쥐의 우수한 막질 동맥 (SMA)에 장기 주입에 대한 액세스는 SMA의 근위 분기의 캐너레이션으로 구성된 외과 적 절차이다. 캐뉼라는 복부 상처에서 빠져나와 피하 공간을 통해 다시 교차층 접기로 터널을 통과합니다.
우수한 장간 동맥은 대퇴 또는 부조류 동맥의 최소 침습 방사선 카테터화를 통해 인간에서 캔누틸 수 있습니다. SMA 캐넌션은 작은 해부학 적 차원으로 인해 쥐에서 더 어렵습니다. 이 연구의 목적은 쥐에서 SMA의 수조를 위한 수술 기술을 기술하여 제한되지 않은 동물의 SMA 혈관 침대에 약물을 장기간 주입하는 데 도움이 되며, 이는 수술 후 회복 후 24시간 동안 높은 카테터 육아 수술을 받게 됩니다.
SMA 혈전증 또는 직접 접근에서 출혈의 위험을 피하기 위해, SMA의 근접 분기는 격리, 결집 및 0.25 mm 폴리 우레탄 모세관 튜브로 수통으로 그의 팁은 대르타에서 SMA의 기원에 가까운 고급. 그런 다음 캐뉼라는 동물의 목 뒤쪽과 인공 판막을 통해 피부를 통해 피하로 터널링됩니다. 캐뉼라의 외부 부분은 반강성 지지 시스템에 삽입되어 쥐가 자유롭게 움직일 수 있는 케이지 외부의 연속 주입 펌프에 연결됩니다.
캐뉼라의 올바른 위치는 수술 후 혈관 조영술 및 부검 결과에 의해 입증되었다. 24시간 동안 SMA 부위에 식염수 주입 후 카테터 가혈은 펌프의 총 방전및 혈액 샘플링 또는 식염수 주입을 위한 기능성 캐뉼라의 인식에 의해 대부분의 쥐에서 보장되었다.
쥐에서와 같이 인간에서 우수한 막질 동맥 (SMA)는 복부 대동맥에서 유래하고 근위 횡막 결장에 십이지장에서 동맥 혈액으로 창자를 공급합니다. SMA는 수많은 지점을 초래합니다.
모세관 관류 후, 막질 순환은 전신 순환으로 판독되기 전에 간 대사를 겪는 간으로 포문 정맥을 통해 배수됩니다. SMA의 캔포레이션은 대장또는 가장 중요한 간 대사 및 화학 적 통관에 미치는 영향을 평가하기 위해 선택적 이거나 지속적인 방식으로 진단 목적, 치료 색전및 약물 주입에 유용하다. 인간에서는, SMA의 최소 침습적인 방사선 카테터화는 혈관 내 치료를 위해 수행1 또는 선택적 약물 주입2 경피성 또는 형질 천자 및 캐넌션 과 같은 여러 경피적 접근을 사용하여.
작은 복부 혈관의 캐포레이션의 다른 기술의 문학 보고서가 있습니다: 우수한 막질 정맥 (SMV)3, 열등한 장간 동맥 (IMA)4, 막질 림프 덕트 5, 간 동맥6 또는 쥐의 창 자 관류에 전 생체 내 연구에 대한 연구7. 정맥 측에 비해, 쥐에 있는 SMA의 통조림은 그것의 높은 압력을 제공한 혈전증과 출혈의 동시 리스크 때문에 훨씬 더 까다롭습니다. 특히, 수술 후 케이지에 무료 동물을 필요로 하는 경우 쥐가 수술용 침대의 마취로부터 깨어날 때 수분이 작동할 경우 문제가 발생한다.
최근 논문은 마취8의 밑에 동물에 있는 실험 (혈압 측정)의 한 부분으로 SMA 캐넌레이션을 기술했습니다. 그러나, 어떤 기술도 무제한 동물에 장기 주입을 위한 SMA의 외과 수통에 기술되지 않습니다. 이 원고의 목적은 적어도 24 시간 (이상) 동안 막새 침대에 약물의 선택적 주입을 허용하는 근위 가지를 통해 SMA의 장기 수화를위한 외과 기술을 단계적으로 설명하는 것입니다. 꾸준하고 튼튼한 캐넌트는 카테터가 삽입된 선박의 영구 결찰 및 폐쇄가 필요하기 때문에, 이 기술은 대신 SMA9 에 직접 카테터를 삽입하는 것을 피하고, 대마로부터 SMA의 기원에 가능한 한 근접적으로 근위 분지의 통조림을 통해 용기에 접근한다. 근접 주입을 통해 주입된 약물이 주요 혈관을 통해 혈류를 닫지 않고 가능한 가장 넓은 해부학 침대에 도달 할 수 있습니다.
