우리는 시설과 이온 채널의 연구에 대한 훌륭한 환경으로 우리를 제공 생리학 및 분리막 생물, 캘리포니아 데이비스 대학의학과에 감사하고 있습니다.

1. 휴식 인간의 T Lymphocytes의 준비 <ol><li> RosetteSep 인간 T 세포 농축 칵테일과 RosetteSep 밀도 매체를 사용하여, 제조 업체의 지시에 따라 인간의 혈액 샘플에서 T 세포를 정화. 그 결과 세포 인구는 95 % 인 경우에는 3 번 CD + 쉬고있는 T 세포를 포함해야합니다. 우리는 UC 데이비스 내부 검토위원회의 승인을 프로토콜에 따라 건강한 지원자에서 수집한 말초 혈액 샘플에서 인간의 T lymphocytes 정화. </li><li> 분리 후 10 % 태아 송아지 혈청, 2퍼센트 GlutaMAX - I, 1 % RPMI 1640과 보충, 글루타민과 HEPES와 RPMI - 1640 매체를 포함하는 세포 배양 매체에서 0.5 X 10 6 세포 / ML의 밀도에 쉬고 T 세포를 resuspend 비타민 용액, 1 % RPMI 1640 아미노산 용액, 1 %의 나트륨 pyruvate, 그리고 0.03 % β - 메르 캅 토 에탄올. </li><li> 플레이스 세포 세포 배양 flasks에 서스펜션과 ° humidified 인큐베이터에서 C 5 % CO 2와 함께 최대 24 H하기 전에 실험을 위해 37 유지합니다. </li></ol> 2. 기록 회의소의 준비 <ol><li> 다음은 녹화 회의소를 준비하는 데 필요한 :) B, A) 실리콘 O - 링을 회전, 70 % 에탄올과 증류수 H 2 O, C와 함께 청소를 25 mm coverslips)는 Sylgard184를 혼합 제조 업체의 지시에 따라 준비하고, D) 이 60 X 15mm 페트리 요리. </li><li> 플레이스 ~ 60x15 - mm 배양 접시에 혼합 Sylgard184 0.5 ML. </li><li> Sylgard184 사용 포셉에 O - 링의 하단 부분을 찍어. </li><li> 같은 다른 배양 접시로 깨끗한 표면에 O - 링을 배치하여 O - 링의 가장자리에서 초과 Sylgard184를 제거합니다. </li><li> coverslip에 반지를 놓고 그것을 아래로 누르십시오. </li><li> 85 ° 40-60 분 또는 Sylgard184까지 C가 polymerized입니다에서 실 가열하여 Sylgard184 치료. </li><li> 먼지없는 용기에 녹화 실에 보관하십시오. </li></ol> 3. 패치 Pipettes의 준비 <ol><li> 실험 당일, 유리 모세관 및 피펫 풀러를 사용하여 ~ 2 μm의 팁 직경 pipettes를 가져옵니다. 우리는 필라멘트 (1.5 mm 및 ID : 1.10 mm OD)와 borosilicate 튜빙을 사용합니다. 먼지없는 위치에 저장 pipettes. </li><li> 표준 절차에 따라 9 Sylgard184 또는 HIPEC R6101 반도체 보호용 코팅 코트 피펫은 팁. </li><li> 부드럽게 실험 전에 pipettes를 해고 - 폴란드어. </li></ol> 4. 패치 클램프 설치 준비 <ol><li> 여러분의 패치 - 클램프 앰프를 제어 소프트웨어의 gigaseal 형성에 대한 매크로를 구성하고 저장합니다. 우리는 Windows XP 및 데이터 수집을위한 펄스 소프트웨어에 의해 지원되는 EPC - 10 앰프를 사용합니다. 우리는 EPC - 10 사용 설명서에 따르면, &quot;에 셀 &#39;및&#39;전체 셀&quot;매크로 &quot;설정&quot;을 설정하고 모든 실험에 사용합니다. </li><li> 이전 실험 목욕 솔루션 및 표 1에 나와있는 피펫 솔루션을 준비하고 최대 일주 4 ° C에 그들을 저장할 수 있습니다. </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td> 화학 제품 </td><td colspan="3"> 바스 솔루션 (㎜) </td><td> 피펫 솔루션 (㎜) </td></tr><tr><td></td><td> # 1 </td><td> # 2 </td><td> # 3 </td><td></td></tr></tbody><tbody><tr><td> CH 3 SO 3 나 </td><td> 130 </td><td> 110 </td><td> 125 </td><td> - </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 2 </td><td> 4 </td><td> 5 </td><td> - </td></tr><tr><td> CA (OH) 2 </td><td> - </td><td> 20 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> 3 </td><td> 1 </td><td> - </td><td> 5 </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> 2 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 15 </td></tr><tr><td> HEDTA </td><td> - </td><td></td><td> 10 </td><td> - </td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> - </td><td> - </td><td> 1 </td><td> - </td></tr><tr><td> CS -spartate </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> 125 </td></tr><tr><td> BAPTA </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> 12 </td></tr><tr><td> 포도당 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> 10 </td><td> - </td></tr></tbody></table> 표 1. 