우리는 플라스틱 내장 된 스텐트를 단면에서 우수한 기술 지원을 부인 안젤라 인트 감사합니다. 우리는 면역 염색에 전문적인 도움도 부인 로야 솔탄과 부인 안젤라 인트 감사합니다.

1. 스텐트 준비 및 주입 <ol><li> 스텐트 스트럿 (포트 웨인 금속, 캐슬, 아일랜드) 꼰 있었다 그리고 섬유 기술과 기계 공학, 독일에있는 RWTH 아헨 대학 (그림 1A)를위한 연구소에서 원하는 크기로 자른다. </li><li> 주입 전에 스텐트는 집게를 사용하여 2 센티미터의 실리콘 튜브로 전송해야하며, (그림 1A) 프런트 엔드를 언급 한 터미널 끝에서 2mm를 두었다. </li><li> 프런트 엔드는 이식에 대한 날카로운 팁을 보장하기 위해 비스듬히 절단해야합니다. </li><li> 주입하기 전에, 스텐트 미끄러짐을 보장하기 위해 충분 급수해야한다. </li></ol> 2. 스텐트 시술 <ol><li> 10-12주 세 남성 C57BL / 6 야생형 마우스, 25~27g 100 ㎎ / kg 케타민을 10 ㎎ / kg xylazine의 복강 내 주입하여 마취 있습니다. 적절한 anesthetization는 반사의 부족에 의해 수술을하기 전에 확인되고수염의 움직임. 마취, 마우스 눈 bepanthene 크림의 필름으로 덮여있는 동안 건조를 방지합니다. </li><li> 면도 복부 목 부분의 적절한 소독 후에 1 cm의 작은 중간 절개는 가위를 사용하여 입체 현미경 하에서 수행됩니다. 멸균 곡선 포셉 2 지방 기관을 분리 한 후, 왼쪽 경동맥은 기관과 함께 펄스 볼 수 있습니다. </li><li> 1 왼쪽 경동맥의 CM 및 분기는 무료로 준비해야합니다. 5 / 0 실크 실을 사용하여 1 매듭 좌측 경동맥 주위에 바인딩 될, 7 / 0 실크 스레드를 사용하여 2 매듭은 왼쪽 외부 경동맥 주위에 바인딩되며, 7 / 0 실크 실을 사용하여 1 매듭 바인딩됩니다 내부 경동맥 동맥의 주위에 (그림 1B). </li><li> 혈액의 흐름은 다음 단단히뿐만 아니라, 매듭 서라운드을 잡아 당겨 내 경동맥과 근위부 경동맥 동맥에 매듭을 바인딩하여 중단경동맥 동맥 ING. 배는 일반적으로 외부 경동맥 동맥 직선에하는 방식으로 수정되어야합니다. </li><li> 외 경동맥에 작은 절개 Vannas 가위를 사용하여, 근위 매듭 근처에 수행됩니다. 스텐트를 포함하는 실리콘 튜브는 가이드 와이어를 사용하여 앞의 날카로운 끝, 외 경동맥으로 도입된다. 스텐트가 원하는 위치에 도달 한 후 실리콘 관은 가이드 와이어를 통해 다시 뽑아 스텐트 (그림 1B)의 형상 메모리 확장을 할 수 있습니다. </li><li> 외 경동맥의 원위부 매듭하여 혈액의 흐름을 복원, 절개 및 내부 경동맥의 매듭 사이트를 제거 닫으려면 단단히 결합되어 있습니다. </li><li> 피부 절개는 3-4 미셸 봉합 클립과 미셸 forcep을 사용하여 종료됩니다. 마우스가 완전히 회복 될 때까지 붉은 빛 아래에 배치됩니다. 진통 치료가 필요하지 않습니다. </li><li>플라크는 1-3 주 후에 분석 할 수 있습니다. 다시 endothelialization을 연구하기 이전에 종료 시점이 필요합니다 (3-4 일)이다. 우리는 4 주이 외과 적 수술 후, 특히 소형 스텐트를 biofunctionalize 특정 코팅의 사용에 의해, neoangiogenesis는 표본의 약 30 %에서 발생하는 스텐트 우리의 모델에서 관찰했다. 이 서로 다른 메커니즘과 다른 병적 인 문제를 나타내는 함께, 개조 및 재생 공정의 뒷다리이다. 스텐트 시술 후 3 주 종료 시점이 neoangiogenesis의 발병에 의한 재생 효과와 혼합하지 도움이 될 것입니다 이러한 부작용을 기본 메커니즘 평활근 형성, 스텐트 내 협착 및 / 또는 분석에 집중합니다. </li></ol> 3. 플라크 형성 분석 <ol><li> 최종 시점에서, 동물은 100 ㎎ / kg 케타민을 10 ㎎ / kg xylazine의 복강 내 주입하여 마취 있습니다.적절한 anesthetization는 반사와 수염 운동의 부족으로 수술을하기 전에 확인됩니다. </li><li> 동물 intracardial 과다 출혈로 사망. 혈청은 추가 분석을 위해 수집됩니다. </li><li> 흉강을 열고 PBS는 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA) 솔루션 intracardial punction, 몸 살포를 통해 세척 후 5 분 동안 수행됩니다. 스텐트를 포함하는 왼쪽 경동맥은 해부 직접 4 % PFA 용액에 넣고 적어도 16 시간 나중에 플라스틱 embbeded 있습니다. </li><li> 50 μm의 두께 섹션은 보았다 다이아몬드 밴드를 사용하여 플라스틱 내장 샘플에서 수행됩니다. </li><li> 플라크의 크기를 측정하기 위해, Giemsa 염색이 수행됩니다. </li><li> 혈관의 스텐트 영역 내에 재 endothelialization의 비율을 분석, 폰 빌레 브란트 인자 (vWF가)에 대한 면역이 수행됩니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Ross, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+to+injury+and+atherogenesis.">Response to injury and atherogenesis.</a> Am. J. Pathol. 86, 675-684 (1977).</li><li>Virmani, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+the+vulnerable+plaque.">Pathology of the vulnerable plaque.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 47, 13-18 (2006).</li><li>Farb, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+acute+and+chronic+coronary+stenting+in+humans.">Pathology of acute and chronic coronary stenting in humans.</a> Circulation. 99, 44-52 (1999).</li><li>Weber, C., Noels, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis:+current+pathogenesis+and+therapeutic+options.">Atherosclerosis: current pathogenesis and therapeutic options.