쥐 SMA 캐니언레이션 기술은 많은 응용 프로그램이 있습니다. 간질 동맥 구획에서 선택적으로 약물을 투여하여 위장 수준에서 국소 작용을 얻고 전신 효과 및 간 약물 대사를 피할 수 있습니다. SMA 캐뉼레이션 쥐 모델은 더 큰 동물 모델에 비해 장점이 있습니다 : 그것은 저렴하고 윤리적으로 허용되며 수행하고 배우기 쉽습니다. SMA 캐닌레이션 수술은 마우스 모델에 비해 쥐 모델에서 수행하기가 더 용이하다.
이 원고에 설명 된 연구는 지역 동물 윤리위원회 (Università Cattolica 델 사크로 Cuore, 로마)에 의해 승인되었으며 이탈리아 보건부에 따라 수행되었습니다.
1. SMA의 근위 가지에 삽입할 캐뉼라 준비
2. 수술 용 쥐준비
3. SMA의 근근 분지 의 수분
4. 캐뉼라의 터널링 및 주입 지원 시스템의 배치
5. 수술 후 관리
이 연구에서는, 절차는 15 마리의 쥐에 수행되었다. 식염수 주입의 24 시간의 끝에, 식염수 또는 혈액 손실의 흔적은 신진 대사 케이지에서 관찰되지 않았으며 복부 상처는 케이지와 마찬가지로 모든 동물에서 깨끗했다.
일반 케이지에서는 체중과 물/음식 섭취량을 매일 모니터링하여 5일 동안 쥐가 관찰되었습니다. 이 기간 동안, 총 검사에서 동물의 일반적인 상태는 행동 이상의 표시없이 좋았다. 수술 직후 모든 쥐가 다시 먹이를 주기 시작했습니다. 그림 3A 와 3B 에 도시된 바와 같이 평균 일일 음식과 물 섭취량은 3일 후에 정상까지 점진적으로 증가했습니다. 도 3C에서, 체중 증가가 규칙적이었다는 것을 볼 수 있으며, 관찰 기간이 끝날 때까지 점차 증가한다. 배변의 변화는 일어나지 않았고 매일 대변과 소변 출력은 정상이었습니다.
24시간 후, 식염수용 50mL로 채워진 펌프 2개(각각 40mL 및 20mL)가 있었고, 다른 모든 펌프(86.7%)는 비어 있었다. 더욱이, 이 주입 기간 이후에, 12개 칸누라(80%)는 혈액 샘플링과 식염수 주입(5mL)을 모두 기능하고 있었고, 3개 캐뉼라는 더 이상 특허를 받지 못했다(이들 중 2개는 잔류물을 가진 펌프에 연결된 칸누라였다)(표 1).
부검에서, 100% 캐뉼라 (n=15)는 여전히 SMA 가지에 위치하고 있었고 쥐에는 장 허혈 (그림 4B) 또는 내복부 출혈의 징후가 없었습니다. 3개의 폐색된 칸누라는 SMA 분기의 삽입에서 각각 0.5cm, 1cm 및 1.5cm로 꼬임된 것으로 나타났다. 이 현상은 아마도 케이지에있는 동물의 움직임에 기인한다.
5마리의 쥐에서, 절차 직후와 펌프 연결 직전, 2mL의 요오드 콘트라스트 배지를 장분수 칸라로 주입하여 심상 강화기를 통해 혈관조영술을 얻었다(혈관조영술은 수술 불능으로 수행되었다). 각 쥐(n=5)에서 , 도 4A에 도시된 바와 같이 복부에 대조 배지가 퍼지지 않고 막종 동맥원 및 SMA 및 주요 가지를 보는 것은 포지질이었다. 이것은 캐뉼라가 잘 배치되고 SMA의 지점에 고정되어 있음을 확인했습니다.
