개미 비주얼 시스템의 조사 기법

요약

이 문서는 빛과 곤충의 내부 및 외부 눈 해부학 공부에 전자 현미경 검사 법에 기술 제품군을 설명. 개미 눈, 상세한 문제 해결, 그리고 다른 표본 및 관심 영역에 대 한 최적화에 대 한 제안에 대 한 작업에 대 한 최적화의 전통적인 기법 여러 개 포함 됩니다.

초록

이 문서는 가벼운 현미경 검사 법 (LM)에서 기술의 제품군 설명 및 전자 현미경 (EM) 곤충의 내부 및 외부 눈 해부학을 공부 하는 데 사용할 수 있습니다. 전통적인 조직학 기술 작품 개미 눈에 대 한 최적화 및 전송 전자 현미경 (TEM)과 주사 전자 현미경 (SEM)과 같은 다른 기술 함께에서 작동 하도록 적응 포함 됩니다. 이러한 기술을 훨씬 유용 하지만 어려울 수 있습니다 초보자 현미경에 대 한 큰 강조 다른 표본에 대 한 최적화 및 문제 해결이 문서에서 배치 되었습니다. 우리는 (사진-현미경과 sem의) 전체 표본에 대 한 이미징 기술에 대 한 정보를 제공 하 고 그들의 장점과 단점을 토론. 우리 전체 눈 렌즈 직경 결정에 사용 되는 기술 하 고 개선에 대 한 새로운 기술에 이야기. 마지막으로, 우리는 LM 및 가장, 샘플 준비에 관련 된 기술 토론 단면, 얼룩, 및 이러한 샘플 영상. 우리는 한 때 샘플 준비와 그들을 주위에 이동 하는 최선의 방법을 모른다는 장애물 논의.

서문

비전 대부분의 동물에 대 한 중요 한 감각 양식 적임 이다. 시력은 정확히 파악 목표의 수립 및 노선, 준수 및 나침반 정보^1,2를 얻기 위한 탐색의 맥락에서 특히 중요 합니다. 곤충 겹 눈의 쌍을 사용 하 여 시각적 정보를 감지 하 고, 경우에 따라 1 ~ 3 dorsally 배치 간단한 눈 이라고 ocelli^3,,45.

개미 눈은 특정 관심의 개미 멋지고 다양 한 동안, 그들은 종에 걸쳐 몇 가지 중요 한 특성을 보존 하기 때문에. 해부학, 크기, 및 생태학에 있는 극적인 변화에도 불구 하 고 대부분의 eusocial 고 식민지;에 살고 그 결과, 다른 종 중앙 장소 및 리소스 사이 앞뒤로 탐색 하는 점에서 비슷한 시각 도전 얼굴. 개미에 걸쳐 동일한 기본적인 눈 bauplan 엄격히 야행성 종, 독점적으로 일주와 느린 시각적 포식 자^{6,7, 뛰어 드는 지 하 도보에서 몸 길이 0.5-26 m m에서 배열 하는 동물에서 관찰 될 수 있다 8,,910}. 이러한 엄청난 차이 생태와 행동의 모든 동일한 기본 눈 구조에 맞게 다양 한 환경, 라이프 스타일, 바디 크기^11,12의 무수 한 순열에 일으키. 결과적으로 개미의 시각적인 생태 공부 전함 매장 물 결정된 탐정에 게 가능성을 제공 합니다.

곤충의 시각 시스템을 이해 그들의 행동 능력에 대 한 통찰력을 확보에 필수적 이다. 이것은 명백한 멋지게 생태와 동작 몇 가지 곤충 그룹 (예를 들어, 참조^13,,1415,16, 에서 큰 성공을 해부학을 결합 하는 통합 연구에서 ¹⁷). 개미 탐색 및 개미 행동 분야 일반적으로 꽤 성공 했습니다, 비록 매우 작은 강조 몇 가지 선택한 종족 이외의 개미 비전에 배치 되었습니다. 여기, 우리는 개미의 눈 디자인 조사에 관련 된 기술에 정교한 것 이다. 우리는 개미에 집중할 것 이다, 하는 동안 이러한 기술은 적용할 수 있습니다, 다른 곤충에 약간의 수정도.