</a> Nat. Med. 17, 1410-1422 (2011).</li><li>Lenzen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+and+outcome+of+patients+with+established+coronary+artery+disease:+the+Euro+Heart+Survey+on+coronary+revascularization.">Management and outcome of patients with established coronary artery disease: the Euro Heart Survey on coronary revascularization.</a> Eur. Heart J. 26, 1169-1179 (2005).</li><li>Babapulle, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hierarchical+Bayesian+meta-analysis+of+randomised+clinical+trials+of+drug-eluting+stents.">A hierarchical Bayesian meta-analysis of randomised clinical trials of drug-eluting stents.</a> Lancet. 364, 583-591 (2004).</li><li>Wiviott, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intensive+oral+antiplatelet+therapy+for+reduction+of+ischaemic+events+including+stent+thrombosis+in+patients+with+acute+coronary+syndromes+treated+with+percutaneous+coronary+intervention+and+stenting+in+the+TRITON-TIMI+38+trial:+a+subanalysis+of+a+randomised+trial.">Intensive oral antiplatelet therapy for reduction of ischaemic events including stent thrombosis in patients with acute coronary syndromes treated with percutaneous coronary intervention and stenting in the TRITON-TIMI 38 trial: a subanalysis of a randomised trial.</a> Lancet. 371, 1353-1363 (2008).</li><li>van Werkum, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+coronary+stent+thrombosis:+the+Dutch+Stent+Thrombosis+Registry.">Predictors of coronary stent thrombosis: the Dutch Stent Thrombosis Registry.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 53, 1399-1409 (2009).</li><li>Finn, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+responses+to+drug+eluting+stents:+importance+of+delayed+healing.">Vascular responses to drug eluting stents: importance of delayed healing.</a> Arterioscler. Thromb Vasc. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+in-stent+stenosis+in+ApoE+knockout+mice:+insights+from+a+novel+mouse+model+of+balloon+angioplasty+and+stenting.">Increased in-stent stenosis in ApoE knockout mice: insights from a novel mouse model of balloon angioplasty and stenting.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27, 833-840 (2007).</li><li>Chamberlain, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+in+situ+stenting.">A novel mouse model of in situ stenting.</a> Cardiovasc. Res. 85, 38-44 (2010).</li><li>Rodriguez-Menocal, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+in-stent+restenosis.">A novel mouse model of in-stent restenosis.</a> Atherosclerosis. 209, 359-366 (2010).</li><li>Costa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalent+immobilization+of+antimicrobial+peptides+(AMPs)+onto+biomaterial+surfaces.">Covalent immobilization of antimicrobial peptides (AMPs) onto biomaterial surfaces.</a> Acta Biomaterialia. 7, 1431-1440 (2011).</li><li>Soehnlein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-derived+cathelicidin+protects+from+neointimal+hyperplasia.">Neutrophil-derived cathelicidin protects from neointimal hyperplasia.</a> Science Translational Medicine. 3, 103ra198 (2011).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

