면역 결핍 마우스의 피하 및 간내 인간의 간세포 암 이종 이식의 생성

요약

면역 결핍 쥐에서 인간 종양 이종 이식은 암 생물학을 연구하는 중요한 도구입니다. 인간의 간세포 암 세포 또는 종양 파편에서 피하 및 간내 이종 이식을 생성하는 특정 프로토콜이 설명되어 있습니다. 받는 사람 생쥐의 부분 간 절제술에 의해 유도 된 간 재생은 간내 생착을 촉진하기위한 전략으로 제시된다.

초록

생체 내에서 인간의 질병을 요점을 되풀이 간세포 암 (HCC)의 실험 모델은 질병의 병태 생리에 대한 연구 및 새로운 치료법의 전임상 평가를위한 가치있는 플랫폼을 제공합니다. 우리는 연구 다양한 애플리케이션에 이용 될 수있는 면역 결핍 생쥐에 피하 또는 동소 인간 HCC 이종 이식편을 생성하는 다양한 방법을 제시한다. 출발점으로 절제술을받은 환자에서 일차 종양 조직의 사용에 초점을 제외한 xenografting위한 세포 현탁액 또는 종양 단편의 제조를 기술한다. 마우스 비장 세포에 주입에 의해 간접적으로 또는 II) intrahepatically, 하나 종양 세포 또는 조각을 직접 주입하여 간으로, 또는, 우리는이 조직 I) 피하 이종 이식 특정 기술에 대해 설명합니다. 또한 전략으로서 xenografting시 네이티브 마우스 간 부분 절제술의 사용을 설명일차 인간 종양 세포의 생착 간내을 용이하게 할 수있다받는 마우스에서 활성 간 재생의 상태를 유도한다. 이러한 기술의 예상 결과가 설명된다. 설명하는 프로토콜은 일반적으로 덜 견고 문헌에 널리 사용되는 자주 인용된다 노포 인간의 간세포 암 세포주에 비해 수행하는 인간의 기본 HCC 샘플 및 이종 이식을 사용하여 검증되었다. 세포 라인에 비해, 우리는 이종 이식 모델에서 기본 HCC의 생착의 상대적으로 낮은 기회에 기여하고 이종 이식 성장의 반응 속도에 영향을 미칠 수있는 기술적 인 문제에 대한 의견 수있는 요소에 대해 설명합니다. 우리는 또한 얻은 이종 이식 정확하게 부모 HCC 조직과 유사하도록 적용 할 방법을 제안한다.

서문

간세포 암 (HCC)은 전 세계적으로 다섯 번째로 가장 흔한 암과 북미에서 암 사망의 가장 빠르게 증가하는 원인이다. HCC에 대한 가장 일반적인 위험 인자는 가장 자주 만성 바이러스 성 간염, 알코올 남용,자가 면역 질환, 또는 유전성 대사 장애 ^1로 발생, 간경변입니다.

세계 인구에 HCC에 의해 부과 된 무거운 질병 부담에도 불구하고, HCC의 병태 생리는 상대적으로 저조한 같은 대장, 유방, 전립선 암과 같은 다른 일반적인 암에 비해 이해된다. 예를 들어, 종양 구동 특정 분자와 세포 사건 ^{깨끗이이 정의} 될 남아. 다른 대부분의 고체 상피 암과 마찬가지로 유전 방식은 HCC ^3와 관련된 수차의 이질성을 공개했다. 다수의 연구는 세포 증식, 쉬르에 관련된 신호 전달 경로의 다양한 무질서 활동을 밝혀vival, 분화 및 혈관 ^4. 또한, HCC의 한테 진찰 Pathobiology 암 줄기 세포의 역할은 ^5를 명확히하도록 남아있다.

HCC의 병태 생리의 제한된 이해를 바탕으로, HCC에 대한 효과적인 치료의 armamentarium에도 상대적으로 제한된 남아있다. 재발은 일반적이지만 간장에 국한 종양과 초기 단계의 환자는 종양 절제술 또는 수술 적 절제를 사용하여 치료 치료를위한 후보입니다. 고급 질병, 화학 요법과 방사선 환자에 대한 제한 효능하고 완화 의도 ⁶ 질병 관리에 주로 사용됩니다.