프로토콜

1. 견본 준비

참고: 그것은 화합물 눈 ocelli 서로 하 고 머리에의 상대 위치를 먼저 이해 하는 데 필요한. 이것은 머리의 등 쪽 보기의 이미지를 획득 하 여 얻을 수 있습니다. 이 위해, photomicrography 또는 sem의 기술을 사용 하 여 샘플을 처리 하는 것이 좋습니다. 다음 단계는 두 프로세스에 참여.

1. 견본 수집
   1. 수집 하 고 70% 에탄올으로 직접 표본 저장. 가능 하면 다른 계급을 수집 합니다.
   2. 시간, 날짜, 견본 고 뿐만 아니라 (예를 들어를 구하고, 하는 동안 수집 된 나뭇가지, 등내부 중첩 집계, 짝짓기) 다른 관련 관측 장소
   3. 각 치료에 여러 복제를가지고 충분 한 표본을 수집 합니다.
2. Photomicrography 및 Z 스태킹
   1. 건조 표본 공기와 곤충 핀에 그리고 수용 성 접착제를 사용 하 여 삼각형 포인트 카드에 그들을 마운트. 자세한 내용은 참조¹⁸을 참조 하십시오.
   2. Z-스테퍼 모터와 컬러 카메라 높은 확대 stereomicroscope를 사용 하 여 이미지.
   3. 디퓨저를 사용 하 여 표본에 대 한 균일 한 조명.
   4. 다른 초점 비행기에서 이미지를 캡처하고 무손실 파일 형식 (예: tiff) 및 초점 스택 이미지를 저장 상용 소프트웨어를 사용 하 여 그들.
3. 스캐닝 전자 현미경
   참고: 모든 도구와 먼지와 다른 입자는 시료의 오염을 피하기 위해 에탄올과 표면 작업에 철저 하 게 청소.
   1. 밤새 표본 에탄올에서 탈수 하 고 페 트리 접시에 건조 한 공기.
   2. 날카로운 면도칼 블레이드를 사용 하 여 머리는 신체의 나머지 부분에서 분리.
   3. 필요한 각도 (예:, 등 위로 향하도록)에서 머리를 탑재 전도성 탄소 테이프 또는 탭을 사용 하 여 알루미늄 명세서에. 얇은 스트립으로 탄소 테이프를 잘라 고 머리 캡슐을 지원 하기 위해.
   4. 2 분 20에 견본 표면에 골드를 적용할 스퍼터 coater를 사용 하 여 회전 무대 mA. 시간 및 전류는 악기에 따라 조정 될 필요가 있습니다.
   5. 신선한 탄소 테이프 또는 탭 새로운 알루미늄 스텁을 표본을 전송 합니다.
      참고: 비 코팅된 탄소 검은색 제공 하지만 전송 표본 골드 코팅을 손상 시킬 수 있습니다.
   6. 표본 방향은 여전히 해 현미경을 사용 하 여 올바른 인지 확인 하 고 한 쌍의 좋은 집게 또는 유사한 도구와 필요에 따라 조정. 주의 하지 스크래치 골드 코팅; 가능 한 한 작은 핸들입니다.
   7. Sem의 스텁 홀더, 명세서 및 표본 서로 상대적인 위치에의 노트를 만들기에 표본 로드.
      참고: 일부 SEMs는 무대 카메라를 장착 합니다 하지만 많은 되지 않으며 그것은 높은 확대에 작은 견본을 찾을 하기가 어려울 수 있습니다.
   8. 이미지는 견본. 낮은 가속 전압을 사용 하 여 충전 및 분야의 좋은 깊이 대 한 작은 조리개.
      참고: 설정을 최고의 기술자와 상담에 최적화 되어 사용 되 고 특정 악기에서 전문.

