마우스의 서혜부 림프절에서 B16F10-GP 세포의 결절 내 주입

100-U 인슐린 주사기를 사용하여 B16F10-GP 흑색종 세포 현탁액 20마이크로리터를 흡입하는 것으로 시작합니다. 주사기에서 기포를 제거합니다. 다음으로, 종양 절제 수술을 받은 마우스에서 세포 현탁액을 하나의 서혜부 림프절에 주입합니다.

림프절의 말단부에서 바늘을 삽입하고 림프절 중앙으로 천천히 움직입니다. 림프절이 크게 부풀어 오르는 것을 관찰하여 체액이 정확하게 주입되었음을 알 수 있습니다. 반대쪽의 서혜부 림프절에 동일한 양의 PBS를 주입합니다.

3-0 봉합사를 사용하여 절개 부위를 봉합합니다. 포비돈 요오드로 상처 주위의 피부를 소독한 다음 마우스를 깨끗한 케이지에 넣고 적외선을 사용하여 따뜻함을 유지합니다. 마우스를 측면 욕창 자세로 유지하고 의식이 회복될 때까지 지속적으로 모니터링합니다.

B16F10-GP 세포에 이식한 후, 헤마톡실린 및 에오신 염색에 의해 림프절 전이가 관찰되었습니다. 초기 단계에서 전이성 림프절은 종양 세포에 의해 부분적으로 점유되어 있었고 일부 영역에는 여전히 영향을 받지 않은 림프구가 포함되어 있었습니다. 말기에 이르러 전이성 림프절은 종양 혈관신생을 동반한 종양 세포로 채워졌습니다.

또한, 말초혈액 내 항원 특이적 CD8 양성 T세포의 빈도는 초기에 2.81%였으나 말기에는 1.48%로 떨어졌다. 흥미롭게도, CD8 양성 T 세포의 비율은 비전이성 림프절에서 안정적으로 유지되었지만, 초기에는 전이성 림프절에서 일시적으로 증가했으나 말기에는 급격히 감소했습니다.