환자 유래 위 오가노이드를 포장할 준비가 되면 오가노이드의 일상적인 통과를 시작합니다. 먼저, 24웰 플레이트에서 수행된 기저막 매트릭스에 내장된 오가노이드가 포함된 각 웰에서 배지를 제거합니다. 그런 다음 1m리터의 얼음처럼 차가운 고급 DMEM F12 배지를 지하 멤브레인 매트릭스 돔에 직접 분주합니다.
돔의 모든 조각이 플레이트에서 분리될 때까지 매체를 계속 흡입하고 분배합니다. 그런 다음 매체와 조각난 기저막 매트릭스를 모두 웰에서 다음 웰로 운반하고 포장이 예정된 모든 웰에 대해 프로세스를 반복합니다. 마지막 기저막 매트릭스 돔을 분해한 후 배지와 혼합물을 1.5밀리리터 튜브에 분배합니다.
1000 마이크로리터 팁을 P1000 피펫에 부착한 다음 이 팁을 200 마이크로리터 팁에 삽입합니다. 이 피펫 설정을 사용하여 오가노이드 매트릭스 혼합물을 위아래로 약 25회 세게 피펫팅하여 오가노이드를 작은 조각으로 조각화합니다. 2000 G.Using 피펫을 사용하여 섭씨 4도에서 탁상용 원심분리기를 사용하여 미디어 및 기저막 매트릭스 상층액을 흡입하여 단편화된 오가노이드 혼합물을 원심분리합니다.
계산된 신선한 기저막 매트릭스의 부피를 튜브의 펠릿 오가노이드에 추가합니다. 튜브의 내용물을 위아래로 부드럽게 피펫팅하여 혼합합니다. 50 마이크로리터의 오가노이드 매트릭스 혼합물을 24웰 플레이트의 개별 웰에 신속하게 분주합니다.
즉시 접시를 덮고 한 번의 부드러운 동작으로 접시를 거꾸로 뒤집습니다. 거꾸로 된 플레이트를 섭씨 37도의 조직 배양 인큐베이터에 35분 동안 넣어 기저막 매트릭스가 중합되도록 합니다. 마지막으로 500마이크로리터의 예열된 위 오가노이드 배지를 각 웰에 추가합니다.
시작 후 20일째가 되자 오가노이드는 통과할 준비가 되었으며, 이는 큰 오가노이드 크기 또는 어두운 내부로 표시됩니다. 이 지점을 넘어서기 위해 남겨진 오가노이드는 2D 단층으로 분해되기 시작했습니다. 위를 포장하고 다시 파종한 후, 돔에는 많은 오가노이드 조각이 포함되어 있어 매우 빠르게 더 많은 오가노이드로 재편성되었습니다.
