애기장대(Arabidopsis) 묘목의 열 스트레스 처리 및 폴리솜 프로파일링 및 RNA 추출을 위한 자당 그래디언트 준비

시작하려면 스포이드를 사용하여 자당이 없는 Murashige 및 Skoog Basal Media 한천 플레이트에 놓인 여과지에 각 조건 그룹에 대해 250개의 애기장대 씨앗을 플레이트하고 1.2% 식물 한천을 보충합니다. 알루미늄 호일로 접시를 싸서 빛을 차단하고 섭씨 4도의 인큐베이터에 2일 동안 넣어 vernalization을 유도합니다. 이틀 후, 호일의 포장을 풀고 vernalized 씨앗을 성장 챔버로 옮깁니다.

식물이 5일 동안 자랄 수 있도록 합니다. 다음으로, 5 일 된 묘목이 들어있는 플레이트를 방수 접착 테이프로 밀봉합니다. 열 스트레스 처리를 위해 접시를 섭씨 40도의 수조에 1시간 동안 놓습니다.

열처리 직후에는 플레이트를 식히고 22°C로 설정된 생장실에 옮겨 2시간 동안 회복할 수 있도록 합니다. 250개의 열처리 또는 처리되지 않은 묘목을 1.5ml의 마이크로 원심분리기 튜브로 수확합니다. 채취한 샘플을 액체 질소에 즉시 동결합니다.

12.5 % 24.4 % 36.3 % 48.1 % 및 60 %의 농도로 자당 구배 용액을 준비하려면 불연속 자당 밀도 구배를 준비하려면 먼저 튜브 바닥에 2.2 % 자당 용액 60 밀리리터를로드합니다. 그런 다음 튜브를 섭씨 80도의 냉동고에 넣어 자당 용액을 고체 상태로 얼립니다. 응고 후에, 시리즈에서 다른 자당 농도의 각각 2.2 밀리리터를 아래에서 위로 적재하십시오.

준비된 자당 그라디언트를 사용할 때까지 섭씨 80도에서 보관하십시오.