인간의 HCC의 생체 실험 모델에서 고품질, 따라서 새로운 치료 방법의 평가뿐만 아니라 인간의 간세포 암의 병태 생리에 많이 필요한 기초 연구를위한 가치있는 플랫폼을 제공합니다. 세포주 또는 고도로 정의 마우스 모델의 사용, PRI의 이종 이식에 비해그들은 또한 ^7,8 내에서 다른 환자들 사이에 존재하는 이질성을 캡처하는 동안 높은 정확도와 인간의 질병을 recapitulating 할 수 있기 때문에 면역 결핍 생쥐의 메리 인간의 종양은 연구를위한 유용한 도구로 등장했습니다. 이를 위해, 우리는 면역 결핍 쥐에 인간의 간세포 암 이종 이식을 설정하는 다양한 방법을 개발했습니다. HCC 이종 이식과 관련된 발표 된 연구의 대부분은 이러한 목적 노포 인간 HCC 세포주의 사용을 설명하지만, 우리는 즉시 환자의 수술 적 절제 후의 일차 HCC 표본에서 이종 이식편을 생성하기 위하여 분석을 최적화에 초점을 맞추고있다.

다른 xenografting 기술은 서로 다른 연구 응용 프로그램에 필요할 수 있습니다. 예를 들어, 종양의 조각에서 생성 피하 이종 이식은 빠르게 생성을 쉽게 모니터링하고, 편리과 새로운 치료제의 로컬 관리를위한 더 적합 할 수있다종양 반응의 모니터링. 간내 이종 이식은 HCC 생물학의 간 미세 환경의 역할에 관한 연구에 대한 더 많은 관련이있을 수 있습니다. 종양 세포 현탁액에서 생성 된 이종 이식 종양을 시작하는 셀의 서브 세트의 식별 및 특성 또는 종래 이종 이식 종양 세포의 체외 조작에 필요로하는 실험이 필요하다. 따라서 우리는 개발 및 기본 인간 HCC 표본에서 파생 된 세포 현탁액 또는 종양 조각에서 피하 또는 간내 이종 이식을 설정하기 위해 다음과 같은 프로토콜을 확인했다.

프로토콜

프로토콜의 개략도는 그림 1에 제시되어있다.

1. 인간의 HCC 샘플의 처리

서면 환자의 동의와 기관 연구 윤리 보드의 승인을 인간의 기본 간암 검체를 얻습니다. 이러한 프로토콜은 인간의 복지에 대한 모든, 기관, 국가, 국제 가이드 라인을 준수 대학 건강 네트워크 연구 윤리위원회의 승인을 우리의 기관에서 수행되었다.

일단 적절한 샘플 임상 목적으로 촬영 한 수술 절차에 따라 가능한 한 빨리 신선한 HCC의 표본을 수집합니다. 이상적으로는이 환자의 조직을 제거 후 30 분 이내에 자리를 대신한다. 도 2에 도시 된 바와 같이, 종양의 중앙부가 괴사 될 수 있으므로, 종양의 주변부로부터 얻어진 적어도 1cm ^3의 샘플에서는, 최적이다.종래와 같은 방사선, 화학 요법, 또는 박리와 같은 절제에 어떤 처리를받지 않는 종양은 종양 세포가 생존 있다는 가능성을 최대화하기 위해 바람직하다. 생물학적 물질에 대한 표준 개인 보호 프로토콜에 따라 인간의 기본 조직을 처리합니다. 무균 기술을 사용하여 클래스 II 바이오 캐비닛 종양 조직 및 세포 제제의 모든 실험 조작을 수행.