전체 셀 CARC 현재 레코딩을위한 솔루션을 제공합니다. 모든 화학 물질은 시그마 - 알드리치, 세인트 루이스, MO에서 구입한했다. <ol start="3"><li> 패치 피펫 솔루션과 각 목욕 솔루션 10 ~ 액상 접합 잠재력 (LJ)를 결정합니다. 당신의 수집 소프트웨어를 사용하여 적절한 장소에 LJ 값을 저장합니다. 예를 들어, 펄스 프로그램의 &quot;앰프&quot;창에서 &quot;LJ&quot;컨트롤에 LJ 값을 삽입합니다. </li><li> 실험 전에 수집 소프트웨어의 적절한 장소에서 그림 1에 표시된 자극 프로토콜, 구성 및 저장합니다. 펄스 프로그램에서 우리는 &quot;펄스 생성&quot;창에서 수집 프로토콜을 설정합니다. <img src="/files/ftp_upload/2346/2364fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. . 자극 프로토콜 -120에서 기간 50 MS의 백 뮤직 비디오에 전압 램프마다 0.2를 적용 - 2 s을 (5-0.5 Hz에서). 구불 구 사이의 개최 가능성 (V H)는 30 MV에서 관리하고 있습니다. </li></ol> 5. 현미경 스테이지에 장착 셀 <ol><li> 세포를 도금하기 전에 다음 ~ 20 분 및 세척 H 2 O와 행크의 균형 소금 용액 (HBSS)에 대한 폴리 - L - 라이신과 코트 녹화 실 있습니다. </li><li> 37 20 분 챔버 및 부화에 0.2-0.5 X10 6 셀을 포함하는 세포 현탁액의 플레이트 500 μL ° C. </li><li> 챔버 홀더에 부착된 세포로 녹음 챔버를 고정합니다. 우리는 맞춤 제작 챔버베이스 coverslip의 바닥을 지원 홀더, coverslip의 상단으로부터 상단 부분은 부드럽게 프레스 동안.를 사용하여 </li><li> 거꾸로 현미경의 무대에 챔버 홀더를 놓습니다. </li><li> 전송 빛의 세포에 초점. 우리는 40X 기름 침지 목표를 사용합니다. </li><li> 욕조에 자세 / AgCl 기준 전극을 삽입합니다. </li><li> multibarrel 중력 기반의 재관류 시스템을 맞춥니다. 유입 튜브의 끝은보기의 필드에 coverslip 가까이에 45 ° 각도로 배치해야합니다. </li><li> 유입 튜브 끝에 반대 흡입 튜브를 놓습니다. </li><li> 와 챔버 Perfuse 인산염 버퍼 호수 (PBS) 또는 HBSS은 세포 배양 매체와 느슨하게 연결된 세포를 멀리 세척하십시오. </li></ol> 6. CRAC 채널 해류 녹음 <ol><li> 단단히 coverslip에 연결된 세포를 찾아보십시오. 우리는 일반적으로 부드러운 외부 표면과 평균 크기, 원형 셀을 선택합니다. </li><li> + - 무료, 3 MM MG 2 + 함유 목욕 솔루션 SERCA 펌프를 차단하기 위해 80-10 분 0.5-1 μm의의 thapsigargin를 포함하는 # 1 (표 1) 칼슘 2 녹음 챔버를 Perfuse. 우리는 이전 gigaseal 형성하기 위해 저장소를 고갈이 단계를 수행합니다. </li><li> Eppendorf microloader와 P - 20 변위 피펫을 사용하여, 피펫 솔루션 (표 1)과 함께이 패치 피펫을 기입하여 증폭기 headstage에 피펫 홀더에 패치 피펫를 삽입합니다. 칼슘 2 + chelator BAPTA는 수동적으로 저장을 고갈하고 + 종속 CRAC 채널 불활 성화 칼슘 2 줄이기 위해 피펫 솔루션에 포함되어 있습니다. </li><li> 패치 피펫 내부 욕조에 들어가기 전에 긍정적인 압력 (H 2 O 중 ~ 3 인치)의 작은 금액을 적용합니다. 우리는 가압 공기와 패치 피펫 내부 긍정적이거나 부정적인 압력을 만들 진공 라인에 연결된 사용자 정의 - 만든 압력 흡입 장치를 사용합니다. </li><li> 현미경을 통해 시각적인 통제 욕조에 패치 피펫을 낮추십시오. &quot;오실로 스코프&quot;창에서, 당신은 피펫을 통해 흐르는 전류를 볼 수 있습니다. 현재 진폭의 단계와 같은 변경 사항이 미리 매크로에 의해 적용되는 작은 진폭 전압 펄스 (시험 펄스)에 의해 유도해야합니다. 이 시점에서, 당신은 피펫 저항의 가치를 확인할 수 있어야합니다. 우리 pipettes의 저항은 일반적으로 5-6 MΩ입니다. </li><li> 피펫 및 참조 전극 사이에 생성된 &quot;오프셋&quot;잠재력을 수정합니다. </li><li> 그것은 세포막을 만지는 때까지 현미경을 통해 시각적인 통제, 가까이 세포에 피펫 팁을 가지고. </li><li> 패치 피펫 내부 부정적인 압력 (H 2 O의 20~40인치)을 적용합니다. </li><li> &quot;오실로 스코프&quot;창에서 gigaseal 형성을 모니터링합니다. 당신은 시험 펄스, 감소 및&gt; 5 GΩ에 피펫 저항 증가의 가치에 의해 유도 전류의 진폭을 볼 수 있습니다. 철 이내 gigaseal 형태w 초,하지만 그것은 안정 gigaseal을 달성하기 1-2 분 정도 걸릴 수 있습니다. </li><li> 피펫 커패시턴스 ( &quot;C - 빠른&quot;)에 대한 보상. </li><li> 20 CC 주사기를 사용하여 추가 부정적인 압력을 적용하여 패치 막 브레이크. </li><li> 30 MV에 보관 잠재력을 설정합니다. 