2. 측정 면 숫자와 직경

1. 각 막 복제본
   1. 사용 하 여 개미 에탄올에 보존 또는이 목적 (1.1.1 단계)에 대 한 핀에 탑재.
   2. 플라스 티 신 또는 곤충 핀에 동물을 탑재 합니다. 머리는 비교적 큰, 나머지 신체 부위를 제거할 수 있습니다.
   3. 곤충 핀 또는 고급 이쑤시개를 사용 하 여 빠른 건조 무색 매니큐어의 작은 방울을 선택 하 고 신속 하 게 눈 위에 그것을 확산. 핀 눈을 긁어 하지 않습니다 확인 합니다. 매니큐어는 전체 눈과 주변 머리 캡슐의 일부를 커버 한다.
      참고: 매니큐어 눈에 걸쳐 비교적 균일 한 두께의 수는 중요 하다.
   4. 실 온에서 설정 하려면 매니큐어를 둡니다.
   5. 설정 완벽 하 게 좋은 곤충 핀을 사용 하 여 부드럽게 눈 주변 머리 캡슐에서 복제를 해제.
   6. 깨끗 한 집게의 좋은 쌍을 사용 하 여 복제, 머리 및 눈 하지 복제의 부분을 잡고.
   7. 눈의 방향에 대 한 인식을 확인: 앞쪽, 후부, 등, 그리고 복 부 지역.
   8. 유리 슬라이드에 복제본을 놓습니다. 면도날을 사용 하 여 신중 하 게 눈 주위 초과 소재를 제거 하 여 복제를 트림. 이동에서 복제본을 바늘 또는 집게의 쌍을 사용 합니다.
   9. 눈은 매우 볼록, '병합' 복제 수 있도록 가장자리 주위 3-4 좋은 부분 방사형 절을 면도칼 블레이드를 사용 합니다. 눈은 상대적으로 '플랫', 같은 절 개를 할 필요가 있다.
   10. 부드럽게 눈 복제, 복제본의 방향을 알려져 있다 보장에 커버 슬립을 놓습니다. 이 매니큐어에 막 인상이 없앨 수로 압력을 적용 되지 않습니다.
   11. 아주 작은 매니큐어를 사용 하 여 4 개의 모퉁이에 coverslip 인감. 매니큐어 유리 슬라이드와 커버 슬립 흐름, 그것은 복제본을 손상 것입니다.
   12. 복합 현미경에 슬라이드 이미지.
       참고: 경우에 일부 면 초점에는, 다음이 나왔다 눈 복제 충분히 평평 하지는. 취소 하 고 단계 2.1.3에서에서 다시 시작 합니다.
   13. ImageJ/피지 ommatidia 수와 각 ommatidia의 크기를 측정할 수 있다 자유롭게 사용할 수 있는 프로그램으로 이미지를 가져옵니다.
       참고:이 방법은 준비 ocelli의 복제도를 사용할 수 있습니다. 단일 렌즈 기 때문에, 하나의 복제본에서 모든 ocelli를 함께 유지 하는 것이 좋습니다.

3. 눈의 구조 분석

참고: 눈의 해부학을 공부 하기에 대부분의 경우 두 보완 LM 및 가장 필요 합니다. 초기 처리 단계 LM와 가장 유사한 기술이 필요합니다. 차이 이후 단면 단계에서 발생합니다. 샘플 처리는 신중 하 게 처리 되어야 하며 책임감 폐기는 유해 화학 물질의 사용을 해야 합니다. 개인 보호 장비를 사용 하 여, 연기 후드, 항상 안전 데이터 sheets(SDS) 읽기 및 시작 하기 전에 위험 평가 수행 합니다.

