IgAN 쥐 모델에서 분리된 Peyer's Patch의 면역조직화학적 분석

면역글로불린 A 또는 IgA 신경병증 모델 마우스에서 분리한 Peyer's patch의 이전에 준비된 파라핀 절편을 탈왁스하기 시작하려면 각 절을 자일렌 및 에탄올 구배에 순차적으로 5분 동안 담그십시오. 그런 다음 해당 부분을 증류수로 헹굽니다. 항원 회수를 위해 오토클레이브에서 구연산나트륨 용액을 2분 동안 가열합니다.

그런 다음 티슈 조각을 용액에 넣고 고온에서 5분 동안 가열합니다. 냉각되면 빛을 피한 실온에서 3% 과산화수소 용액에 단면을 15분 동안 배양합니다. 그런 다음 조직 절편에 10% 염소 세럼을 골고루 바르고 실온에서 30분 동안 배양하여 단면을 막습니다.

차단액을 털어낸 후 제조된 1차 항체를 각 절편별로 적당량 도포한다. 섭씨 4도에서 밤새 젖은 상자에 평평하게 놓인 절편을 배양합니다. 다음 날, HRP 표지 2차 항체 한 방울로 조직을 덮고 실온에서 50분 동안 배양합니다.

그런 다음 갓 준비한 DAB 발색 용액을 각 섹션에 바르고 색상이 나타날 때까지 기다립니다. 약 1분 동안 헤마톡실린으로 해당 부위를 다시 염색합니다. 그런 다음 파란색으로 돌아올 때까지 수돗물로 10분 동안 섹션을 헹굽니다.

탈수를 위해 각 섹션을 에탄올과 크실렌의 그라디언트에 각각 5분 동안 순차적으로 배치합니다. 모든 섹션이 약간 건조되면 각 섹션을 중성 검으로 밀봉합니다. 면역조직화학적 결과는 B세포 마커인 CD20 및 CXCR5 발현이 IgA 신경병증 모델군에서 대조군에 비해 유의하게 높았다는 것을 보여주었습니다.

그러나, dioscin는 분자 마커의 발현을 억제할 수 있었습니다.