성인 Xenopus에서 6개의 중요한 장기를 빠르게 샘플링하는 기술

요약

이 기사는 빠르고 쉽게 접근할 수 있는 성인 Xenopus 의 6가지 중요하고 다양한 장기(심실, 간엽, 췌장, 지방체, 쌍을 이루는 신장 및 피부)를 샘플링하기 위한 가이드를 제공합니다.

초록

Xenopus 는 100년 이상 동안 척추동물의 발달과 질병을 이해하기 위한 강력한 모델 유기체였습니다. 배아의 실험적 분석 및 해부 기술은 잘 문서화되어 있지만, 성인 Xenopus 구조 및 장기에 대한 설명과 성인과 함께 작업하는 기술은 정량적 단백질체학 및 단일 세포 전사체학과 같은 현대적인 접근 방식의 요구 사항을 고려하도록 업데이트되지 않았습니다. 세포 유형 및 유전자 중심적 관점은 배아 단계의 관찰과 성인 조직의 관찰을 대조하는 관찰을 필요로 합니다. 유충의 장기는 유충에서 성충으로의 전환을 따라 전체 구조, 형태 및 해부학적 위치에서 상당한 변화를 겪으며, 특히 대규모 변태 리모델링 중에 큰 변화를 겪습니다. 장기 식별 및 해부에 대한 강력한 표준을 수립하는 것은 서로 다른 실험실에서 수행된 연구의 결과로 얻은 데이터 세트가 일관될 수 있도록 하는 데 중요합니다. 본 프로토콜은 성인 Xenopus의 6 개 장기를 식별하여 성인 Xenopus의 심실, 간, 지방체, 췌장, 쌍 신장 및 피부의 절개 및 샘플링 방법을 보여줍니다. 보존 방법에 따라 절개된 장기는 정량적 단백질체학, 단일세포/핵 전사체학, in situ hybridization, 면역조직화학, 조직학 등에 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 조직 샘플링을 표준화하고 성인 장기 시스템에 대한 다중 실험실 연구를 촉진하는 것을 목표로 합니다.

서문

"성체 Xenopus"의 "디지털 해부"^{가 가능하지만}1, 다른 성체 모델(예: 생쥐 ^2,3,4)에 대한 자세한 지침 없이는 성체 Xenopus의 복제 가능한 장기 및 조직 샘플링이 여전히 어렵습니다. 이 기사는 현재 유충에 대해 사용할 수 있는 것과 유사한 성인 Xenopus의 정확하고 복제 가능한 장기 샘플링을 위한 명확한 지침을 제공하는 것을 목표로 합니다⁵. 최대한의 신선도를 유지하고 모든 사용자가 프로토콜에 액세스할 수 있도록 완료의 용이성에 중점을 둡니다.

Rana ^sp.6에 대한 철저한 해부 가이드와 다른 anurans⁷에 대한 수많은 교실 해부 가이드가 있지만 현재 Xenopus 해부 및 샘플링 가이드는 사용할 수 없습니다. 샘플링 방법이나 양서류 해부학에 익숙하지 않은 사람들을 위해 Xenopus와 ....

프로토콜

모든 실험은 하버드 의과대학 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)(IS 00001365_3)의 규칙 및 규정에 따라 수행되었습니다. 대표적인 결과는 관류된 및 관류되지 않은 성숙한 알비노 수컷 Xenopus laevis 모두에 대해 표시됩니다.

1. 실험 준비

알림: 샘플링 전에 관류 프로토콜⁸ 을 따르는 경우 2.2단계로 건너뜁니다.

1. 연구 기관이 이 프로토콜에 설명된 안락사 기술을 승인했는지 확인하십시오.
2. 5g/L MS-222(트리카인 메탄설포네이트) 및 5g/L 중탄산나트륨 용액을 준비합니다( 재료 표 참조). 그 부피는 안락사되는 동물을 완전히 덮는 데 필요한 부피보다 커야 합니다. pH가 ≥7인지 확인하십시오.
3. Xenopus를 안락사 용액에 넣어 1 차 안락사를 수행합니다. 동물은 총 1시간 동안 물속에 있습니다.
4. 샘플링 직후 모든 조직을 냉각 PBS 또는 0.7x PBS⁹ (실험 요구....

토론

이 프로토콜은 신선도를 극대화하는 것을 목표로 하기 때문에 일부 샘플에는 원치 않는 조직이 포함될 수 있습니다. 예를 들어, 간췌관과 일부 장간막은 췌장으로 샘플링되며, 일부 복막 조직, 부신 및 요관은 항상 쌍을 이루는 신장으로 샘플링됩니다.  신선도가 문제가 되지 않는 경우 수정된 기술을 사용하여 보다 정확한 샘플링을 얻을 수 있습니다.

장기의 모양과 위치는 <.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
5x Magnifying Glass with LED Light and Stand	amazon.com	B08QJ6J8P1	light must not produce heat
Disposable Transfer Pipets	VWR	414004-036
Dissecting Fine-Pointed Forceps	Fisher Scinetific	08-875
Dissecting scissors sharp piont, straight 6.5"	VWR	76457-374
Dissection Tray	Fisher Scinetific	14-370-284	styrofoam sheets are an acceptable alternative
Euthanasia container	US Plastic	Item 2860	alternative opaque containers acceptable
Euthanasia container lid	US Plastic	Item 3047
Iridectomy Scissors 6"	vwr	470018-938	iris scissors are an acceptable alternative
MS-222: Syncaine (formerly tricaine)	Pentair AES	TRS1
PBS 1x	Corning	21-040-CV
Sodium Bicarbonate, Powder, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Specimen Forceps, Serrated	VWR	82027-442
T-Pins for Dissecting	Fisher Scinetific	S99385