1. 4 ° C에서 10 ~ 25 ㎖의 혈청 둘 베코의 수정 이글 중간 / 햄의 F12에 신선한 HCC 샘플을 놓고 즉시 처리 및 마우스에 xenografting에 대한 조직의 조각 및 / 또는 세포의 준비를 위해 실험실로 얼음에 전송할 수 있습니다.
2. 멸균 집게를 사용하여, 100mm X 20mm 페트리 접시 또는 다른 적절한 멸균 작업 표면에 종양 샘플을 놓습니다. 10 번 수술 메스 블레이드를 사용하여 약 2 ~ ³ ㎜의 조각으로 종양 샘플을 나눈다. 이 시점에서, 스냅 동결 또는 포르말린 고정의 고려필요에 따라 오메 종양 다른 실험을위한 조각 또는 분석.
3. 종양 절편 xenografting 위해, 프래그먼트가 잠긴 남아 있도록 충분한 마트 리겔을 포함하는 하나 이상의 마이크로 원심 튜브에 HCC 단편의 일부를 배치. 얼음이 튜브를 유지합니다.
4. 종양 세포 현탁액의 제조를 위해, 나머지 HCC 조직에게 극력 말하다 및 다진 조직의 양에 따라서 50 ㎖ 원추형 튜브에 DMEM-F12 5-10 ㎖로 섞고 수술 메스 블레이드를 사용한다.
5. ML 200 단위 /의 최종 농도에 콜라게나 제 타입 IV와 디스 파제 II를 추가하고 0.8 단위 / ml로 각각. 25 ML 피펫을 사용하여 잘 아래로 혼합물을 피펫.
6. 튜브를 밀봉하고 종양 조직의 부드러움에 따라 30 ~ 60 분 동안 5 % 이산화탄소 배양기에서 37 ° C에서 1.6 단계에서 혼합물을 품어. 소화 효소의 진행 상황을 평가하기까지 몇 시간마다 10 분 아래로 혼합물을 피펫.
7. 디 후Gestion의는 100 μm의 셀 스트레이너를 통해 종양의 솔루션을 전달 완료됩니다. 부드럽게 통과하는 종양 세포의 최대 수를 활성화하기 위해 25 ㎖ 피펫 팁을 사용하여 세포 고사에 남은 조직 매쉬. 15 ML 원뿔 관에서 변형 된 세포 현탁액을 수집합니다.
8. 4 ℃에서 5 분 동안 1,200 rpm에서 종양 세포 현탁액을 원심 분리기
9. 조심스럽게 뜨는을 가만히 따르다. 펠렛의 크기에 따라, 차가운 얼음 1X 적혈구 (RBC)의 ML 버퍼를 용해하고 부드럽게까지 피펫 아래로 펠렛을 재현 탁 2-5를 추가합니다. 5 분 동안 얼음에 보관하십시오.
10. RBC의 용해 버퍼를 씻어 4 ° C에서 5 분 1,000 rpm에서 15 ㎖의 원심 분리기의 총 볼륨에 DMEM-F12를 추가합니다.
11. 조심스럽게 뜨는을 가만히 따르다 및 DMEM-F12의 RBC없는 종양 세포 펠렛을 재현 탁.
12. 수동 또는 자동 셀 카운터와 트리 판 블루 배제를 사용하여 가능한 세포를 계산합니다.
13. 원하는 번호 18를 포함하는 원심 분리기 종양 세포 분취상술 한 바와 같이 주사에 대한 세포의 연구는, 그 결과 세포 얼음처럼 차가운 리겔의 30 μL에 펠렛, 그리고 얼음 가게를 재현 탁.

선택 사항 : 단계 1.11 후에, 우리는 정기적으로 대량 종양 세포 현탁액에서 인간 CD45 + 세포 (백혈구)를 고갈 및 / 또는 유동 세포 계측법 또는 면역 자석 구슬을 사용하여 종양 세포의 하위 집합을 정화. 이러한 기술에 대한 자세한 프로토콜은 물론 관련 항체, 구슬, 흐름 세포 계측기의 제조 업체에 의해 설명되어 있습니다.

참고 : 프로토콜 상술 또한 단계 1.1에서 일차 인간 HCC 조직에 대한 이종 이식 조직을 대체 직렬 이식을 수행하기 위해 마우스로부터 수확 된 인간 종양 이종 이식을 처리하기 위해 사용될 수있다. 이러한 상황에서, 단계 1.11 후에, 우리는 일상적 마우스 조직 적합성 항원 H2K에 대한 항체를 사용하여 세포 현탁액에서 뮤린 세포 침윤 고갈.

2.Xenografting

기관 동물 관리위원회에 의해 승인 된 프로토콜을 준수하는 모든 동물의 절차를 실시한다. 여기에서 설명하는 절차는 모든 관련 규제 및 제도 기관, 규정 및 지침에 따라 규격에 맞추어 대학 건강 네트워크 동물 관리위원회의 승인을 특정 동물 사용 프로토콜에 따라 완료되었습니다.

작은 동물에 흡입 휘발성 마취제의 전달을위한 장비는 동물 시설 및 연구 기관의 표준 운영 절차에 따라 사용되어야한다. 클래스 II 생물 안전 캐비닛에 무균 기술과 무균 장비를 사용하는 모든 수술 절차를 수행합니다. 비만이 아닌 당뇨병 심한 결합 면역 결핍을 활용 (NOD / SCID) 또는 연령 6-8 주에 섹스를 하나의 마우스의 NOD / SCID / 인터루킨 2 수용체 감마 체인 널 (null) (NSG) 균주 (잭슨 연구소, 바 하버, ME) ^{9, 10.} 이들생쥐는 면역 결핍 동물에 적합한 무균 조건을 제공 할 수있는 시설에 보관하고 유지해야합니다.