긍정적인 지주 잠재 칼슘 의존 CRAC 채널 불활 성화를 방지하는 데 도움이됩니다. </li><li> 세포의 막 커패시턴스 ( &quot;C - 느린&quot;)에 대한 보상, C - 느린의 가치를 저장하거나 기록합니다. </li><li> 액세스 저항 &quot;R S&quot;의 가치를 확인합니다. 우리의 실험에서는 R S는 일반적으로 MΩ 70-20 있습니다. </li><li> + 무료 3 MM MG 2 + 함유 목욕 솔루션 # 1 칼슘 2 0.5 Hz의 주파수 (그림 1)과 전압 구불 구 일련의 사항을 적용하려면 시작합니다. MG 2 +에 대한 CRAC 채널의 가난한 투자율에 의한 &quot;누설&quot;현재와 비교하여 본 솔루션에서는 CRAC의 전류 negligibly 작습니다. 저장하고 &quot;누출&quot;조류로서 향후 분석에서 목욕 솔루션 # 1에 기록된 현재 추적을 사용합니다. -100 MV에있는 &quot;누설&quot;현재의 절대 진폭 미만 또는 5 PA 동일해야합니다. 세포는 &quot;새는&quot;있다면, 새로운 패치 피펫하고 새로운 세포를 사용을 통해 실험 시작을 중지합니다. </li><li> CRAC 채널 (I CA - CRAC)를 통해 칼슘 2 + 전류를 기록하려면 재관류 밸브 전환 20 MM 칼슘 2 + 함유 목욕 솔루션 # 2 (표 1)과 칼슘 2 + 무료 3 MM MG 2 + 함유 목욕 솔루션 # 1을 대체합니다. 이것은 칼슘 2 + CRAC 채널을 통해 흐름에 가능하며 내향 전류를 생산하고 있습니다. &quot;오실로 스코프&quot;창에서, 당신은 내심 I CA - CRAC (그림 2) 정류의 개발을 볼 수 있습니다. 부정적인 전압에서 전류 진폭은 칼슘 2 CRAC 전류의 + 종속 potentiation로 인해 약 1 분 계속 증가할 것입니다. </li><li> CRAC 채널을 통해 과도 나 + 전류를 기록하는 데 필요한 5 Hz에서, 전압 경사로와 함께 자극의 빈도를 늘리십시오. </li><li> 20 MM를 교체 칼슘 2 + 함유 재관류 밸브를 전환하여 나 + 함유 이가의 양이온 무료 솔루션 # 3 (표 1) 욕조 솔루션 # 2. &quot;오실로 스코프&quot;창에서, 당신은 안쪽으로 나를 정류 큰 진폭의 과도 발전을 볼 수 + ​​현재 CRAC 채널 (I 나 - CRAC, 그림 2)를 통해. </li><li> 하나는 20 MM 칼슘 2 &quot;누설&quot;현재를 기록하는 실험의 끝에 1-5 μm의 라 3 +를 포함하는 + 함유 목욕 솔루션 # 2를 적용할 수 있습니다. 그러나, 우리는 시간이 지남에 &quot;누출&quot;현재 변경하기 때문에이 방법은 유용하지 않았고 그것은 실험의 끝에 크거나 작게 될 수 있습니다. 우리는 칼슘이에 기록된 현재 + 무료 3 MM MG 2 &quot;누설&quot;현재와 같은 실험의 시작 부분에 + 함유 목욕 솔루션 # 1.을하는 것을 선호 </li><li> 자세한 분석을 위해 기록된 현재의 흔적을 저장합니다. </li></ol> 7. 데이터 분석 <ol><li> 분석 소프트웨어에 저장된 현재 레코드를 검색할 수 있습니다. 우리는 분석을위한 펄스 프로그램을 사용합니다. </li><li> 처음에과 전압 경사로의 끝부분에 현재 amplitudes를 측정. 우리는 일반적으로 -100 뮤직 비디오에서와 펄스 프로그램의 &quot;오실로 스코프&quot;창에서 커서의 쌍을 사용하여 100 뮤직 비디오에서 현재 amplitudes를 측정합니다. </li><li> 자세한 분석 및 그래픽 프레 젠 테이션 그래픽 프로그램으로 현재 amplitudes의 가치를 내보냅니다. 우리는 기원 과학 그래프 및 분석 소프트웨어, 버전 7을 사용합니다. </li></ol> 8. 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/2346/2346fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 쉬고 인간 T 세포의 CRAC 전류. (A), -100 MV (채워진 원)과 100 MV (오픈 원)에서 전체 셀 전압 클램프 구성에 기록된 CRAC 전류의 시간 코스. gigaseal 형성하기 전에, 세포는 칼슘 2 ~ 10 분 preincubated했습니다 + 무료 3 MM MG 2 + 함유 목욕 솔루션 0.5 μm의의 thapsigargin을 포함하는 # 1. 침입 후, 목욕 솔루션은 순차적으로 다음과 같이 적용되었습니다 칼슘 2 + 무료 3 MM MG 2 칼슘 2 + 함유 목욕 솔루션 # 2 20 MM 다음 + 함유 목욕 솔루션 # 1 (0 칼슘 + 3 MG) (20 CA), 목욕 솔루션 # 2 (20 CA) 뒤에 이가의 양이온 무료 목욕 솔루션 # 3 (DVF)로 따라갔다. 전지는 그림 1에 표시된 전압 구불 구 일련의 자극했다. 구불 구의 빈도는 목욕 솔루션 # 3 (DVF)와 다른 모든 솔루션에 0.5 Hz에서 5 Hz에서했습니다. 20 MM 칼슘 2 + 함유 목욕 솔루션 # 2 및 DVF 목욕 솔루션 # 3 I 나 - CRAC의 빠른 과도 개발 신청 후 CA - CRAC의 느린 개발을합니다. (B), 대표 현재 흔적이 + 무료 3 MM MG 2 + 함유 목욕 솔루션 # 1 (CA 2 전압 경사로 동안 기록&quot;누설&quot;), 20 MM 칼슘 2 + 함유 목욕 솔루션 # 2 (20 CA), 그리고 목욕 솔루션 # 3 (DVF)을. (C, D), I CA - CRAC (C)와 나 - CRAC (D)의 전류 - 전압 관계 20 MM의 전압 - 경사로 중에 칼슘 2 + 함유 목욕을 기록 전류에서 &quot;누출&quot;현재를 빼서 얻은 솔루션 # 2 (20 CA), 그리고 목욕 솔루션 패널에 표시된 # 3 (DVF) (B).

