの重要なビタミンAトランスポーター、STRA6とRbpr2を調査しています。これらの膜タンパク質は、血液中のビタミンAが目や肝臓などの組織に摂取されるのを促進します。HPLCを通じて、トランスジェニックマウスの全身性ビタミンAプロファイルを作成することにより、これらのトランスポーターの生理学的機能を調べることができます。

また、私たちの分野では、タンパク質の結合親和性や反応速度を調べる表面プラズモン共鳴法(SPR)があり、SPRを応用してSTRA6とRBP4レチノール結合複合体であるRbpr2との結合を調べています。この方法の現在の課題の1つは、サンプルスループットです。溶媒の蒸発ステップは、このプロトコルの主要なボトルネックであり、将来の研究者は、真空蒸着と比較してはるかに高いスループットを持つ窒素ブローダウン蒸発などの乾燥方法を試す必要があります。

私たちは、肝臓での機能を通じて全身性ビタミンAの恒常性を維持する上での重要な促進因子としてのRbpr2の役割を決定しました。また、トランスジェニックマウスにおけるRbpr2発現の中断は、HPLCを通じて定量化されたように、すべての検査全身組織でビタミンAレベルの重大な混乱を引き起こしました。HPLCベースのビタミンA検出における他のほとんどのプロトコルは、リバースフェイス法を利用しており、通常、レチノイド異性体が別々に分離することはできません。

私たちの通常の顔のプロトコルでは、レチナールデヒドとレチナール異性体の両方の分解能が可能で、詳細なビタミンAプロファイルを作成することができます。これは、光伝達カスケードにおけるビタミンA光異性体化の重要性を考えると重要です。