1. 해 부
   1. 냉각 또는 기체 CO₂에 노출에 의해 표본을 anaesthetize.
      1. CO₂ 마 취 이며 매우 빠르게 (일반적으로 미만의 1 분) 주의이 시료의 죽음에 발생할 수 있으므로 노출 과도 피하기 위해 해야 합니다. 드라이 아이스 펠 릿 (단단한 CO₂)를 사용 하 여 경우 피하십시오 직접 접촉을 표본과이 찬 화상을 일으킬 수 있습니다.
      2. 찬 마 취가 느립니다; 4 ° C는 충분 한, 그리고 추운 온도 권장 하지 않습니다. 종족에 대 한 적절 한 냉각 시간을 설정 합니다. 대형 또는 감기 저항 개미 불 개미 등이 필요할 수 있습니다 > 10 분 작은 종만 1-2 분 과도 한 냉각 해야 하는 동안 완전히 고정 되는 견본 죽 일 것 이다 (얼음에 직접 접촉 하지 않도록). 표본 선호 작은 거품 막히고, 플라스틱 용기에서 개최 하 고 그들은 관찰 될 수 있다는 아이스 박스 보다는 전기 냉장고 또는 냉장고에 배치 해야 합니다.
   2. 페 트리 접시에 견본을 놓고 해 현미경에서 조정 합니다. 신속 하 게 작업 하는 것은 마 취를 유지 하 고 일단 절 개 (이 수 초 이내 발생)는 조직의 변성을 피하기 위해 중요 하다.
   3. 집게와 안테나를 제거 합니다. 쏘는 곤충 작동, 그것은 처음을 찔린 되는 피하기 위해 gaster 절단 하는 것이 좋습니다.
   4. 날카로운 면도날;를 사용 하 여 입 부분을 제거 집게는 시료를 사용할 수 있습니다. 가능 (작은 표본)이 뇌에 잡아 당 겼 없이 눈 망막 밖으로 찢 어 수 있습니다 앞쪽 부분 눈 (큰 표본)의 또는으로 주변을 통해 잘라.
   5. 머리 캡슐을 오픈을 준비 합니다. 첫 번째 절 개; 가리키는 있도록 표본 각도 이 할 수 있다 중 해 현미경 표본 집게 또는 시각적 컨트롤에서 엄지 및 앞 손가락 사이 견본을 잡고 잡고.
   6. 머리 머리;의 복 부 부분을 제거를 통해 가로 절 개를 하 게 고정 및 침투를 향상 시키기 위해 큰 종에서 복 부 눈의 일부를 제거할 수 있습니다. 머리 해야 여전히 연결할 수 시체가 시점에서.
   7. 그냥 화합물 눈에 후부 코로나 절 개를 하 여 몸에서 머리 캡슐을 끊다.
   8. 얼음 차가운 정착 액에 화합물 눈으로 해 부 머리 캡슐을 배치: 2.5%도 및 2 %paraformaldehyde 인산 버퍼 (pH 7.2-7.5).
      주의: 정착 액은 부식성과 독성; 적절 한 보호를 착용 하 고 증기 두건에서 작동.
      참고: 그것은 신경 조직 변성을 체포를 신속 하 게 작동 하는 것이 중요입니다. 2 분 내에 완료 또는 더 적은 해 부 해야 (효율적인 해 부 연습이 필요할 수 있습니다).
      참고: 눈 밝은 또는 어두운 조건에 적응 해야 하는 경우 다음 먼저 노출 몇 시간 동안 필요한 빛 조건에 동물. 각 조명 조건에서 해 실시 합니다. 해 어둠을 시뮬레이션 하기 위해 붉은 불빛 아래에서 실행 될 수 있습니다.
2. 견본 프로세싱
   1. 유지는 표본은 정착 액에 모션 궤도 셰이 커에 실내 온도에 2 헤 큰 표본 긴 고정 시간을 요구할 수 있습니다.
   2. 정착 액을 제거 하 고 적절 하 게 처분. 표본 실 온 인산 버퍼 (3 시간, 5 분 마다)에 통에 씻는 다.
      참고: 8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.44 g Na₂HPO₄, 및 0.244 g KH₂포₄ 1 L 증류수 H₂O (pH 7.2)의 인산 염 버퍼 구성 되어 있습니다.