<ol>
	<li>Parekh, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-operated+CRAC+channels:+function+in+health+and+disease.">Store-operated CRAC channels: function in health and disease.</a> Nat Rev Drug Discov. 9, 399-410 (2010).</li><li>Feske, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRAC+channelopathies.">CRAC channelopathies.</a> Pflugers Arch. , (2010).</li><li>Lewis, R. S., Cahalan, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogen-induced+oscillations+of+cytosolic+Ca2++and+transmembrane+Ca2++current+in+human+leukemic+T+cells.">Mitogen-induced oscillations of cytosolic Ca2+ and transmembrane Ca2+ current in human leukemic T cells.</a> Cell Regul. 1, 99-112 (1989).</li><li>Zweifach, A., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+inactivation+of+depletion-activated+calcium+current+(ICRAC)+due+to+local+calcium+feedback.">Rapid inactivation of depletion-activated calcium current (ICRAC) due to local calcium feedback.</a> J Gen Physiol. 105, 209-226 (1995).</li><li>Zweifach, A., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Slow+calcium-dependent+inactivation+of+depletion-activated+calcium+current.+Store-dependent+and+-independent+mechanisms.">Slow calcium-dependent inactivation of depletion-activated calcium current. Store-dependent and -independent mechanisms.</a> J Biol Chem. 270, 14445-1451 (1995).</li><li>Zweifach, A., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-dependent+potentiation+of+store-operated+calcium+channels+in+T+lymphocytes.">Calcium-dependent potentiation of store-operated calcium channels in T lymphocytes.</a> J Gen Physiol. 107, 597-610 (1996).</li><li>Prakriya, M., Lewis, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+and+characterization+of+currents+through+store-operated+CRAC+channels+and+Mg2+-inhibited+cation+(MIC)+channels.">Separation and characterization of currents through store-operated CRAC channels and Mg2+-inhibited cation (MIC) channels.</a> J Gen Physiol. 119, 487-507 (2002).</li><li>Fomina, A. F., Fanger, C. M., Kozak, J. A., Cahalan, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+channel+properties+and+regulated+expression+of+Ca(2+)+release-activated+Ca(2+)+(CRAC)+channels+in+human+T+cells.">Single channel properties and regulated expression of Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channels in human T cells.</a> J Cell Biol. 150, 1435-1444 (2000).</li><li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Single-Channel Recording. , (1995).</li><li>Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+for+liquid+junction+potentials+in+patch+clamp+experiments.">Correction for liquid junction potentials in patch clamp experiments.</a> Methods Enzymol. 207, 123-1231 (1992).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

