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요약

이 문서는 단일 참가자 이내 또는 그룹 간의 스트레스로 심리적, 생리 및 neuroendocrine 반응을 측정하는 연구를 수 있도록 참가자의 심리적 스트레스를 유발을위한 프로토콜을 설명합니다.

초록

이 문서는 실험실 환경에서 사용하기 위해 심리적 스트레스 프로토콜을 보여줍니다. 연구자들은 건강과 질병의 스트레스 반응의 생물 학적 경로를 연구하도록 프로토콜은 스트레스와 불안에 연구의 진행에 기본입니다. 한 다수의 프로토콜이 연구실에 스트레스 반응을 유도하는 존재이지만, 많은 방치는 자연 컨텍스트 또는 제공하는 사회적, 심리적 스트레스의 측면을 통합합니다. 심리적 스트레스 프로토콜, 메타 분석은 모금 사회 스트레스 테스트 (TSST)는 TSST의 원래 설명에 스트레스 호르몬 반응 2. 연구에 가장 유용하고 적절한 표준 프로토콜입니다 것을 제시, 연구자들은 절차를 설계하고 평가하는 모색 건강한 자원 봉사자의 대부분의 신뢰할 수있는 스트레스 반응. 3 유도 능력이 연구자들은 심장 박동, 혈압과 여러 내분비 스트레스 m의 고도를 발견TSST에 대응 arkers (심리적 스트레스)가 식염수 주사 (물리적 스트레스)에 비해. 3 TSST가 여러 연구 그룹의 요구를 충족하도록 수정되었습니다 있지만, 그것은 일반적으로 도착시 대기 기간, 예상 음성으로 구성되어 있습니다 하나 이상의 복구 기간 다음에 준비, 음성 성능 및 언어적 연산 성능 기간. TSST는 연설을 준비하고 전달하기 위해 참가자 있어야하고, 말로 사회적 평가하는 관객의 존재에 도전 산술 문제에 대응 3. 사회 평가 및 uncontrollability가 TSST에 의한 응력 유도의 핵심 구성 요소로 확인되었습니다. 4를 위해 사용 10 년간 TSST의 목표는 체계적으로 작업하는 동안 (고전력 증폭기) hypothalamic - 뇌하수체 - 부신이나 교감 - 부신 - 골수의 (SAM) 축의 반응, 불안 및 활성화의 차이를 측정하기 위해서는 스트레스 반응을 유도하는 것입니다 1. Researc그녀는 일반적으로 자기보고 불안의 변화, 생리 조치 (예 : 심장 박동), 및 / 또는 TSST에 대응 neuroendocrine 인덱스를 (스트레스 호르몬 cortisol 등) 평가. 대부분의 조사는 혈액 수집 기술의 혼란함을 주죠 스트레스를 줄이기 위해 혈액 샘플링 대안으로 cortisol과 알파 - 아밀라아제 (자율 신경계 활성화의 마커)와 같은 스트레스 마커를위한 타액 표본을 채택했습니다. TSST를 완료 개인 경험 변화 이외에, 연구자들은 다른 치료 그룹 (예 : 임상 비해 건강한 통제 샘플) 또는의 효과 스트레스 줄이고 개입을 사이에 변화를 비교할 수 있습니다 1.