   3. 인산 염 버퍼를 제거 하 고 2% 추가 OsO_4. 1-2 h에 대 한 증기 두건에서 셰이 커에 견본 항아리를 놓습니다. 이것은 지방을 수정 하 고 또한 가장에 대 한 대비를 제공 후 정착 단계 이다.
      참고: 오스뮴 고정 시간 받습니다 견본 크기; 거친 어림짐작으로 1 m m³당 고정의 1 시간을 계산 합니다.
   4. 오스뮴 솔루션을 제거 그것을 적절 하 게 처분. 셰이 커에 표본 실 온 버퍼 (3 시간, 5 분 마다)에 씻어.
   5. 표본 에탄올 또는 아세톤;의 농도 증가에 배치 하 여 탈수 예, 50, 70, 80, 및 10 분에 대 한 95% 고 마침내 100% (2 시간, 15 분 각각). 솔루션 변경 사이 셰이 커에는 표본을 놓습니다.
      참고: 필요한 경우 표본 수 수 70% 에탄올에 밤새 껏 저장.
   6. 에탄올을 배수 하 고 100% 아세톤을 추가 합니다. 셰이 커 (아세톤에 디하이드레이션 하는 경우이 단계 건너뛰기)에 20 분 동안 둡니다. 신선한 아세톤으로 교체 하 고는 추가 20 분 동안 그것을 둡니다.
   7. 수 지 수 지를 아세톤의 다음과 같은 비율을 사용 하 여 조직에 침투: 2:1 (3 시간), 1:1 (하룻밤), 1:2 (4 h), 및 순수한 수 지 (하룻밤). 각 단계에서 표본 증기 두건 안쪽 통에 두고 마지막 두 단계를 제외한 모든 컨테이너를 캡.
      참고: 수 지 표본은 각 단계에서 새로운 일회용 용기에 이동 해야 합니다 그래서 물기를 너무 점성 이다.
   8. 블록 탑재 샘플을 준비 합니다. 블록 작은 사각형 블록 (1.5 x 0.5 x 0.3 c m)으로 아크릴 유리 절단 하 여 만든 사용자 지정 될 수 있습니다. 블록과 실리콘 몰드에 붓는 에폭시 수 지 (많은 상용 키트 사용할 수 있습니다)에 의해 만들 수 있습니다 다음 12-14 h 60 ° c.에 오븐에서 그것을 치료합니다
      주의: Uncured (액체) 수 지 발암 이며 완전히 경화 될 때까지 오븐에 반환 되어야 합니다.
   9. 금형에 블록을 수직으로 배치 합니다. 조심 스럽게 걸릴 액체 수 지에서 표본, 드레인, 과잉 수 지를 허용 하 고 블록 위에 견본 배치. 블록에는 견본을 바인딩할 추가 수 지의 작은 금액을 사용할 수 있습니다.
   10. 블록 레이블. 종이 라벨을 인쇄 하 고 블록에 포함 또는 블록 얼굴에 첨부.
   11. 60 ° c.에 12-14 h에 대 한 오븐에서 포함 된 블록 형을 유지
   12. 깨끗 한 봉투에 견본 블록을 저장 합니다. 이 년 몇 개월 동안이 방식으로 저장할 수 있습니다.
   13. 아세톤을 완전히 증발 수 있도록 증기 두건에서 사용된 컨테이너, 더러운 장갑, 그리고 다른 오염 된 장비를 두고 (최소 12 h).
   14. 일회용 장비를 폐기 또는 집게 등의 다른 항목에서 수 지를 근 근이 전에 오븐에 수 지를 치료.
3. 단면
   1. 표본 방향은 단면 평면에 적합 하도록 해 현미경 아래 블록을 관찰 합니다.
   2. 방향이 적절 한 경우는 보석의 보고를 사용 하 여 표본을 잘라 다시 방향을 다시 표본 좌석 설정된 수 지와 신선한 수 지의 파편을 사용 하 여. 머리도 두 눈을 별도로 섹션을 두 반쪽으로 나눌 수 있습니다. 계속 하기 전에 다시 수 지 치료.
   3. 이동식 톰 척에 블록을 탑재 합니다. 물림 쇠를 제거 하 고 소유자에.
   4. 해 현미경 면도날을 사용 하 여 수 지 블록을 잘라.
      주의: 하지 마십시오이 척 팔을 충격 하 고 베어링을 손상 수 있습니다 톰 팔에 탑재 되 면.
   5. 톰 팔에 척을 탑재 하 고 각도 견본.
   6. 적절 한 각도에서 보유자에 칼을 탑재 (유리 칼에 대 한 0 ° 다이아몬드 나이프에 대 한 제조업체의 지침을 참조 하십시오).