이러한 세포의 내생 CRAC 현재 진폭이 작은 셀 크기 (쉬고 인간 T 세포의 직경은 5-8 μm의 범위에있는)에 의한 소형이기 때문에 인간의 T 세포를 휴식에 CRAC 전류 electrophysiological 조사 어려운 작업입니다. 여기에서 우리는 확실하게 주변 혈액 mononuclear 세포로부터 격리 쉬고있는 인간의 T lymphocytes에 CRAC 전류를 기록하기위한 단계별 절차를 제시한다. 이 기술은 우리가 더 나은 정상 및 병적인 면역 세?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RosetteSep Human T Cell Enrichment Cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>StemCell Technologies, Vancouver, BC, Canada</td>
<td>15061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RosetteSep Density Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>StemCell Technologies </td>
<td>15705</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI-in 1640 medium w/glutamine/HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher, Waltham, MA</td>
<td>SH3025501</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Calf Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Omega Scientific, Tarzana, CA</td>
<td>FB-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GlutaMAX-I (100X solution)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen, Carlsbad, CA</td>
<td>35050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI 1640 vitamin solution (100X)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>7256</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1640 amino acids solution (50X)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>R7131</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium pyruvate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>S8636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&beta;-Mercaptoethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>M7522</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Inositol trisphosphate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>19766</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BAPTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A4926</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Poly-L-Lysine Hydrobromide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>P2636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lanthanum Chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>262072</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thapsigargin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>586005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicon Elastomer Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning, Midland, MI</td>
<td>3097358-1004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HIPEC R6101 Semiconductor Protective Coating</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning, Midland, MI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>63-500 Series High-Performance Vibration Isolation Lab Table</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Technical Manufacturing, Peabody, MA</td>
<td>63-540</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EPC 10 patch clamp amplifier with headstage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HEKA Instruments, Bellmore, NY</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micromanipulator </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instrument, Novato, CA </td>
<td>MP-285</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Olympus 1X71 Inverted microscope with 40x oil immersion objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus America, Center Valley, PA</td>
<td>1X71</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Windows Computer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dell </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pulse software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HEKA Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Origin Scientific Graphing and Analysis Software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>OriginLab, Northampton, MA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Patch pipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instrument</td>
<td>P-97</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Borosilicate glass with filament (O.D.: 1.5mm and I.D.: 1.10mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instrument</td>
<td>BF150-110-7.5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Narashige's Microforge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tritech Research, Los Angeles, CA</td>
<td>MF-830</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicon O-rings </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McMASTER-CARR, Santa Fe Springs, CA</td>
<td>111 S70</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips 25 mm </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific </td>
<td>12-545-102 25 mm 25CIR.-1</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
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whole-cell recording of calcium release-activated calcium (crac) currents in human t lymphocytes

