진드기는 조혈 균 국 외 항문, Rhipicephalus microplus, 널리 가축 진드기로 알려진 열대 지역에서 가축에 엄청난 부정적인 경제적 영향을 미칠. 또한, 화학적 카카르티드의 부적절한 사용과 전통적인 기생충에 대한 진드기 집단의 저항증가로 인한 환경 상태 및 공중 보건 에 대한 우려가 증가하고 있으며, 내모병원성 균류의 사용과 같은 대체 제어 방법에 대한 연구를 자극하고 있다. 이 내모 병원균은 적극적으로 절지동물 호스트를 감염, 그들의 큐티클을 통해 자신의 몸을 식민지.
절지동물은 곰팡이 감염에 다른 반응을 가질 수 있습니다. 절지동물 면역 체계는 유머와 세포 반응으로 나뉩니다. 유머 반응은 헤마글루티네이션 공정과 항균 분자의 생산을 포함하지만, 혈구세포는 세포 면역 반응을 중재합니다.
절지동물 면역 반응에 대한 대부분의 연구는 곤충을 사용하여 보고되는 반면 진드기 반응은 덜 탐구된 채로 남아 있습니다. 또한, 병원균 접종과 진드기 혈청량 수집은 절지동물의 면역 반응을 더 잘 이해하는 데 필요한 기술이 거의 널리 퍼져 있지 않다. 따라서,이 비디오 주소 기술 \접종, 혈청량 수집 및 처리를 촬영하는 데 사용.
진드기 혈류량 수확은 세포 중단, 낮은 혈청계 값 획득 및 회복 된 세포의 낮은 농도와 같은 몇 가지 한계에 직면하기 때문에. 세포 구성 및 분석에 직접 감염됩니다. 진드기 수집 후, 여성을 씻어.
수돗물을 사용하고 500 밀리리터 유리 비커 수신자에 3 분 동안 0.5 %의 나트륨 hypochlorite 용액에 담급하십시오. 큐티클 위생을 위해, 20 명의 여성과 동질적인 그룹으로 여성을 분할합니다. 각 그룹의 세 복제가 수행되었습니다.
메타리슘 로버츠이 발아 과정에서 사용하였다. 플라스틱 파라핀 필름 표면에 5개의 마이크로리터 메타리슘 블라스트포레스 서스펜션의 액체에 추가합니다. 접종 과정을 가속화하기 위해 플라스틱 파라핀 필름 표면에 여러 기포를 추가할 수 있으며, 각 기포는 5개의 마이크로리터에 해당한다.
1밀리미터 초미세 인슐린 주사기와 0.3 밀리미터 바늘을 사용하여 서스펜션을 넣고 진드기에 접종하십시오. 그것을 사용하기 전에 주사기에서 모든 공기를 꺼내는 것을 기억하십시오. 비골과 카피쿨룸 사이의 진드기 여성에게 곰팡이 서스펜션 5 마이크로리터를 접종하십시오.
소량의 혈몰리프는 바늘 절개 후 프레임에 존재할 수 있다. 공기를 접종하지 않도록주의하십시오. 0.3 밀리미터 바늘에 결합 된 1 밀리리터 초미세 인슐린 주사기를 사용하여 다리 허벅지와 여성의 몸 사이에 곰팡이 현탁액을 가진 여성을 접종합니다.
전이균 블라스트포스포라접종이 다리 허벅지와 진드기 여성의 몸 사이에 수행되면 바늘 삽입 후 허벅지에 소량의 혈류가 존재할 수 있다. 공기를 접종하지 않도록주의하십시오. 날개 달린 주입세트의 고무 부분을 사용하여 0.3 밀리미터 모세관 튜브와 필터 팁을 사용하여 혈굴량 수집을 수행합니다.
0.3 밀리미터 바늘을 사용하여 여성 등쪽 표피를 방해하십시오. 중단 후 진드기 몸체의 동맥 부분에 부드러운 압력을 적용합니다. 중단 현장에서 거의 투명한 액체풀링을 관찰하십시오.