      참고: 유리 칼 유리 칼 메이커 싸게 만들 수 있습니다 하지만 그들은 그들의 가장자리; 잃고 주기적으로 교체 해야 합니다. 고품질 다이아몬드 칼 구입하실 수 있습니다 하지만 비싸다, 특별 한 주의가 필요 하며 초보자에 적합 하지 않습니다.
   7. 칼으로 배 채우기 증류수 필터 (0.45 μ m 기 공 크기)를 장착 한 주사기를 사용 하 여.
   8. 수 위; 칼의 가장자리에 도달할 때까지 배를 채우기 보트의 다른 영역에는 초승달을 볼록 있을 수 있습니다.
   9. 드레인 보트는 초승달 모양 아주 약간 오목 하지만 여전히 칼의 가장자리에 도달할 때까지. 언제 든 지 하지만 항상 칼의 가장자리에서 물의 레벨을 조정할 수 있습니다.
   10. 신중 하 게 표본으로 칼을가지고 블록 칼을 맞춥니다. 이것은 최고의 천천히, 정기적으로 검사 및 측면에서 접 안 렌즈를 통해 칼의 근접 이루어집니다.
       참고: 악기 다 특정 지침에 대 한 악기 핸드북을 확인 하십시오.
   11. 섹션 두께 톰에 설정 합니다. 정확한 두께 선택 하면 표본 크기, 관심 영역 및 사용 되는 칼의 종류에 의존 될 것입니다.
   12. 면 소재의 많은 관심의 영역에 도달 하기 전에 멀리 잘라 해야 합니다 유리 칼을 사용 하 여 (예를 들어, 4 µ m), 더 높은 설정을 선택 합니다. 다이아몬드 칼 사용 되 고 또는 표본은 매우 작은 경우 1-2 µ m 더 적절 한 수 있습니다.
   13. 칼은 가까이 있지만 아직 접근의 마지막 부분을 수행 하는 표본으로 절단 "절단" (톰 휠 다 오)를 시작 합니다. 섹션 내에서 몇 회전; 나타나기 시작 한다 그렇지 않으면, 중지 하 고 매우 신중 하 게가지고 칼 좀 더 가까이.
   14. 때 두께 (1 µ m 세미 얇은 섹션에 대 한)를 수집 하는 섹션을 조정 관심 영역을 접근.
   15. 속눈썹 도구를 사용 하 여 모든 섹션을 수집 합니다.
       참고: 속눈썹 도구 매니큐어와 얇은 막대기에 거치 된 속눈썹을 만들 수 있습니다.
   16. 자료를 많이 제거 한다, 축적 하 고 칼을 제거 하 고 물으로 그것을 밖으로 홍 조 하 여 한꺼번에 제거할 섹션을 허용 합니다. 유리 칼을 사용 하는 경우이 새로운 칼 또는 칼의 신선한 섹션을 변경 하는 적절 한 시간 수 있습니다.
   17. 장소는 파스퇴르 피 펫 또는 이상적으로, 필터를 사용 하 여 슬라이드에 증류수의 작은 작은 물방울의 시리즈 주사기를 장착.
   18. 조심 스럽게 물 방울에 속눈썹에 수집된 섹션 부동.
   19. 단면 깊이 확인 하기에 적합 한 때까지이 같은 섹션을 수집 합니다.
       참고: 비록 지루한 수 있습니다, 그것은 항상 자주 좋습니다.
   20. 60 ° c.로 설정 하는 열판에 슬라이드를 배치 모든 물이 증발 하는 슬라이드에 섹션을 허용 합니다.
   21. 톨루이 섹션 10-60 s 블루 염색 (섹션 두께가 달라 집니다 시간 얼룩). (위와) 필터를 장착 한 주사기와 염료를 분배.
   22. 슬라이드의 한쪽 끝에 염료의 한 방울을 놓고 만지거나 긁는 섹션 없이 바늘의 측면을 사용 하 여 그것을 확산. 약 10-20 대에 대 한 열판에 슬라이드를 놓습니다.
   23. 세척 병에 증류수를 분사 하 여 슬라이드를 헹 구 고 건조 뜨거운 접시에 놓습니다.
   24. 복합 현미경 확인 하 고 그들을 이미지.
   25. 관심 영역에이 때까지 반복 합니다.
   26. 울트라 얇은 섹션에 대 한: 가장 섹션 수집을 40-60 nm 사이 절단 두께 설정.