그림 1: 실험 사진. (A) 거즈에 대한 자연적인 성향에 따라 소장 (모든 가지와 SMA를 시각화 할 수있다); (B) SMA 분기에 캐뉼라를 삽입하는 연산자. 튜브의 삽입을 보장하기 위해 선박 아래에 고체 지원을 해야합니다. 단부 실크 봉합사는 선박을 닫고 근위 가분 내부의 카테터를 고정시합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 주입 지원 시스템. (A) 피하터널이 되면, 카누라는 목의 후방 부위에서 흰색 밸브를 통해 나온다. (B) 흰색 판막을 안정화하기 위해 재킷을 입은 쥐. 강철 막대는 주입 중에 카테터를 보호합니다. (C) 강철 막대를 빠져나가는 캐뉼라에 연결된 탄성펌프를 사용하여 식염수를 주입하는 동안 대사 케이지에 보관된 쥐의 다이어그램 표현. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3: 5일 의 관찰 기간에 쥐(n=15)의 식품 섭취, 수취 및 체중 증가에 대한 대표적인 데이터. 평균 일일 식품(A)과 물(B)의 섭취는 점진적으로 증가하고 3일 후에 생리학적 수준으로 안정화됩니다. 평균 체중 증가 (C) 점차적으로 관찰 기간의 끝까지 증가. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4: (A) 캐뉼라를 통한 대조 주입 후 막연동맥 영역의 대비 혈관조영술(적절하게 배치된 캐뉼라의 증거) 및 (B) 캐뉼라가 부검 중에 여전히 잘 배치되어 있는 사진.
엘라스테메릭 펌프 | 정 맥 | |||
비우다 | 잔류물 | 특허 | 특허가 아님 | |
n=15 | 13 | 2 | 12 | 3 |
% | 86.7 | 13.3 | 80 | 20 |
표 1: 식염수 주입 24시간 후 엘라스소메릭 펌프 방전 및 캐뉼라 가혈. 주사기로 혈액을 그리고 캐뉼라에 식염수 5mL를 주입하여 패혈증을 검사했습니다.
이 쥐 SMA 주입 모델의 주요 장점은 동물의 대다수에서 적어도 24 시간 동안 의 확고함과 내구성이다. 항응고제의 주입은 이 시간 간격을 연장할 수 있습니다. 이 모델은 대장의 작은 창자와 근근 부분을 대상으로 장막 부위에서 선택적으로 약물을 안정적으로 주입할 수 있게 합니다.
몇 가지 단계는 기술의 성공에 매우 중요합니다. 아주 작은 용기에서 캐니언을 달성하기 위해서는 적어도 400g의 쥐를 선택하는 것이 중요합니다. 성별과 나이는 관련이 없습니다. 올바른 수술 기구와 캐뉼라의 유형을 선택하는 것도 중요합니다. 여기서, 더 작은 폴리우레탄 캐뉼라(0.4mm O.D, 0.25 mm I.D.)는 1cm를 더 큰 캐뉼라(0.93mm O.D, 0.5mm I.D.)에 삽입하여 작은 동맥과 더 큰 주입 시스템에 모두 연결될 수 있도록 기능적이고 유용한 카테터를 얻을 수 있다.
첫 번째 수술 중요한 단계는 주변 지방 조직 (단계 3.5)에서 캐닝을 위해 확인 된 SMA 및 분기를 청소하는 것입니다. 이것은 일반적인 실수인 조직과 동맥 사이 캐뉼라의 삽입을 피하는 것을 돕습니다. 그러나 SMA의 작은 가지가 깨지기 쉽고 손상되기 쉽기 때문에 이 청소 단계는 어렵습니다. 가지가 다치면 합자에 의한 출혈을 멈추고 동물을 낭비하지 않도록 다른 근위 가지를 선택할 수 있습니다.
캐뉼라 내의 기포 형성을 방지하고 가스 색전증을 피하기 위해, 캐뉼라는 분기에 삽입하기 전에 팁까지 식염수로 채워져야합니다. 캐뉼라를 제자리에 고정하려면 수술실(4-0 실크)을 동맥에 삽입하는 지점과 카테터 주변의 용기 바로 위에 캐뉼라 팁 사이에 있어야 합니다. 수술 매듭은 캐뉼라를 고칠 만큼 단단해야하지만 너무 단단해서 그것을 가리기에는 너무 단단하지 않아야합니다 (3.12 단계).
올바른 캐뉼레이션을 보장하는 가장 좋은 방법은 캐뉼라(3.10단계)를 통해 혈류를 다시 보는 것입니다. 문제 해결의 관점에서, 이 일이 일어나지 않는 경우, 그것은 다음과 같은 이유로 인해 될 수 있습니다 :
캐뉼라는 동맥에 올바르게 삽입되지 않았습니다.
캐뉼라는 동맥 내부에 있지만 노드가 잘못된 위치에 가려져 있습니다.