프로토콜

1. 설정

  1. 모든 연구는 해당 기관 검토위원회 또는 사전 데이터 수집에 인간 주제 검토위원회의 승인을 받아야한다.
  2. 이상적으로, 두 객실 TSST을 수행할 수 있어야합니다. 편안한 대기실은 TSST를 시작 및 복구 기간 동안 이전에 참가자들에게 제공한다. 별도의 인터뷰 룸은 참신하고 uncontrolability을 소개하는 연설 준비, 음성 성능 및 TSST의 수학 부분 동안 사용해야합니다.
  3. 참가자는 남부 동맹 면접 및 참가자의 시야에 위치 비디오 또는 오디오 녹음 장비를 대적하게 될 것입 있도록 인터뷰 룸을 마련. 면접은 TSST 동안 스트레스를 증가 TSST 동안 착용하는 연구실 코트를 사용할 수 있어야합니다. 참가자들과 눈을 접촉을 유지하고 TSST 동안 정서적 얼굴 표정을 만드는 삼가해에 면접을 지시한다.
  4. 조심스럽게 일을 고려전자 연구 질문 (들)에 의존 측정을 선택합니다. : 분석 및 스트레스 반응의 다양한 측정 출판에 대한 지침은 여러 소스 (psychophysiological 조치의 간행물 및 분석에 대한 지침이 Psychophysiological 연구 학회에서 제공하는 제공하는 http://www.sprweb.org/journal/index. CFM # 지침은 ). 실험의 설계시 이러한 리소스의 5 상담을 권장합니다.
  5. TSST에 생리적, 심리적 또는 내분비 반응을 기록하는 데 필요한 모든 장비를 설정합니다. 종이와 연필 또는 전자 버전,이 장비는 (이에 제한되지 않음) 전극 및 전자 장비 및 / 또는 소프트웨어의 심장 박동, 심장 혈관 반응, 피부 전도성이나 반응, 눈 깜짝할 새에, 근육 수축 / 톤, 호흡 율을 기록 포함될 수 있습니다 이러한 인보이스 상태 특성 불안과 같은 심리적 악기entory, 6 튜브와 소변, 혈액 또는 타액 샘플을 다른 수집 자료,. 또는 비디오 녹화 장비는이 시연을 위해, 우리는 (ECG) TSST 동안 심장 박동을 측정하는 전극, 그리고의 반복 관리 세 리드 심전도를 사용하는 것입니다 스트레스 전후 심리적 반응을 측정 상태 특성 불안 인벤토리. 우리는 심장 박동을 기록하는 생리 반응을 측정하기위한 기본적인 녹화 시스템 (BioPac MP36 시스템)을 사용합니다.
  6. 혈액 샘플 (오히려 타액보다) 실험을 통해 수집된되는 경우 수집하는 동안 통증과 고통을 최소화하기 위해 노력하여야한다. 혈액 수집 절차는 추가적인 신체적 혹은 심리적 스트레스, TSST에 혼란함을 주죠 응답을 도입할 수 있습니다.
  7. 참가자가 도착하면, 연구실로 그들을 환영합니다. 편안하게 정보를 동의하고 좌석 참가자를 구합니다.
  8. 통계 정보, 심사 정보 또는 additio를 수집실험에 의해 필요한 nal 도착 측정합니다. 참가자는 지난 시간에 음식이나 음료를 (물 이외의) 소비되지 않았음을 확인하면 cortisol 측정을 수집. 금식의 짧은 기간은 분석을 위해 타액 샘플을 수집 것입 경우 권장됩니다. 산성 음식이나 음료 또는 눈에 보이는 오염과 관련된 산도의 변화는 타액 마커의 정확한 측정을 방해할 수 있습니다. 관심 조치가 약물이나 다른 metabolites에 의한 오염 수있다면 소변 독극물 검사가 필요할 수 있습니다. 스트레스 반응 (예 : 약품은, 질병은, 수면, 최근 스트레스 행사, 사회 공포증)이 또한 심사시 참가자 고려되어야 영향을 미칠 수있는 요인에 대한 정보.