   27. 컷에 대해 3-5 섹션 및 검사 두께 간섭 색 차트를 사용 하 여. 섹션 각도에서 볼 때 밝은 회색을 반영 해야 합니다.
       참고: 클로 프롬 가스 모든 주름을 긴장을 섹션에 pipetted 수 있습니다. 이것은 숙련 된 사용자와 가장 관련이 고 초보자 걱정할 필요가 없습니다. 너무 많은 클로 프롬 섹션에 너무 가까이 발표 섹션을 손상 수 있습니다.
   28. Formvar 측면으로 겸 함께 개최 Formvar 코팅, 구리, 슬롯 그리드를 선택 합니다. 하지 Formvar 코팅 펑크에 주의 해야 합니다.
   29. Edgeways 보트에 그리드와 섹션에서 다음 섹션에서 표면에 평행 하 게 위로 표를가지고. 필요한 경우에 속눈썹을 사용 하 여 그리드를 통해 섹션을 안내.
   30. 신중 하 게 소량을 팔 사이 갇혀 물 필터 종이 집게 끝 주위. 이렇게 하지 물 긴장 팔 사이 표를 올려 하거나 한쪽에 충실 그것을 만들 수 있습니다. 이 오염 또는 기계적 손상 될 수 있습니다.
   31. 신중 하 게 edgeways 필터 종이에 그리드를 서 서 그리드 자체에서 초과 물을 제거 합니다.
   32. 표 홀더에 그리드를 배치 합니다.
   33. 충분 한 섹션이 수집 될 때까지 반복 합니다.
   34. 세미 얇은 섹션 카메라를 갖춘 어떤 화합물 현미경으로 직접 몇 군데 될 수 있습니다. 침수 기름 섹션에 직접 배치할 수 있습니다. 변색을 방지 하기 위해 슬라이드 상자에 슬라이드를 저장 합니다.
4. 얼룩 가장 대비를 위한 울트라 얇은 섹션
   참고: 다음 단계에 따라 수행 되어야 합니다 밖으로 커버 아래 염료는 빛과 CO₂ 민감한. 또한, EM 염료 중 금속을 사용 하 여 대비를 생산 하 고 그러므로 유해 물질. 이 얼룩을 처리 하는 경우 적절 한 배려를가지고 한다.
   1. 커버 알루미늄 호 일로 빛을 차단 하는 몇 가지 큰 접시. 이 대 한 다음 단계에서 작동 합니다. 부분적으로 작업 공간을 허용 하지만 다시 커버를 가능 한 한 빨리 배치를 발견.
   2. 왁 스의 조각을 잘라 하 고 신중 하 게 파스퇴르 피 펫을 사용 하 여 그것에 6% 포화 uranyl 아세테이트의 5 방울을 배치.
      1. 솔루션을 준비 하려면 2 세대 uranyl 아세테이트 100 mL 50% 메탄올, 증류수에 혼합 하 고 사용 하기 전에 솔루션을 필터링 합니다. 솔루션은 저장할 수 없습니다 하 고 여야 한다 신선한 각 시간¹⁹.
   3. 신중 하 게 가장 격자 데리 집게와 염료 방울 아래 섹션 측을 위에 균형. 25 분 동안 둡니다.
   4. 빠르게 증류수; 밖 그들을 담거 서 격자를 개별적으로 린스 증류수의 4 개의 다른 튜브를 통해 진행입니다.
   5. 영화의 신선한 조각에 리드 시트르산의 5 방울을 배치 합니다. 염료 방울 주위 몇 NaOH 펠 릿을 정렬 (이 리드 탄산의 강 수를 방지 하기 위해 대기 CO₂ 흡수).
      1. 리드 시트르산 솔루션으로 만들기 위해 끓는 증류수에 의해 이중 증 류 물 0.5 헤 허용 냉각 하 고 접착성 컨테이너에 추가할 0.3 g 리드 시트르산 이중 증 류 물 100 mL 물에 대 한 준비. 추가 1 mL 10 M NaOH, 단단히, 컨테이너를 봉인 하 고 녹아¹⁹까지 흔들.
   6. 4.3와 표지에 설명 된 대로 염료 방울에 격자를 놓습니다. 5 분 동안 얼룩입니다.
   7. 찍기 증류수와 격자 20 번에 의해 앞으로 증류수에 씻어. 증류수의 3 배를 통해 진행입니다.
   8. 격자 격자 상자에 건조를 허용와 필터 종이 초과 물을 담근 다.
   9. 가장 낮은 가속 전압에 이미지입니다.