날개 달린 주입 세트의 고무 부분과 0.3 밀리미터 모세관 튜브에 결합 된 필터 팁을 통해 액체를 빨아 서 혈류를 수집합니다. 이 미드 구트를 방해하고 혈굴을 오염 시킬 수 있기 때문에 그것은 고정 하는 동안 거의 진드기의 시체를 누르지 마십시오. 부드러운 압력이 오염없이 유체를 추방 할 때까지 기다립니다.
진드기를 고정합니다. 앞다리 조각을 잘라냅니다. 하나 이상의 다리를 절단 할 수 있을 뿐만 아니라 동일한 다리는 한 번 이상 절단 될 수 있습니다.
진드기의 후방 신체 부위에 부드러운 압력을 가하십시오. 투명 액체 거품이 절단 측에 나타나모세피 튜브로 수집합니다. 진드기의 몸을 거의 누르지 마십시오, 그것은 중구를 방해하고 혈우경을 오염 시킬 수 있기 때문에 동원하는 동안.
부드러운 압력이 오염없이 유체를 추방 할 때까지 기다립니다. 혈굴량 수집 후, 이전에 30 마이크로 리터 프로테아제 칵테일과 82 마이크로 리터 식염수 버퍼로 가득 1.5 밀리터 마이크로 튜브에 입금. 혈굴량 컬렉션 전체에 걸쳐 얼음에 마이크로 튜브를 유지합니다.
혈청량 원심 분리 후 원심분리기 샘플과 혈구의 부드러운 펠릿이 형성될 것이다. 혈청량 정량화를 위해 마이크로튜브 내부의 총 부피를 계산하고 프로테아제 칵테일및 식염수 버퍼의 양을 할인하여 얻은 혈류량을 정량화하십시오. 상체 세포없는 혈청을 조심스럽게 제거하고 세포를 부드럽게 다시 중단하십시오.
노이바우어 챔버에 다시 매달린 혈구 10마이크로리터를 배치하여 혈청을 정량화한다. 세포재현수의 경우 배양배지가 사용되었다. 진드기의 앞다리를 자르고, 진드기의 후방 신체 부위에 부드러운 압력을 가하고, 컷 부위에 투명한 액체 거품이 보이는 것을 관찰합니다.
깨끗한 현미경 슬라이드에 직접 혈류 강하를 적용합니다. 그 후 세포를 얼룩에 적절한 방법을 사용합니다. 다리 허벅지와 진드기 여성 몸 사이의 접종은 또한 미드구트와 말피기안 튜블러와 같은 진드기 내부 장기를 손상시킬 수 있습니다.
진드기 미드구트가 등막혈수집에서 바늘에 의해 중단되면 얻어진 유체는 빨간색이며 투명하지 않습니다. 이는 잘못된 혈몰리프 컬렉션을 나타냅니다. 이 경우 혈모 림프는 오염된 대로 폐기되어야 합니다.
혈굴림 오염은 진드기가 높은 병원체에 자연적으로 감염될 때, 또는 접종된 병원체에 기인한 죽음 과정 후에 마지막 단계에서 관찰될 수 있습니다. 등쪽 컬렉션 후 얻은 혈청량은 다리를 통해 컬렉션에서 얻은 부피보다 높다. 오염의 용이함에도 불구하고 첫 번째 수집 방법에서 더 높다.
혈구 농도도 등대 수집에서 상당히 높았다. 올바른 혈구 수집이 수행되면 좋은 얼룩을 얻을 수 있으며 염색 후 다른 혈구를 구별 할 수 있습니다. 이 비디오는 병원균, 특히 내모 병원성 곰팡이를 진드기로 접종하고 혈류를 수집하는 방법에 대한 정보를 제공했습니다.
여기에서 제시된 기술은 진드기 생리학, 진드기 병리학 및 진드기의 면역 반응에 관하여 연구를 위한 우리의 고전적인 단계에 있는 아주 낮은 기술 자원을 요구합니다. 절지동물 세포의 올바른 수확과 세포없는 혈청은 후속 연구를위한 신뢰할 수있는 정보를 제공하는 데 중요합니다. 이러한 이유로 이러한 기술의 실행에서 관찰되는 가장 일반적인 실수를 인식하는 것도 중요합니다.
또한, 이 연구의 제안은 얻어진 부피의 차이와 오염 확률을 고려하여 다리를 변형하거나 절단하여 혈청량 수집에 더 적합한 부위를 결정한다.