2. 사전 응력 측정

  1. 대기실에서 45 분 동안 편안하게 기다릴 수있는 참가자를 지시한다. 넌 정말 EMO를 포함하는 잡지 등 읽기 자료와 참가자를 제공하도록 선택할 수 있습니다tionally 중립적인 콘텐츠 또는이 기간 동안 다른 감정적으로 중립적인 활동.
  2. 45 분 대기 기간 후 미리 스트레스 불안을 평가하기위한 국가의 특성 불안 인벤토리를 관리 6. 또는, 스트레스, 불안 또는 휴식의 상태 변화를 평가하기위한 다른 악기가 (예 : 시각 아날로그 저울) 관리 수 있습니다.
  3. "사전 스트레스"타액 샘플을 수집합니다. 물로 그들의 입을 헹굴 수있는 참가자를 지시한다. 참가자에게 빨대의 50~10cm 섹션과 깨끗한 일회용 2.0 ML의 폴리 프로필렌의 병을주세요. 입 바닥에 수영장에 타액이 다음 유리병에 빨대로 타액을 통과 수 있도록 앞으로 자신의 머리를 기울 참가자 지시. 참가자의 타액의 약 1.5-2.0 ML를 수집합니다. 또는 타액을 흡수 치과 심지 (또는 이와 유사한 재료)를 사용하고 타액과 함께 자료를 씹어 또는 포화에 참가자 지시에 의해 수집될 수 있습니다. 경우 POSsible, 개인 정보와 함께 참가자를 제공하기 위해 방을 두십시오. 라벨과 가능한 한 빨리 -20 ° C에서 모든 타액 샘플을 저장합니다.
  4. 미리 스트레스 생​​리 측정 5 분 기록.

3. TSST

  1. 당신은 별도의 인터뷰 룸을 (TSST의 스트레스 효과를 높이기 위해)를 사용해야한다면, 인터뷰 룸에 대기실에서 참가자 가져.
  2. TSST 연설 준비 기간을 시작하려면 참가자에 다음 스크립트를 읽고 : "이것은 작업의 연설 준비 부분이며 당신은 정신적으로 당신의 이상적인 직업에 대한 좋은 후보 될 이유를 설명하는 다섯 분 연설을 준비하는 것입니다. 당신의 연설은 연설에서 훈련 심사 위원에 의해 촬영하고 검토하게됩니다. 당신은 준비 10 분하고 시간이 지금 시작됩니다. "
  3. 10 분 연설 준비 기간 동안 생리 측정을 기록합니다. 10 분 동안 디지털 타이머를 설정하고 방을 두십시오.
  4. 십분 후, 실험 복을 입고 룸으로 돌아갑니다. 참가자에 다음 스크립트를 참조하십시오 : "이것은 작업의 음성 부분이다 당신은 당신의 이상적인 직업에 대한 좋은 후보 될 이유를 설명하는 연설을 전달하기 위해 아르 당신은 전체 5 분 기간에 대한 이야기​​해야... 시간이 이제 시작됩니다. " 소품 비디오 카메라가 평가하는 / 성능 스트레스를 증가, 지금 켜져 있어야합니다.
  5. 5 분 스피치 성능 기간 동안 생리 측정을 기록합니다. 참가자가 연설하는 동안 얘기하지 않으면, 그 또는 그녀가 20 초 동안 묵비권을 행사할 수 있습니다. 그 또는 그녀가 말할 다시 시작하지 않는 경우, 그들을 지시하여 계속해서 말을하는 참가자 프롬프트 : "당신은 아직도 남아있는 시간이."
  6. 5 분 연설 성능 기간의 끝에, 참가자에 다음 스크립트를 읽고 : "당신이 순차적으로 1022에서 숫자 13 뺄하라는 메시지가 나타납니다 이러한 작업의 마지막 다섯 분 수학 부분 동안 것입 구두.정가 크게 대답을보고하고, 실수가 이루어졌다하더라도 1022부터 다시 시작하라는 메시지가 있습니다. . 시간은 이제 시작 "참가자가 실수를하게되면, 그들을 프롬프트 :"잘못된 것입니다 즉, 1022에서 다시 시작하십시오 "5 분 디지털 타이머를 설정합니다..
  7. 5 분 수학 성능 기간 동안 생리 측정을 기록합니다.
  8. TSST의 수학 성능 기간의 끝에, "포스트 스트레스"타액 샘플을 수집합니다.
  9. 후 스트레스 상태 특성 불안 재고를 관리할 수 있습니다.