에서 스텐트 혈전증 및 재 협착의 위험을 줄이기 위해 약물 용출 스텐트, 동물 모델에서 스텐트의 쉬운 간단하고 접근 방법에 대한 새로운 코팅의 개발을 유지하기 위해 필요합니다. 마우스는 스텐트 시술과 같은 약물의 효율성 후 동맥 리모델링의 복잡한 메커니즘을 연구하는 이상적인 시스템을 제공합니다. 마우스의 스텐트 재 협착에 대한 기존의 모델은 어려운 높은 수술 기술을 필요로하고 출혈이나 마비 17-19로 합병증의 높은 위험을 의미한다. 예를 들어, 혈관 풍선 확장술 후받는 쥐 17의 경동맥에 스텐트 세그먼트의 이식 후 기증자 마우스의 흉부 대동맥에 스텐트 이식 모델에서, 병리 메커니즘의 연구는하지 않습니다 만 공여 물질에받는 반응에 의해,뿐만 아니라 바사 vasorum 및 외막의 대규모 손상에 의해 영향을. 스테인레스 강철 받침대의 주입풍선 확장술 후에 19 직접 복부 대동맥에 L 스텐트 때문에 arteriotomy의 사이트에서 복부 대동맥에서 혈전이나 출혈 후 뒷다리 마비의 높은 사망률 (35 %)가옵니다. 나선형 모양의 대퇴 동맥 18을 통해 복부 대동맥에 니티놀 스텐트 자기 확장의 주입은 맹목적으로 올바른 위치에 스텐트를 배치 대동맥 대퇴 동맥 분기를 따라 스텐트를 연출에 주로 인해 높은 수술 기술을 필요로한다. 이 절차는 뒷다리의 높은 대퇴 신경 손상의 위험 때문에 마비가옵니다. 이러한 절차와 비교할 때, 마우스 스텐트 우리의 모델은 높은 수술 기술이 필요하지 않습니다. 우리의 모델은 동맥 리모델링에 다른 약물 코팅의 효과를 분석하는 간단하고 쉽고 효율적인 방법을 제공, 스텐트의 게재는 광경에서 만들어, 손상 신경이나 다른 구조의 아무 리스크도 없습니다. COM복잡한 분자 메커니즘은 선박의 직접 접근에 의해뿐만 아니라, 마우스 경동맥 동맥 스텐트 우리의 모델에서 쉽게 조사뿐만 아니라 다른 녹아웃 쥐의 변종의 존재로 인해 수 있습니다. 한 가지 제한으로, 임상 절차와 비교, 우리의 모델은 건강한 쥐 / 동맥을 사용하고 (안 스텐트 내 재 협착 그러나 스텐트 내 협착) 기존의 플라크에 스텐트 수행하지 않습니다. 우리는 또한 스텐트 시술에 앞서 풍선 확장술을 수행하지 마십시오. 그러나 두 모델에서 혈관 벽의 대규모 피해로 인해, 수선 프로세스와 비슷합니다. 불행히도, 때문에 금속 파생 된 유물로, 내막 성장의 생체 모니터링은 초음파 나 컴퓨터 단층 촬영 등 기존의 영상 방법으로 할 수 없습니다. 또 다른 제한 요소는 금속 가공에 약간의 전문 지식을 필요로 금속 기반 스텐트의 얇은 절편입니다. 이 방법을 사용하여, 우리는 있었다호중구 지시가 LL-37 중재 치료 21 일 후 혈관 치유를 촉진하는 새로운 개념을 제공하는 재 협착 스텐트의 감소로 코팅 니티놀-스텐트를 소형화 biofunctionalized 것을 보여줄 수. 이러한 한계에도 불구하고,이 모델은, 지금까지, 가장 적합한 시스템으로하여 돈과 시간 절약, 동맥 리모델링하는 동안 분자 이벤트에 대한 스텐트 및 그 효과에 대한 새로운 약물 코팅을 조사하는 것 같다. 또한,이 모델은 쉽게 모든 치료적인 가설이 큰 동물이나 불쾌한 예상치 못한 효과를 방지하기 위해 인체에 적용하기 전에 검증 할 수 있도록, 인체에 더 유사한 햄스터에 적용 할 수 있습니다.

