다공성 기판 기반 전기천공법을 위한 Fibronectin 코팅 및 A431 세포 시딩

피브로넥틴 코팅을 시작하려면 12개의 인서트와 2개의 24웰 플레이트를 선택합니다. 인서트를 하나의 웰 플레이트에 놓고 6개씩 두 줄을 만듭니다. 1.5밀리리터 튜브에 52마이크로리터의 피브로넥틴 원액과 1.2밀리리터의 PBS를 혼합하여 밀리리터당 1마이크로그램을 준비합니다.

100 마이크로 리터의 피브로넥틴 용액을 각 삽입물에 분배합니다. 섭씨 37도의 웰 플레이트에서 3시간 동안 삽입물을 배양합니다. 배양 후 각 삽입물에서 과도한 피브로넥틴 용액을 제거합니다.

각 인서트에 100마이크로리터의 멸균 증류수를 추가하여 인서트를 두 번 세척합니다. 인서트 사이에 일관된 세척 시간을 보장하기 위해 첨가한 순서와 동일한 순서로 물을 제거하십시오. 이제 100마이크로리터의 세포 배양 배지로 삽입물을 세척한 다음 삽입물에서 배지를 제거합니다.

다음으로, 200마이크로리터의 A431 셀 현탁액을 인서트에 파종합니다. 음성 대조군의 경우, 200 마이크로리터의 세포 배양 배지를 인서트에 피펫팅합니다. 영구 마커를 사용하여 두 번째 웰 플레이트를 3웰 너비의 두 열로 나누는 선을 그립니다.

각 열을 행으로 구분합니다. 그리드의 각 영역에 관련 매개변수로 레이블을 지정합니다. 각 웰에 1mL의 세포 배양 배지를 추가합니다.

전처리 플레이트의 삽입물을 라벨이 부착된 실험 플레이트의 적절한 위치로 옮기고 섭씨 37도에서 12시간 동안 배양합니다.