4. 후 스트레스 복구 측정

  1. 원래 대기실 참가자를 반환합니다. 첫 번째 복구 기간 동안, 20 분 동안 편안하게 기다릴 수있는 참가자를 지시합니다. 20 분 디지털 타이머를 설정하고 방을 두십시오.
  2. 20 분정도 후에 대기실로 돌아가 "복구 1"타액 샘플을 수집합니다.
  3. 두 번째 복구 기간 동안, 다시 20 분 동안 편안하게 기다릴 수있는 참가자 지시. 20 분 디지털 타이머를 설정하고 방을 두십시오.
  4. 20 분정도 후에 대기실로 돌아가 "복구 2"타액 샘플을 수집합니다.
  5. "복구"상태 특성 불안 인벤토리를 완료하기 위해 참가자를 지시한다.
  6. 실험의 본질에 대해서보고 참가자. 자신의 성능 기록하고 음성이나 수학의 성능에 대한 분석이 진행되지 않습니다 것이 아니라 그 참가자에게 알리십시오. 그들이 제시되었다있는 작업이 부당하게 어려운되었으며 참가자의 적성이나 능력에 반영하지 않는 참가자에게 설명하십시오.

5. 데이터 분석

  1. 심리 조치를 분석하기 위해서는, 사전 응력, 포스트 스트레스 및 복구 시간 지점에서 각 국가의 특성 불안 재고를 점수. 6
  2. 생리 조치를 분석하려면, "", "프리 스트레스" "연설의 성능"과 "m를 음성 준비 5 분마다 의미 심장 박동 점수를 계산TSST 기간. 또는 계산은 TSST 동안 이산 시간 지점에서 TSST 또는 측정 심장 박동의 각 분에 대한 점수를 의미 "ath.
  3. neuroendocrine 조치 상용 EIA 키트를 사용하여 호르몬 농도에 대한 분석 타액 샘플을 분석한다.

6 선택 사항 :. 추가 타액 Cortisol 분석 프로토콜 정보 (Salimetrics 타액 cortisol 분석 키트 삽입에서 재현)

  1. 상온 모든 타액 분석 키트 시약을 가져와.
  2. 키트 지침에 따라 버퍼를 씻어 준비합니다.
  3. 중복 적절한 우물에 플레이트 레이아웃과 표준 및 컨트롤의 피펫 25 μL를 결정합니다.
  4. 15 분 동안 1,500 XG (@ 3,000 RPM)에서 해동의 타액 샘플, 와동 및 원심 분리기.
  5. 플레이트에 적절한 우물 (중복의)에 centrifuged 샘플에서 투명한 액체의 피펫 25 μL.
  6. 모든 우물에 효소 활용 및 피펫 200 μL를 준비합니다.
  7. 500 rpm으로 5 분 접시를 믹스하여 추가 55분에 대한 품어.
  8. 세척 버퍼로 4 번 세척 접시 점이 되리.
  9. 멀티채널 피펫을 사용하여 각 잘 200 μL tetramethylbenzidine (TMB) 솔루션을 추가합니다.
  10. 500 RPM에서 5 분 동안 접시를 믹스하고 추가 25 분 어둠 속에 품어.
  11. 50 μL 정지 각 잘하는 솔루션과 반응을 중지 500 RPM에서 3 분 정도 혼합을 추가합니다.
  12. 접시 바​​닥이 중지 솔루션을 추가 10 분 이내에 450 nm의에서 판 Reader에서 접시를 청소 읽고 닦아주십시오.
  13. cortisol 농도를 계산하려면 모든 중복 우물에 대한 평균 광 밀도를 계산합니다. 제로, 표준 컨트롤과 샘플 우물의 평균 광 밀도에서 비 특정 바인딩 우물의 평균 광 밀도를 빼기.
  14. 단언 이러한 우물의 평균 광학 밀도 (B)을 나누어 각 표준 제어 및 샘플 행 퍼센트 (B / 보)을 계산제로 우물 (보)의 세 광학 밀도. 물류 수있는 소프트웨어를 사용하여 보간하여 컨트롤과 샘플의 농도를 결정합니다.