죽상 경화증의 진행으로 인한 심혈관 질환은 선진국에서 사망의 주요 원인입니다. 죽상 경화증은 관상 동맥을 통해 혈액의 흐름에 영향을 미치는 혈관의 루멘으로 확장 플라크의 형성의 결과로 혈관 내피 손상 1 혈관 벽의 초점, 염증 석면 증식 반응이다. 염증 플라크 2의 얇은 섬유 캡의 파열 심근 경색 결과의 75 % 이상. 이 합병증은 치명적일 수 있기 때문에, 스텐트 시술과 경피적 (관상 동맥) 성형술 (PTCA) 현재의 의료 관행의 첫 번째 선택 치료되었다. 이 방법은 좁아진 관상 동맥의 팽창하므로 ​​혈액의 흐름을 복원 할 수 있습니다. 동시에, 그것은 내피 세포와 혈관 벽의 3 정도 부상의 원인이됩니다. 그러나,이 치료의 장기적인 효과는 과도한 동맥 remode에 의해 제한됩니다링 및 재 협착 4. 스텐트의 고용에 의해, PTCA는 급성 혈관 폐쇄 후 5 시술을 허용하는 복잡한 병변의 치료에 더 효과적이되었다. 이 방법은 10 % 미만 6 스텐트 내 재 협착의 발생을 감소시킨다. 이러한 혜택 옆에, 관상 동맥 재관류 술이 첫 번째 선택 치료도에서 스텐트 혈전증 및 재 협착의 생명을 위협하는 위험을 부담. 에서 스텐트 혈전증은 혈소판 부상 사이트에 섬유소의 다량 부착 한 다음 용기의 드 endothelialization에 의해 발생합니다. 환자의 26 %는 스텐트 내 혈전증과 심근 경색 7의 63 % 다이로부터 고통. 재 협착은 내막 증식 (마이그레이션 및 증식 혈관 평활근 세포 (VSMC), 세포 외 기질 (ECM)의 증착 및 리모델링 관련, 혈관 벽에 기계적 손상 후 상처 치유의 과정을 말합니다용기. 자주 침략 재 개입의 스텐트 혈전증 및 재 협착으로 인해 심각하게 좁혀 동맥 경화성 혈관을 dilatate 할 필요가됩니다. 에서 스텐트 혈전증을 방지하기 위해 항 혈전 약물의 장기 치료가 필요하다 8. 재 협착을 방지하기 위해 약물 용출 스텐트의 새로운 세대는 몇 달 9,10을위한 폴리머 코팅에서 면역 억제제 (예 :시 롤리 무스, 에베로 리무스, 조타 롤리 무스) 및 안티 - 암 약물 (예 : 파클리탁셀)과 항 증식 성 에이전트를 용출. 이 약은 평활근의 형성과 재 협착을 감소하지만, 그들은 억제 다시 endothelialization로에서 스텐트 혈전증의 위험을 유지합니다. 동맥 손상 후 내피 세포 구획의 유지 보수 혈전 합병증을 예방하는 것이 필수적입니다. 생리적 조건, 인간의 내피 세포는 작은 회전율 11를 보여줍니다. 회지 이하ogical 조건은, 그러나, 내피 무결성이 성숙 내피 세포를 둘러싼 내피 전구 세포 (EPCs) 순환하여 신속한 복구가 12,13 필요합니다, 그래서 손상된다. 큰 동물 14-16 또는 마우스 대동맥 동맥에 이러한 복잡한 분자 메커니즘의 연구는 제한된 데이터에게 17-19를 제공하는 매우 어려운 절차입니다. 에서 스텐트 혈전증 및 재 협착 새로운 모델을 줄이기 위해 새로운 스텐트 코팅의 효율성을 테스트하려면 필수적입니다. 니티놀 때문에 성공적으로 임상 사용의 베어 메탈 (bare-metal) 스텐트로 사용되는 자사의 높은 탄성, 형상 기억 효과와 환자의 좋은 내성의 스텐트을위한 이상적인 플랫폼을 나타냅니다. 이 합금은 20 코팅 쥐의 경동맥에 이식 할 수있는 500 μM의 외부 직경을 가진 소형 스텐트를 생성하는 것이 가능했다. 마우스 C는 소형 니티놀 스텐트의 개발arotid의 동맥 스텐트 삽입술에 의한 정확한 분자 메커니즘 연구를 허용하고 재 협착을 방지하기 위해 신속하고 효율적으로 다른 약물 코팅의 효과를 테스트 할 수있는 가능성을 제공합니다. 또한, 다른 녹아웃 쥐의 변종의 존재는 평활근의 성장과 스텐트 혈전증에 관련된 다른 분자의 역할을 명확히에 큰 이점을 나타냅니다.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of the reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nitinol-stents (self-made from nitinol-struts)</td>
			<td>Fort Wayne Metals, Castlebar, Ireland NiTi#1, superelastic, straight annealed, light oxide, diameter 500 &mu;m</td>
			<td>custom-made product</td>
			<td>Institute for Textile Technology and Mechanical Engineering</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicon tube</td>
			<td>IFK Isofluor, Germany</td>
			<td>custom-made product</td>
			<td>diameter 500 &mu;m, section thickness 100 &mu;m, polytetrafluorethylene catheter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZ/X9</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps</td>
			<td>FST, Germany</td>
			<td>91197-00</td>
			<td>standard tip curved 0.17 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine 10%</td>
			<td>CEVA, Germany</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine 2%</td>
			<td>Medistar, Germany</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthene</td>
			<td>Bayer, Germany</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>FST, Germany</td>
			<td>91460-11</td>
			<td>Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissor</td>
			<td>Aesculap, Germany</td>
			<td>OC 498 R</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5/0 Silk</td>
			<td>Seraflex</td>
			<td>IC 108000</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7/0 Silk</td>
			<td>Seraflex</td>
			<td>IC 1005171Z</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>guide-wire</td>
			<td>Abbott Vascular</td>
			<td>1001782-HC</td>
			<td>0.014-inch angioplastie guide-wire</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Michel suture clips</td>
			<td>Aesculap, Germany</td>
			<td>BN507R</td>
			<td>7.5 x 1.75 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Michel Forcep</td>
			<td>Aesculap, Germany</td>
			<td>BN730R</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of stent implantation in the carotid artery for the study of restenosis