1 L / 산소의 분 5 % (V / V) 흡입 아이소 플루 란을 공급하는 실에서 수술을 위해 마우스를 준비합니다. 각막과 발가락의 반사 손실이 동물 (들)에있을 때까지 마취를 유지합니다. 피하 xenografting 들어 동물 (들)의 등쪽에있는 하나 이상의 작은 영역을 면도하고 70 % 에탄올로 피부를 정화. 간내 xenografting를 들어, 아래 서혜부에 겨드랑이에서 동물 (들)의 복부 흉부와 복부를 면도하고 70 % 에탄올로 피부를 정화.

종양 파편의 2.1 피하 주입

1. 마우스 피스 흡입 아이소 플루 란 마취 (2 % (V / V) 1 L에 / 분 O _2)를 유지, 경향 마취 마우스를 놓습니다. 외상성 부상에서 동물의 눈을 보호하기 위해 눈물 - 젤을 적용합니다.
2. 베타 딘으로 등쪽 면도 영역 (들)을 살균수술 스크럽은 70 % 에탄올 다음과 마지막으로 포비돈 - 요오드 용액.
3. 멸균 날카로운 가위를 사용 5mm의 피부 절개를합니다.
4. 부드럽게 피하 공간으로 폐쇄 무딘 가위를 삽입하고 종양 조각을 수용 할 수있을만큼 큰 포켓을 개발하기 위해 부드럽게 확산.
5. 살균 미세 집게를 사용하여 피하 주머니에 1.3 단계에서 제조 된 종양 조각을 삽입합니다.
6. 봉합 또는 클립을 사용하여 피부 절개를 닫습니다.
7. 아래에 설명 된대로 마우스로 수술 후 치료를 제공합니다.

종양 세포의 피하 주사 2.2

1. 단계 2.1.1와 2.1.2에 설명 된대로 동물을 준비합니다.
2. 바늘에 29 G 1 / 2 인슐린 주사기로 단계 1.13에서 제조 리겔에서 종양 세포의 현탁액을로드합니다.
3. 피하 공간으로 바늘을 삽입하고 주사기의 내용을 방출. 멀리 피하 평면을 따라 바늘을 몇 밀리미터 정도 FR 발전톰 피부 천자 사이트는 바늘의 철수에 따라 천자 사이트 중 종양 세포 현탁액의 누출을 방지 할 수 있습니다.
4. 아래에 설명 된대로 마우스로 수술 후 치료를 제공합니다.

종양 파편의 2.3 간내 주입

1. 1 ML의 주사기에서 바늘에 27 G 1 / 2를 사용하여, 수술 유체 손실을 보상하기 위해 마취 된 동물의 목의 배부에 멸균 생리 식염수를 피하의 350 μl를 관리 할 수​​ 있습니다. 진통제를 들어, 1 ML의 주사기에 27 G의 2 인치 바늘을 사용하여 피하 동물의 측면에 멸균 생리 식염수를 포함하는 부 프레 노르 핀 (0.1 ㎎ / ㎏)의 350 μl를 관리 할 수​​ 있습니다.
2. 유지 보수에게 흡입 아이소 플루 란 마취 (2 % (V / V) 1 L에 / 분 O _2)를 전달하기 위해 마우스 피스 내부에 위치 코와 입으로 미리 가열 패드에서 마우스 부정사를 놓습니다.
3. 사지를 확장하고 노출을 최적화하기 위해 운영면에 테이프로 고정복부 복부 및 흉부.
4. 시각화를 최적화하기 위해 돋보기 램프의 절차를 수행합니다.
5. 그리고 마지막으로 포비돈 - 요오드 용액과 70 % 에탄올 다음 베타 딘 수술 스크럽 복부 복부와 흉부에 면도​​ 피부를 소독.
6. 멸균 예리한 가위를 사용하여, 횡 방향 양측 subcostal 피부 절개를하고, 전체 간의 충분한 노출을 허용하도록 복강을 입력 근육층 나눈다.
7. 칼 모양의 과정 위의 피부에 스티치를 넣고 간장과 주변 구조의 더 나은 노출을 허용하기 위해 테이프로 마우스 피스에 고정.
8. 안정화에 간 두 면봉 인접 도포 및 후방을 사용합니다.
9. 멸균 제 10 메스 블레이드를 사용하여 간 표면의 길이와 깊이 절개 3mm를 확인합니다.
10. 즉시의 Surgicel 및 지혈을 달성하기 위해 절개 사이트에 약간 힘을 주어, 60 ~ 90 초 후에 제거완전한 지혈이 달성 된 경우에만 진행합니다.
11. 살균 미세 집게로 또는 18 G 바늘 간 절개로 종양 조각의 단계 1.3를 놓습니다.
12. 종양 조각의 변위를 방지하고 계속 지혈을 보장하기 위해 간 절개에의 Surgicel의 작은 조각을 적용합니다.
13. 봉합 또는 클립 절개를 닫습니다.
14. 아래에 설명 된대로 수술 치료를 제공

