먼저 건강한 사람의 소변 샘플을 수집합니다. 15밀리리터 원뿔형 튜브에 12밀리리터의 시료를 원심분리하여 대형 세포사멸체의 세포 파편을 제거합니다. 그런 다음 10 밀리리터의 상층액을 새 15 밀리리터 튜브에 옮깁니다.
1밀리리터의 로딩 버퍼와 200마이크로리터의 EV 트랩 비드 슬러리를 샘플에 추가합니다. 샘플을 실온에서 30분 동안 끝 회전으로 배양합니다. 샘플을 펠릿으로 만들려면 15밀리리터 원뿔형 튜브를 자기 분리기 랙에 놓습니다.
상층액을 조심스럽게 제거하고 비드를 세척 완충액 1m리터에 다시 부유시킵니다. 그런 다음 현탁액을 1.5mL 마이크로 원심분리기 튜브로 옮기고 부드럽게 피펫팅하여 세포외 소포체 또는 EV 결합 비드를 다시 부유시킵니다. 마이크로 원심분리기 튜브를 1.5밀리리터 튜브용 마그네틱 분리기 랙에 놓습니다.
P200 피펫을 사용하여 상층액을 조심스럽게 흡입합니다. 이제 1 밀리리터의 세척 완충액으로 비드를 세척 한 다음 실온에서 1 밀리리터의 PBS로 2 회 세척합니다. 갓 준비한 100 밀리몰 트리에탄올아민 100 마이크로리터로 비드를 5분 동안 배양합니다.
1.5밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브 자기 분리기 랙을 사용하여 EV가 포함된 용액을 수집합니다. 제거된 용액을 결합한 후 섭씨 4도에서 진공 원심분리기 농축기를 사용하여 용출액을 건조시킵니다.