지난 수십 년 동안 스텐트 개발 한 상당한 진전에도 불구하고, 심혈관 질환은 서구 국가에서 사망의 주요 원인이 남아 있습니다. 다른 약물 용출 스텐트의 개발에 의해 제공되는 혜택을 옆에, 관상 동맥 재관류도에서 스텐트 혈전증 및 재 협착의 생명을 위협하는 위험을 부담. 새로운 치료 전략에 대한 연구는 스텐트 재 협착 과정을 연구하는 적절한 방법의 부족에 의해 손상된다. 여기, 우리는 선박 개조 및 다른 약물 코팅의 효과의 분자 메커니즘 편리한 방법으로 공부를 할 수있는 가능성을 제공합니다 쥐 경동맥에 스텐트의 신속하고 접근 절차를 설명합니다.

<ol><li> 마우스의 왼쪽 경동맥에 소형 니티놀 스텐트 시술은 25 ~ 30 분을 소요하고 개입하는 동안 용기의 손상으로 주로 인해 10 %의 사망률을 보여줍니다. 더 나은 생존율 스텐트의 시간 (5 %의 사망률)에서 무게보다 25g을 가진 생쥐에서 관찰된다. 그러므로, 우리는 25~27g 사이 무게 이식 마우스에 대한 선택했다. 수술 후, 마우스, 2-5 분, 예를 들어 마비와 같은 육체적 인 장애, 내 마취에서 회복 관찰된다. 스텐트는 스텐트가 혈액의 흐름 (그림 1C)에 의해 탈구되지 않은 것으로 나타났다 후 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (마이크로 CT)은 영상 주일간 실시. 불행히도, 이러한 이미지의 평활근 형성의 분석은 금속 파생 된 유물 (그림 1D, 1E)로 인해 불가능합니다. </li><li> 우리는 즉시 스텐트 아래 용기의 unstented 영역의 혈관이나 혈관 손상이 관찰되지 않았다(그림 2A) 조직 학적으로하고 내피 세포의 특정 염색 (그림 2B, 반대로 마우스 CD31 항체)에 의해 감지. 더 나은 개요 섹션은 두 광자 레이저 스캐닝 현미경 (그림 2B, 2C)를 사용하여 검사 하였다. </li><li> 25-27g 사이의 무게 마우스로 : 스텐트 혈관에서 15 %의 영구적 인 팽창은 (동맥, 1,15:1 비 스텐트) 감지됩니다. 평활근 형성과 혈전 형성은 고전 학적 시약 염색 (예 : Hematoxilin - 에오신, Giemsa, Movat, Toluidin 파랑, 메이슨 - Trichrom - 골 트너, 그림 3A, 3B)에 의해 분석 할 수 있습니다. 얇은 및 실외 및 국제적가 더 이상 표시되지 않습니다 때문에, 플라크의 크기는 외부의 차이 내강 영역 (: 234566 ± 3315 μm의 2 내강 지역을 의미 : 12,036 ± 2,662 μm의 2 플라크 지역을 의미)로 계산 하였다. 외부 둘레는 (: 1799 ± 14 μm의 평균)를 측정 하였다. 의 분석세포의 구성, 단원에서는 특정 마커 deplastified과 스테인드해야합니다. 다시 endothelialization를 위해, 우리는 CY3 - 복합 항 CD31 항체를 사용 평활근 세포 증식 FITC가 결합 된 항-SMA 항체 (그림 3C)에 대한. 스텐트 시술 후 1 주간 : 다시 endothelialization은 총 내강면 (23.07 ± 3.14 % 평균)에 CD-31 양성 염색의 비율로 계산되었다. </li></ol> 물론, 특정 염색 무제한 각 실험실의 경험에 따라 가능합니다. myosin 중 SMCS의 더 나은 특성화 체인뿐만 아니라, 침투 세포의 분석 (단핵구, 림프구) 또는 다른 염증성 사이토 카인을위한 시약 염색의 분석은 연구의 목적에 따라 수행 할 수 있습니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50233/50233fig1highres.jpg" sr<html> C = &quot;/ files/ftp_upload/50233/50233fig1.jpg&quot;/&gt; 수술 그림 1. 도식 개요 (A). 혈액의 흐름은 확실히뿐만 아니라 경동맥을 둘러싼 매듭을 당겨 내 경동맥과 근위부 경동맥 동맥에 매듭을 바인딩하여 중단됩니다. 스텐트를 포함하는 실리콘 관은 외부 경동맥에 작은 절개를 통해 외부 경동맥에 도입된다. 스텐트가 원하는 위치에 도달 한 후 실리콘 관은 가이드 와이어를 통해 다시 뽑아 스텐트의 형상 메모리 확장을 할 수 있습니다. 외과 이식 (B) 후 1 주일 스텐트의 위치를 보여주는 마이크로 CT 이미지. 물질에서 파생 된 유물로 인해 평활근 성장의 분석 (C, D) 할 수 없습니다. 3fig2highres.jpg &quot;SRC =&quot;/ files/ftp_upload/50233/50233fig2.jpg &quot;/&gt; 그림 2. 