7. 대표 결과 :

여기에 제시 대표적인 데이터는 건강한 성인 남자 참가자와 함께 오후 동안 우리가 실험실에서 실시했던 문학 두 ​​연구의 검토 대상에서 컴파일됩니다. 이러한 데이터는 약이 문서에서 제시한 프로토콜을 사용하여 찾을 수있는 결과를 나타내는 것입니다.

, 심장 박동 (그림 3) 및 타액 cortisol의 농도 (그림 4);이 TSST 프로토콜 (그림 1) 자기보고 불안의 증가 (그림 2와 같은 상태 특성 불안 인벤토리로 측정) 유도. 그림 1에 설명된 실험 프로토콜은 다양한 측정이 TSST와 데이터 수집 세션 동안 만들 수있는지를 한 예제를 제공하기위한 것입니다. measuremen의 타이밍TS와 다른 조치의 포함은 구체적인 연구 질문에 의해 결정됩니다. 불안 및 / 또는 스트레스 반응, 이러한 조치에 무딘 또는 감쇠 증가가 예측된다 절감하기위한 것일 뿐이므로 이러한 개입을 사용하는 경우.

figure-protocol-6328
그림 1. 실험 프로토콜 참고 : 모금 사회 스트레스 테스트 (TSST), 상태 특성 불안 인벤토리 (왠), 5 분 사전 스트레스 기간 (PS), 10 분 예상 스트레스 기간 (연설 준비) (AS), 5 분 스피치 기간. (S), 5 분 수학 기간 (M).

figure-protocol-6601
그림 2. 대표 상태 불안 점수. 주 : 상태 불안 점수가 상태 특성 불안 인벤토리 (왠)의 20 iten 상태 불안 측정으로부터 계산 대표 점수는 우리가 실험실에서 수집 문학 출판 데이터를 반영합니다..

figure-protocol-6840
그림 3. 대표 심장 박동 데이터 참고 :.. 분당 비트 (BPM)의 심장 박동 대표 값은 우리가 실험실에서 수집 문학 출판 데이터를 반영합니다.

figure-protocol-7069
그림 4. 대표 타액 cortisol 데이터 참고 :.. UL / DL에 Cortisol 농도 대표 값 우리가 실험실에서 수집 문학 출판 데이터를 반영합니다.

토론

이 문서에서는, 우리는 건강한 지원자에서 모금 사회 스트레스 테스트를 실시하는 방법을 보여주었다. TSST는 심리적, 생리 및 neuroendocrine 조치에 강력하고 안정적​​인 증가를 유도 표준 실험실 사회적 스트레스 요인이다. TSST는 추위 압착기 시험 또는 밟아 돌리는 바퀴의 도보에 물리적 스트레스에 대한 유용한 대안이며, 평가하는 관객의 존재의의 성능보다 자연 심리적 스트레스를 재현.

공개

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

감사의 말

프로토콜 제안 및 대표자 데이터에 기여 제시카 Ottmar에 감사합니다. 이 프로토콜을 보여주는위한 사브리나 Blackledge, 로렌 Kohoutek 및 Kerisa 쉘튼 특별 감사드립니다.

자료

NameCompanyCatalog NumberComments
장비 / 공급의 이름 회사 카탈로그 번호
BSL 정신 생리학 시스템, MP36 데이터 수집 유닛과 세 리드 심전도 전극을 포함 맥 OS BioPac 시스템 주식 회사 BSLPSY - M
상태 특성 불안 인벤토리 마음 가든, 주식 회사 침착한 - B
타액 Cortisol 효소 단백질 분석 키트 Salimetrics 1-3002
2.0 ML 폴리 프로필렌 튜브 피셔 과학 05 40B 146
BioRad Microplate 리더, Microplate Manager 소프트웨어와 함께 모델 680, BioRad 플레이트 리더 : 168 1000 소프트웨어 : 1,706,800

참고문헌

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