간에 직접 분사를 통해 종양 세포의 2.4 간내 주입

1. 위의 2.3.7에 2.3.1 단계에서 설명한대로 마우스를 준비합니다.
2. 바늘 (29) G 1 / 2를 사용하여 인슐린 주사기에 종양 세포 현탁액 (1.13 단계에서 제조 된)을로드.
3. 간 코튼 팁 어플리케이터를 사용하여 안정화와 함께, 간장에 인슐린 주사기 바늘을 삽입하고 끝에게 낭하 평면을 따라 구멍 사이트 넘어 몇 mm를 진행.
4. 부드럽게 주사기 및 t의 내용 방전암탉은 간에서 바늘을 제거합니다.
5. 장소 구멍 사이트에의 Surgicel 종양 세포 현탁액의 유출을 방지하고 완전한 지혈을 달성하기 위해 면봉과 부드러운 압력을 적용합니다.
6. 봉합 또는 클립 절개를 닫고 아래에 설명 된대로 수술 치료를 제공합니다.

비장에 주입을 통해 종양 세포의 2.5 간내 Xenografting

1. 위의 2.3.5 단계 2.3.1에서 설명한대로 마우스를 준비합니다.
2. 멸균 날카로운 가위를 사용하여, 1 cm의 복강을 입력 subcostal 절개를 왼쪽으로합니다.
3. 비장을 노출하기 위해 cranially과 동물의 오른쪽에 배를 반영하기 위해 면봉을 사용합니다.
4. 멸균 미세 atraumatic 집게로 주변의 지방 조직을 처리하여, 절개로 비장을 제공하고 안정화하기 위해 비장 뒤에 면봉을 배치합니다.
5. 5-0 실크 봉합사, 장소 사용폴 하부 위의 비장 주위에 느슨한 미리 묶어 매듭.
6. 바늘 (29) G 1 / 2를 사용하여 인슐린 주사기에 종양 세포 현탁액 (1.13 단계에서 제조 된)을로드.
7. 비장의 하부 기둥에 인슐린 주사기 바늘을 삽입하고 느슨한 미리 묶어 매듭의 수준 지나치을 사전.
8. 천천히 주사기의 내용물을 배출 비장​​에서 바늘을 제거하고 주입 된 종양 세포 현탁액의 임의의 누출을 방지하기 위해 매듭을 조인다.
9. 복강에 비장을 교체합니다.
10. 봉합 또는 클립 절개를 닫고 아래에 설명 된대로 수술 치료를 제공합니다.

인간의 종양 조직의 간내 생착을 촉진하기 위해 2.6 부분 간 절제술

1. 2.3.7에 단계 2.3.1에서 설명한대로 마우스를 준비합니다.
2. 멸균 날카로운 가위, 간장의 중간 엽에 부착 된 낫 모양의 인대를 나눕니다.
3. 면봉을 사용하여, 동원왼쪽 엽 주위에 5-0 실크 봉합사의 간 및 위치 느슨한 미리 묶어 매듭의 왼쪽 엽. 왼쪽 엽의 bilio 혈관 척추 경으로 가능한 한 가까운 느슨한 매듭을 진행하고 매듭을 조입니다.
4. 매듭 이후 출혈의 미끄러짐을 방지하기 위해 작은 그루터기를 떠나, 멸균 가위를 사용하여 합자에 왼쪽 엽 말단을 절제.
5. 유사한 기술을 사용하여, 결찰 및 담낭을 피하고, 간의 중간 엽의 대부분을 절제.
6. 사용의 Surgicel 완전한 지혈을 달성하기 위해 간 실질의 절단면을 따라 면봉과 부드러운 압력.
7. 종양 조각 또는 종양 세포의 간내 xenografting를 들어, 상기 한 바와 같이 2.4.5 단계 2.3.11 또는 2.4.2에 2.3.8를 진행합니다.
8. 비장 주입을 통해 종양 세포의 간내 xenografting를 들어, exposi 부드럽게 cranially과 동물의 오른쪽에 배를 반영하기 위해 면봉을 사용비장 겨. 상술 한 바와 같이 2.5.9에 2.5.4 단계를 진행합니다.
9. 봉합 또는 클립 절개를 닫고 아래에 설명 된대로 수술 치료를 제공합니다.