선박의 Unstented 지역은 Toluidin 블루 (A)와 내피 특정 CD31 염색 (B, C)에서와 같이, 수술에 의해 영향을받지 않습니다. <img alt="그림 3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50233/50233fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50233/50233fig3.jpg" /> 그림 3. 플라크의 분석은 고전 학적 시약 염색 (예 : 메이슨 - Trichrom - 골 트너) (A)에 의해 수행 할 수 있습니다. 조직 혈전은 어떤 경우에는 혈관의 완전한 폐색이 (B) 관찰, 평활근 내부에 검은 얼룩이 섬유소 증착 의해 감지 할 수 있습니다. 다시 endothelialization (CY3, 빨강) 나 평활근 세포의 증식 (FITC, 녹색) 특정 마커를 사용하여 이중 면역 형광 염색으로 검출되었다.Counterstaining는 4 &#39;,6-diamidino-2-페닐 인돌 (DAPI, 파랑) (C)로 수행 하였다. 우리는 (오른쪽, 단일 화살표) 다시 endothelialization 완료되지 않은 내강에 비해 스텐트 스트럿의 완성 재 endothelialization (왼쪽, 이중 화살표)를 발견했습니다.

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A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

마우스 경동맥 동맥 스텐트 시술의 모델이 설명되어 있습니다. 다른 유사한 방법에 비해,이 절차를 편리하게 다른 약물 용출 스텐트 재 협착의 분자 메커니즘 혈관 벽의 반응에서 공부 할 수있는 가능성을 제공, 매우 빠른, 간단하고 액세스 할 수 있습니다.

재 협착의 연구에 대한 경동맥 스텐트 시술의 쥐과 모형

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

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Research

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Medicine

25.2K 조회수.  RWTH Aachen University. 마우스 경동맥 동맥 스텐트 시술의 모델이 설명되어 있습니다. 다른 유사한 방법에 비해,이 절차를 편리하게 다른 약물 용출 스텐트 재 협착의 분자 메커니즘 혈관 벽의 반응에서 공부 할 수있는 가능성을 제공, 매우 빠른, 간단하고 액세스 할 수 있습니다.

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Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

PTSD의, 신경 Hematologic, 그리고 행동 상관 관계를 누설하는 행위에 대해서는 동물 모델에서 생체

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

연구

의학

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel stenting are crucial for translational approaches1,2.
The commonly used animal models include mice, rats, rabbits, and pigs3-5. However, the translation of these models into clinical settings remains difficult, since those biological processes are already studied in animal vessels but never performed before in human research models6,7. In this video we demonstrate a new humanized model to overcome this translational gap. The shown procedure is reproducible, easy, and fast to perform and is suitable to study the development of intimal hyperplasia and the applicability of diverse stents.
This video shows how to perform the stent technique in human vessels followed by transplantation into immunodeficient rats, and identifies the origin of proliferating cells as human.

Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

This video shows a model to study the development of intimal hyperplasia after stent deployment using a human vessel (IMA) in an immunodeficient rat model.

인간 내유 동맥 (IMA) 이식과 Stenting : 인 Restenosis 스텐 트의 개발을 공부하는 인간 모델

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in peripheral arterial bypass surgery as well as in arteriovenous fistulas.1-5 The experimental procedure of vein graft interposition in the common carotid artery by using the cuff-technique has been applied in several research projects to examine the aetiology of neointimal hyperplasia and therapeutic options to address it. 6-8 The cuff prevents vessel anastomotic remodeling and induces turbulence within the graft and thereby the development of neointimal hyperplasia.
Using the superior caval vein graft is an established small-animal model for venous arterialization experiment.9-11 This current protocol refers to an established jugular vein graft interposition technique first described by Zou et al., 9 as well as others.12-14 Nevertheless, these cited small animal protocols are complicated.
To simplify the procedure and to minimize the number of experimental animals needed, a detailed operation protocol by video training is presented. This video should help the novice surgeon to learn both the cuff-technique and the vein graft interposition. Hereby, the right external jugular vein was grafted in cuff-technique in the common carotid artery of 21 female Sprague Dawley rats categorized in three equal groups that were sacrificed on day 21, 42 and 84, respectively. Notably, no donor animals were needed, because auto-transplantations were performed. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice. In addition, the graft patency rate was 60 % for the first 10 operated animals and 82 % for the remaining 11 animals. The blood flow at the time of sacrifice was 8&plusmn;3 ml/min. In conclusion, this surgical protocol considerably simplifies, optimizes and standardizes this complicated procedure. It gives novice surgeons easy, step-by-step instruction, explaining possible pitfalls, thereby helping them to gain expertise fast and avoid useless sacrifice of experimental animals.

Neointimal hyperplasia is the primary cause of stenosis in arterialized veins. We propose a new protocol whereby the right external jugular vein is grafted using the cuff technique in the common carotid artery of Sprague Dawley rats. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice.

쥐 온목 동맥에 개재 외부 경정맥 정맥 이식의 : 정교한 Microsurgical 기술을 교육

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. While these therapies lead to the rapid restoration of blood flow, these technologies remain limited by restenosis in the case of bare metal stents and angioplasty, or reduced healing and possibly enhanced risk of thrombosis in the case of drug eluting stents. A key pathophysiological mechanism in the formation of restenosis is intimal hyperplasia caused by the activation of vascular smooth muscle cells and inflammation due to arterial stretch and injury. Surgeries that induce arterial injury in genetically modified mice are useful for the mechanistic study of the vascular response to injury but are often technically challenging to perform in mouse models due to the their small size and lack of appropriate sized devices. We describe two approaches for a surgical technique that induces endothelial denudation and arterial stretch in the femoral artery of mice to produce robust neointimal hyperplasia. The first approach creates an arteriotomy in the muscular branch of the femoral artery to obtain vascular access. Following wire injury this arterial branch is ligated to close the arteriotomy. A second approach creates an arteriotomy in the main femoral artery that is later closed through localized cautery. This method allows for vascular access through a larger vessel and, consequently, provides a less technically demanding procedure that can be used in smaller mice. Following either method of arterial injury, a degradable drug delivery patch can be placed over or around the injured artery to deliver therapeutic agents.

We describe a surgical technique that produces wire injury in the femoral artery of mice to induce neointimal hyperplasia to serve as a model testing system for the perivascular delivery of therapeutic compounds for the inhibition of restenosis.

혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to atherosclerotic plaque development or the rupturing of established plaques, interrupts normal blood flow leading to various morbidities such as myocardial infarction and stroke. In the clinic endovascular procedures such as angioplasty are commonly performed to reopen the lumen. However, these treatments inevitably damage the vessel wall as well as the vascular endothelium, triggering an excessive healing response and the development of a neointimal plaque that extends into the lumen causing vessel restenosis (re-narrowing). Restenosis remains a major cause of failure of endovascular treatments for atherosclerosis. Thus, preclinical animal models of restenosis are vitally important for investigating the pathophysiological mechanisms as well as translational approaches to vascular interventions. Among several murine experimental models, femoral artery wire injury is widely accepted as the most suitable for studies of post-angioplasty restenosis because it closely resembles the angioplasty procedure that injures both endothelium and vessel wall. However, many researchers have difficulty utilizing this model due to its high degree of technical difficulty. This is primarily because a metal wire needs to be inserted into the femoral artery, which is approximately three times thinner than the wire, to generate sufficient injury to induce prominent neointima. Here, we describe the essential surgical details to effectively overcome the major technical difficulties of this model. By following the presented procedures, performing the mouse femoral artery wire injury becomes easier. Once familiarized, the whole procedure can be completed within 20 min.

