ヘリコバクター・ピロリおよび抗生物質耐性を検出するための胃粘膜定量的ポリメラーゼ連鎖反応解析

この研究では、胃粘膜にQPCRを使用して、ヘリコバクターピロリとその抗生物質耐性を迅速に検出し、この感染症の治療に臨床的に重要な迅速で正確な診断ツールを提供します。QPCRの造影剤標準液の品質を確保することが重要です。したがって、ヘリコバクター・ピロリ菌を検出するためのQPCR ICは、特定の基準に拘束され、各条件を同時に満たす必要があります。

早期偏差は、再実行が必要なテストを無効にします。ヘリコバクター・ピロリ菌と薬剤耐性を検出するための強力で包括的な診断ツールが必要です。胃粘膜QPCRを使用します。

この目的のために、特定のプライマーを使用します。今後、より大きな患者グループを対象とした研究により、胃粘膜QPCRの可能性が検証され、その可能性が最大限に発揮され、ヘリコバクター・ピロリの診断、モニタリング、治療が強化されると信じています。まず、生検クランプバルブを開き、ゆっくりと利き手に移動します。

鉗子の頭部が視界に入ったら、クランプフラップを開き、サンプリング部位の胃粘膜にある内視鏡を操作します。わずかな圧力を加え、生検鉗子を閉じて胃粘膜組織を固定します。ペンチを使用して組織サンプルを抽出し、保存液の入ったサンプリングチューブに入れます。

すべてのサイトをサンプリングしたら、サンプリングチューブのカバーを締めて密封し、乾燥を防ぎます。チューブの外側に固有の識別番号をラベル付けします。収集したサンプルは、保管を避けて、できるだけ早くテストのために提出してください。

金属製の浴槽の温度は、あらかじめ100°Cに調整しておきましょう。サンプルが凍結している場合は、取り出して室温に戻します。ライセートを十分に混合して、アミノ二酢酸樹脂を懸濁します。

100マイクロリットルの溶解液をフィルターエレメント付きの遠心分離管に入れ、胃粘膜を追加します。ボルテックス振動を使用して内容物を混合します。遠心分離管を100°Cの金属浴に10分間入れます。

加熱後、チューブを取り外し、室温まで冷まします。サンプルを9, 500Gで5〜10分間遠心分離し、上清を別の滅菌ラベル付き遠心分離チューブに慎重に移します。すぐに次のステップに進まない場合は、サンプルを摂氏4度で一時的に保管してください。

プライマープローブ、混合酵素溶液、検出バッファーをキットから取り出します。すべてのコンポーネントを氷の上で、または摂氏2〜8度で溶かします。サンプルを混合するには、サンプルを静かに振って、低速で短時間の遠心分離を行います。

12.5マイクロリットルの検出バッファー、7マイクロリットルのプライマープローブ、および0.5マイクロリットルの酵素溶液を混合します。チューブ内の内容物を混合し、短時間遠心分離します。20マイクロリットルのPCR反応溶液を分注し、各PCR反応ウェルに5マイクロリットルの核酸を加えます。

反応チューブを蛍光PCRサーモサイクラーに挿入します。サイクルパラメータを設定し、プログラムを実行します。58°Cで蛍光シグナルを収集し、目的のマーカーを採取します。

反応後、データを保存し、特定のQPCRソフトウェアを使用して分析します。QPCRアッセイでは、サンプルA、B、C、Eにヘリコバクターピロリ菌の存在が確認され、サンプルFは陰性でした。サンプルAは両方の抗生物質に感受性がありました。

サンプルBは、クラリスロマイシンとレボフロキサシンの両方に対して耐性を示しました。サンプルCはクラリスロマイシンに対する耐性を示しましたが、レボフロキサシンに対しては依然として感受性があります。サンプルEはレボフロキサシンに耐性がありましたが、クラリスロマイシンには感受性がありました。