2.7 수술 후 관리

1. 흡입 마취 마우스 피스에서 마우스를 제거합니다.
2. 마취에서 회복 충분히 동원 할 때까지 약 20 분간 가열 램프 아래 새장에 마우스를 놓습니다.
3. 처음 2 ~ 3 일 동안 수술 후 부 프레 노르 핀 투여마다 8 ~ 12 시간을 반복합니다.

결과

그림 3은 피하 인간 HCC 이종 이식 종양의 해당 조직 학적 모양의 전형적인 모습을 보여줍니다. 피하 이종 이식의 발전 및 성장을 용이하게받는 마우스의 일상 시험에 의해 모니터링 될 수있다. 종양 xenografting 개발 간의 시간 간격은 (조직의 유형 (세포 현탁액 대 종양 단편), 조직의 소스 (주 환자 샘플, 계대 이종 또는 세포주) 및 이식 조직의 양에 따라서 크게 다를 수 세포의 수 또는 ?...

토론

우리는 실험적 질문과 분석의 다양한 적용 할 수있는 면역 결핍 생쥐에 피하 및 간내 HCC 인간 이종 이식을 수립하는 다양한 기술을 설명 하였다. 피하 이종 이식이 널리 HCC 생물학의 다양한 측면을 연구하는 데 사용되었지만, 간내 이종 이식은 거의 문헌에 기술되지 않습니다. 또한, 이종 이식의 사용을 설명하는 연구의 대부분은 잘 확립 세포주에서 이들을 생성했다. 인간의 종양 생물학 ^(12)?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dulbecco’s Mod. Eagle Medium/Ham’s F12 50/50 Mix x1(DMEM-F12)	WISENT Bioproducts	319-075-CL
Collagenase TypeIV	Sigma-Aldrich	C5138
Dispase II	Stemcell Technologies	7923
Matrigel Matrix	Becton-Dickinson Biosciences	354234
10 % Buffered Formalin solution	Sigma-Aldrich	HT501128
0.9 % Saline Solution (NaCl), sterile	House Brand	1011-L8001
Betadine surgical scrub	Purdue Pharma	NPN 00158313
Buprenorphine (Temegesic) NR 0.3 mg/ml	Reckitt Benckiser
Isoflurane USP, 99.9 %, inhalation anesthetic	Pharmaceutical Partners of Canada Inc.	M60302
Tear-Gel	Novartis Pharmaceuticals
Frozen section compound	VWR	95057-838
Cryomold, Tissue -Tek	Sakura Finetek	4566
Precision Glide Needle 18G 1 ½	Becton-Dickinson Biosciences	305196
Precision Glide Needle 27G ½	Becton-Dickinson Biosciences	305109
Insulin syringe, 3/10 cc U-100, 29G½	Becton-Dickinson Biosciences	309301
Surgical blade No.10	Feather Safety Razor Co.	08-916-5A
#5-0 Soft silk surgical suture, 3/8" taper point needle	Syneture	VS-880
Transpore surgical tape	3M Health care	1577-1
Cotton applicator	Medpro	018-425
Surgicel, oxidized regenerated cellulose	Ethicon	1951
Cell strainer 100 μm nylon	Becton-Dickinson Biosciences	352360
Magnification lighting with mobile base	Benson medical Industries Inc.	model: RLM-CLT-120V
Petridish sterile 100x20 mm	Sarstedt	821474
Tissue forcep, 1x2 teeth, 4-1/2"	Almedic	A10-302
Adson dressing forcep 4-3/4"	Almedic	A10-220
Eye dressing forcep, serrated, straight, 4"	Almedic	A19-560
Hartman Hemostatic Forceps, curved, 3-1/2"	Almedic	A12-142
Iris scissor, curved, 4-1/4"	Almedic	A8-690
Iris scissor, straight, 4-1/2"	Almedic	A8-684
Olsen-Hegan needle driver, 5-1/2"	Almedic	A17-228