결과

여기에 설명 된 방법을 사용 간단한의 상세한 연구와 개미의 겹 눈. Z-스택 photomicrography 기술을 사용 하 여 머리의 등 쪽 보기 이미징 비주얼 시스템 (그림 1)의 레이아웃에 대 한 개요를 얻을 수 있습니다. 이것은 좋은 준비 해 필요한 단면 각도 결정 하 고입니다. 이 기술은 머리 폭, 눈 길이, ocellar 렌즈 직경 등 측정에 유용 합니다. SEM 이미지 또한 상?...

토론

위에서 설명한 방법 중 스위트 개미와 다른 곤충의 광학 시스템에 대 한 효과적인 조사에 대 한 수 있습니다. 이러한 기술을 샘플링 해상도, 광학 감도 및 공부 되 고 눈의 잠재적인 분극 감도 대 한 우리의 이해를 게 알립니다. 이 지식은 그들의 시각적인 기능에 생리 및 행동 조사에 대 한 중요 한 기초를 제공합니다. 또한, 여기서 설명 하는 방법 개미 영상 시스템에 초점을 맞춘, 하는 동안 이러?...

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Name	Company	Catalog Number	Comments
Ant	Myrmecia midas
Stereomicroscope	Leica M205 FA
Sputter coater	Pro Sci Tech
Ethanol	Sigma Aldrich
Petri dish	ProSciTech
Dissecting microscope	Leica MZ6
Insect Pin	ProSciTech
Colourless nail polish	Non branded: from any cosmetic store
Glass slide	ProSciTech
Razor blade	ProSciTech
Foreceps	ProSciTech
Cover slip	ProSciTech
Compound microscope	Leica DM5000 B
Glutaraldehyde	Sigma Aldrich
Paraformalydehyde	Sigma Aldrich
Potassium Chloride (KCl)	Sigma Aldrich
di-Sodium Hydrogen phosphate (Na2HPO4)	Sigma Aldrich
Potassium di-Hydrogen Phosphate (KH2PO4)	Sigma Aldrich
Sodium Chloride (NaCl)	Sigma Aldrich
Osmium tetroxide	Sigma Aldrich
Acetone	Sigma Aldrich
Araldite Epoxy Resin	Sigma Aldrich
Pasteur pipette	Sigma Aldrich
Toluidie Blue	Sigma Aldrich
Hotplate	Riechert HK120