이 절차의 전반적인 목표는 상해 반응에 관련되되은 분자 기계장치를 공부하기 위하여 마우스에 있는 재회전 치료 후에 restenosis의 인간적인 상태를 모방하는 것입니다. 이러한 기술의 주요 장점은 매우 재현 가능하고 쉽게 수행할 수 있으므로 최소한의 경험을 가진 연구원이 작은 동물 모델에 방법을 적용할 수 있다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실의 포스트 독인 아델리나 쿠라즈(Adelina Curaj)가 될 것입니다.
고지혈증을 유도하기 위해, 수술 1주일 전과 죽상 경화성 플라크 분석전까지 6~8주 된 18~20그램 아포 녹아웃 마우스에게 아포겐성 식단을 먹인다. 수술 당일, 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인한 후, 복부 목 부위에 마취 된 마우스를 면도하고 베타딘으로 노출 된 피부를 소독하십시오. 기관지 위에 목의 중앙 분리부위에 있는 1센티미터 피부 절개를 만들고 기관 부위의 완전한 시야를 얻기 위하여 2개의 지방 바디를 분리합니다.
하나의 리트랙터를 사용하여 근육층을 열어 놓고, 경동맥을 노출시키고, 날카로운 곡면집삼을 사용하여 내부 및 외부 경동맥의 양면 영역이 보일 때까지 미주 신경 및 경정맥에서 동맥을 분리한다. 느슨하게, 대동맥 대동맥 근위아래 7센티미터 길이의 0-5 실크 봉합사를 놓고, 그 다음에 는 1.5센티미터 길이의 0-7 실크 봉합사를 외부 경동맥 주변에 느슨하게 배치하고, 1.5센티미터 길이의 0-7 실크 봉합루프를 이중으로 배치하였다. 내부 경동맥 아래에 1.5센티미터 길이의 0-7 실크 봉합사를 더 엽니다.
그런 다음 6시 위치에 머리를 가진 동물을 배치합니다. 즉시 내부 경동맥의 봉합봉 루프와 외부 경동맥의 단부 봉합사를 단단히 닫습니다. hemostat 집게를 사용하여 0-5 봉합사의 끝을 당겨 일반적인 경동맥을 통해 혈류를 중지하십시오.
작은 가위를 사용하여, 두 루프 사이의 외부 경동맥에 혈관 직경의 절반의 작은 동맥 절제술을 하고 절개를 통해 일반적인 경동맥에 0.9 %의 염화 나트륨을 떨어 뜨리는 14 인치 알코올 연마 유연한 가이드 와이어를 삽입합니다. Y 절개 시 동맥 분화를 피하려면 신중하게 연마된 가이드와이어를 사용하십시오. 혈관을 따라 와이어를 3번 회전하는 동안 와이어를 통과한 다음 외부 경동맥의 근접 루프를 단단히 닫고 일반 및 내부 경동맥 주위의 봉합사를 잘라 혈액 흐름을 복원하여 내피 성모를 얻습니다.
다음으로, 리트랙터를 제거하고 근육 층과 두 개의 지방 몸을 생리학적 위치로 되돌려 놓습니다. 금속 클립으로 피부를 닫은 다음 마우스가 적외선 아래에서 왼쪽에서 완전히 구부러지기 때까지 모니터링할 수 있도록 합니다. 네오티마 형성은 모바트 염색을 사용하여 평가될 수 있다.
70, 000 및 100, 000 미크론 제곱 사이를 다를 수 있는 총 플라크 크기는 외과 의사의 기술에 따라 적절한 소프트웨어를 사용하여 각 샘플에 대해 계산할 수 있습니다. 개발 된 플라크는 주로 배지에서 증식 및 이동 된 부드러운 근육 세포로 구성된 즉각적인 restenosis와 유사합니다. 매끄러운 근육 세포 함량은 플라크의 약 30~40%를 나타내며, 부상당한 혈관의 네오인티마 내에서 발견되는 대식세포는 전체 세포 수의 15~25%를 차지합니다.
재내피화는 일반적으로 3주 후에 80~90%에 이르며 4주 후에 거의 완료되어야 합니다. 개발 중 플라크 성장을 추적하기 위해 실험적 질문에 따라 와이어 부상 후 여러 시간 지점에서 분석을 반복할 수 있습니다. 마스터되면 제대로 수행되면 이 기술을 15분 만에 완료할 수 있습니다.
이 절차를 시도하는 동안, 수술 영역은 건조를 방지하고 와이어 조작을 쉽게하기 위해 지속적으로 수화해야한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.