T lymphocytes 년, CA 2 고갈 + 세포내 칼슘 2 + 저장소, plasmalemmal 칼슘 2 활성화에 + 채널을 리드 칼슘 출시가 활성화된 칼슘 (CRAC) 채널을했다. CRAC 채널은 T 세포 증식 및 유전자 발현의 조절에 중요​​한 역할을한다. T 세포의 비정상적인 CRAC 채널 기능이 심한 결합 면역 결핍과 면역 질환 1, 2에 연결되어 있습니다. 인간 T 세포의 CRAC 채널 기능을 공부하는 것은 정상적인 면역 반응을 조절 새로운 분자 메커니즘을 발견하고 관련 인간 질병의 원인을 풀다 수 있습니다. 멤브레인 전류의 Electrophysiological 녹음 기능 채널 특성과 규제의 가장 정확한 평가를 제공합니다. Jurkat T 세포, 인간의 백혈병 T 세포 라인에 CRAC 채널 전류의 Electrophysiological 평가는 처음 3 전 20 년 이상 수행했다, 그러나 정상적인 인간의 T 세포에 CRAC 전류 측정이 어려운 과제 남아있다. 정상적인 T 세포의 CRAC 채널 전류를 기록의 어려움은 혈액 파생 T의 lymphocytes가 Jurkat T 세포보다 크기가 훨씬 작고, 따라서 내생 전체 세포 CRAC 전류가 진폭 매우 낮게있다는 사실에 의해 혼합 수 있습니다. 여기, 우리가 정기적으로 칼슘 2를 기록하는 데 사용하는 + 나 + 나 건강한 자원 봉사자의 말초 혈액에서 분리된 인간의 T 세포를 휴식에 CRAC 채널을 통해 전류. 단계별 절차를 제공 방법은 여기에 설명된 Jurkat T 세포에서 CRAC 전류를 기록하고 인간의 T 세포 4-8을 활성화에 사용되는 절차에서 채택되었습니다.

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Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium CRAC Currents in Human T Lymphocytes

우리는 칼슘 출시가 활성화된 칼슘의 전체 세포 패치 클램프 녹음 (CRAC) 말초 혈액 mononuclear 세포 - 파생 인간 T의 lymphocytes의 전류에 대한 단계별 절차를 제공합니다.

인간의 T Lymphocytes에서 칼슘 출시가 활성화된 칼슘의 전체 세포 기록 (CRAC) 해류

In T lymphocytes, depletion of Ca2+ from the intracellular Ca2+ store leads to activation of plasmalemmal Ca2+ channels, called Calcium Release-Activated ...

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Research

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Biology

Whole-Cell Recording of Calcium Release-Activated Calcium (CRAC) Currents in Human T Lymphocytes

16.0K 조회수.  University of California, Davis. 우리는 칼슘 출시가 활성화된 칼슘의 전체 세포 패치 클램프 녹음 (CRAC) 말초 혈액 mononuclear 세포 - 파생 인간 T의 lymphocytes의 전류에 대한 단계별 절차를 제공합니다.