캐뉼라는 동맥 내부에 있고 캐뉼라의 기포가 흐름을 늦추고 있습니다.
캐뉼라 내에서 혈전이 형성되었습니다.
잘못된 삽입은 동맥과 지방 조직 사이의 공간에서 캐뉼러 위치 지정 때문일 수 있다. 이 경우 다시 삽입이 필요합니다. 용기 위의 매듭이 캐뉼라를 가리면 매우 신중하게 풀고 다시 만들 수 있습니다. 카테터의 작은 기포는 일반적으로 캐니어를 손상시키지 않으며 생명을 위협하지 않습니다. 그러나 캐뉼라에 큰 기포가 있는 경우 주사기를 사용하여 캐뉼라에 다시 그리거나 카테터를 다른 가지에 재배치할 필요가 있다. 일반적으로, 혈전 형성을 피하고 작업 중에 가끔 식염수의 0.2 mL 볼루스를 주입하여 캐뉼라 특허를 유지할 수 있다.
이 연구의 한계는 더 긴 주입 시간에 있는 캐뉼라의 가혈의 저평가입니다: 여기에서, 24 시간 주입은 신진 대사 케이지에 보관된 쥐 동안 행해졌습니다. 더 긴 주입 기간을 얻으려면, 항 응고 요법을 사용하는 것이 유용할 수 있으며, 이 연구에서 투여되지 는 않는다. 그러나, 주입 하는 동안, 쥐는 주입 시스템을 지 원하는 유일한 하나 이기 때문에 신진 대사 케이지에 보관 해야 합니다. 이 위치는 더 긴 기간 동안 치료하는 경우 스트레스를 받을 수 있는 동물에 대 한 불편. 더욱이, 식염수 용액만 주입에 사용되었기 때문에 특정 약물 투여에 대한 결과는 없습니다. 이 방법의 한 가지 제한은 카테터에 사용되는 동맥 가지(존재하는 경우)에 주입할 수 없다는 것입니다. 이러한 이유로 대어타에서 가장 가까운 지점을 수분하는 것이 좋습니다.
억제되지 않은 동물을 위한 다른 쥐 SMA 장기 주입 모형은 문학에 존재하지 않습니다. 수년 전에 설명된 IMA 캐니언레이션 모델에 비해, 여기서 기술된 기술은 SMA 관류 영역에서 약물 주입을 허용하고 결장에 국한되지 않기 때문에 더 넓은 실험 목표를 가지고 있다. 최근에는 처음으로, SMA의 분기의 선택적 수분은 장경질 부위에 직접 보툴리눔 독소의 주입을 사용하였으나, 앞으로 많은 다른 약물을 시험할 수 있다. 예를 들어, 항응고제는 장혈전증, 또는 장내 미생물군유전체작용을 이용한 약물11 또는 염증성 장질환에 대한 약물12를 연구하기 위해 주입될 수 있다. 동맥 내 주입은 특히 장 대사 연구에 유용하며, 혈액이 간 대사의 대상이 되는 포털 순환을 거치기 전에 약물 효과가 매우 중요하기 때문입니다.
저자는 공개 할 것이 없습니다.
저자는 Cen.Ri.S.를 인정하고 싶습니다. 로마의 유니버시타 카토리카 델 사크로 쿠오레(Centro di ricerche sperimentali)의 허가를 받았다.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Crile-Wood Needle Holder | 2Biological Instruments | Tip Shape: Straight; Tip Width: 2 mm; Clamping Length: 14 mm; Lock: Yes; Scissors: No; Alloy / Material: Stainless Steel; Length: 15 cm; Serrated: Yes | |
Extra Fine Graefe Forceps | 2Biological Instruments | Tip Width: 0.5 mm; Tip Dimensions: 0.5 x 0.5 mm; Alloy / Material: Stainless Steel; Length: 10 cm | |
Luer Stub Adapter | BD Intramedic | 23 gauge for use with 427410 tubing | |
Membrane valve | Biomed | Mod 617 | |
Poliurethane Catheter | ENKI | external diameter: 0.4 mm, internal diameter: 0.25 mm | |
Silastic Catheter Laboratory tubing | Healthcare industries | 508-002 | |
Spring Scissors | 2Biological Instruments | Tip Shape: Angled; Tips: Sharp; Alloy / Material: Stainless Steel | |
Student Surgical Scissors | 2Biological Instruments | Tip Shape: Straight; Alloy / Material: Student Stainless Steel; Serrated: No; Feature: Student Quality |
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