The mouse femoral artery wire injury model of restenosis is technically challenging. In this protocol we show the key technical details essential for successfully performing wire injury to induce consistent&#160;neointima for studies of restenosis.

동맥 재 협착의 쥐 모델 : 대퇴 와이어 부상의 기술적 측면

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

세 쥐의 경동맥 폐색으로 영구 말초 중간 대뇌을 수행하면 두피 허혈 지속적인 장애를 연구하는

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves focal endothelial-selective transgenesis, thereby allowing an investigator to determine the biological roles of endothelial-expressed transgenes and to quantify the in vivo transcriptional activity of DNA sequences in large artery endothelial cells. The method uses surgical isolation of rabbit common carotid arteries and an arteriotomy to deliver a transgene-expressing viral vector into the arterial lumen. A short incubation period of the vector in the lumen, with subsequent aspiration of the lumen contents, is sufficient to achieve efficient and durable expression of the transgene in the endothelium, with no detectable transduction or expression outside of the isolated arterial segment. The method allows assessment of the biological activities of transgene products both in normal arteries and in models of human vascular disease, while avoiding systemic effects that could be caused either by targeting gene delivery to other sites (e.g. the liver) or by the alternative approach of delivering genetic constructs to the endothelium by germ line transgenesis. Application of the method is limited by the need for a skilled surgeon and anesthetist, a well-equipped operating room, the costs of purchasing and housing rabbits, and the need for expertise in gene-transfer vector construction and use. Results obtained with this method include: transgene-related alterations in arterial structure, cellularity, extracellular matrix, or vasomotor function; increases or reductions in arterial inflammation; alterations in vascular cell apoptosis; and progression, retardation, or regression of diseases such as intimal hyperplasia or atherosclerosis. The method also allows measurement of the ability of native and synthetic DNA regulatory sequences to alter transgene expression in endothelial cells, providing results that include: levels of transgene mRNA, levels of transgene protein, and levels of transgene enzymatic activity.

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

This method is to introduce a transgene into the endothelium of rabbit carotid arteries. Introduction of the transgene allows the assessment of the biological role of the transgene product either in normal arteries or disease models. The method is also useful for measuring activity of DNA regulatory sequences.

Vivo에서 토끼 일반적인 경 동맥 내 피에 유전자 이동

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, intimal hyperplasia, and atherosclerosis. The goal of this article is to demonstrate a method for placing bilateral venous interposition grafts in a rabbit, then transducing the grafts with a gene transfer vector that achieves durable transgene expression. The method allows the investigation of the biological roles of genes and their protein products in normal vein graft homeostasis. It also allows the testing of transgenes for the activities that could prevent vein graft failure, e.g., whether the expression of a transgene prevents the neointimal growth, reduces the vascular inflammation, or reduces atherosclerosis in rabbits fed with a high-fat diet. During an initial survival surgery, the segments of right and left external jugular vein are excised and placed bilaterally as reversed end-to-side common carotid artery interposition grafts. During a second survival surgery, performed 28 days later, each of the grafts is isolated from the circulation with vascular clips and the lumens are filled (via an arteriotomy) with a solution containing a helper-dependent adenoviral (HDAd) vector. After a 20-min incubation, the vector solution is aspirated, the arteriotomy is repaired, and flow is restored. The veins are harvested at time points dictated by individual experimental protocols. The 28-day delay between the graft placement and the transduction is necessary to ensure the adaptation of the vein graft to the arterial circulation. This adaptation avoids rapid loss of transgene expression that occurs in vein grafts transduced before or immediately after grafting. The method is unique in its ability to achieve durable, stable transgene expression in grafted veins. Compared to other large animal vein graft models, rabbits have advantages of low cost and easy handling. Compared to rodent vein graft models, rabbits have larger and easier-to-manipulate blood vessels that provide abundant tissue for analysis.

This method describes the placement of interposition vein grafts in rabbits, the transduction of the grafts, and the achievement of durable transgene expression. This allows the investigation of physiological and pathological roles of transgenes and their protein products in grafted veins, and testing of gene therapies for vein graft disease.

일반적인 경 동맥 중재 이식 정 맥 경에서에서 튼튼한 Transgene 식의 토끼 모델

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...