우리는 촬영하는 동안 도움이 조언과 도움을 오스만 Kaftanoglu 감사합니다. 우리는 통찰력있는 의견에 대한 익명의 검토 자에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 노르웨이의 연구위원회 (180504, 191699 및 213976을 부여), 마리 Curie/FP7 (프로젝트 REF. 238665), 노화 (보조금 NIA의 P01의 AG22500)에있는 국립 연구소와 퓨 자선 신탁에 의해 지원되었다.

1. 연대기 나이에서 노화 디커플링 이 절에서는 같은 연대 세 ( &quot;단일 연령대&quot;)와 둥지 꿀벌의 코호트를 공유 식별 개인의 코호트로 구성 더블 일대 식민지의 설정에 대해 설명합니다. 단일 연령대의 같은 세 사람은 결국 서로 다른 노화 역학과 다른 노동자 유형으로 구분됩니다 - 이러한 가속 기능 저하로 둔화와 초지 기계 꿀벌 간호사 꿀벌입니다. 모든 절차는 하나의 실험 집단에 대해 설명합니다. 우리는 그래서 콜로니 효과 (두 복제 설계)에 대해 제어 될 수있는 적어도 두 개의 콜로니에 대해 실험을 수행하지만 복제합니다 조언한다. <ol><li> 이중 코호트 식민지에 대한 하이브 상자를 준비 : 꿀이 두 음식 빗을받는 하나의 일반 하이브 상자, 꽃가루와 다른 음식 빗, 그리고 두 개의 빈 빗을 준비합니다. 3,000 개 이상의와 성관계 여왕뿐만 아니라 기증자의 식민지를 찾을 수 있는지 확인둥지 꿀벌. 두 나중에 소개합니다 (1.3). </li><li> 획득 및 유사 연대기 연령과 개인을 표시 : 등장 직전에 밀봉 무리와 빗를 수집합니다. 하나의 복제의 경우 3,000 ~ 5,000 덮인 무리 세포의 총 빗를 수집 할 전망이다. 각 모성 유전자형 (하이브 원)의 왜곡 분포를 방지하기 위해 적어도 세 가지 다른 하이브 소스에서 무리의 균형 금액을 사용 복제에 대 한. <ol><li> 60 % ~ 70 % 상대 습도 34 ° C로 설정 인큐베이터에 무리 빗 놓습니다. 새로운 종족 탈출 할 수없는 방식으로 빗을 저장해야합니다. </li><li> 꿀벌 이틀 동안 등장하자 흉부 (예 : 유니 POSCA, 미츠비시 연필 (주))에 작은 페인트 태그로 이러한 꿀벌을 표시합니다. 페인트 표시가 하나의 연령대 (출현 일)의 꿀벌을 확인하실 수 있습니다 및 기타 복제 식민지와 구별 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 나는의 일대를 포함하는 더블 일대 식민지를 설정dentified, 단일 연령 꿀벌 : 하루에 젊은 꿀벌이 표시되어있다가, 볼 ((. 토론의 제 1 절 비교), 그리고 이전에 제조 된 하이브 상자에이 표시되지 않은 꿀벌을 추가 기증자 식민지에서 약 2,500-3,000 둥지 꿀벌 수집 ) 1.1 단계. 후자의 사람들은 알 수없는 둥지 꿀벌 코호트를 구성합니다. <ol><li> 처음에는 여왕 케이지 (시판)에 국한됩니다 여왕을 추가합니다. 식용 사탕 (예 : Apifonda, Südzucker AG, 만하임 / Ochsenfurt의, 독일) 일벌 천천히 여왕을 해제 할 수와 케이지를 밀봉. </li><li> 하나의 연령대를 구성합니다 새로 등장하고 표시 꿀벌을 추가합니다. 이러한 꿀벌은 개인 전용으로 표시되고, 모든 다음 단계를위한 포커스 그룹이다. </li></ol></li><li> 발병을 채집하고 초지 표시 모니터링 : 발병과 단일 연령대의 간호사 - 투 - 초지 기계 전환의 역 동성을 평가하기 위해, 먹이를 찾아 다니는 활동 전자의 인구 통계 학적 발전을 모니터링각 식민지에 대한 매우 다른 일. 식민지 (그림 1)을 설정 한 후 5 일 카운트 시작합니다. <ol><li> 고정 된 시간에서 3 × 20 ​​분의 관찰 기간 내 항공편 (입구 카운트) 꼴에서 돌아 꿀벌의 총 수를 계산합니다. (토론 참조) 방향 항공편의 기간 동안 꿀벌 계산하지 않도록해야합니다. </li><li> 입구 카운트 (&gt; 100 입구 카운트 / 일) 개시 상당한 꼴 활동을 표시하는 경우, 초지 마킹 시작합니다. 이렇게하려면, 하나의 연령대 (단일 표시 개인)의 초지는 처음 꼴 항공 돌아온 두 번째 페인트 표시가 나타납니다. 이 페인트 표시가 발병을 채집의 날을 지정하고, 이후 각 초지 기계의 꼴 나이를 식별 할 수 있습니다. </li><li> 꿀벌의 충분한 숫자가 표시 될 때까지 매일 표시를 반복합니다. 이러한 꿀벌은 일반적으로 23 일 후에, 숙성 된 후 표시 초지의 충분한 수를 추정하는, 더 이상 50-10 % 이상의 회수율을 기대할꼴. </li></ol></li><li> 샘플링 : 모든 초기 표시 꿀벌이 비슷한 연대 기적 나이를 가지고 있기 때문에 초지가 ≥ 14 일 동안 채웠을 때, 간호사 및 이전 초지의 나이와 일치하는 그룹이 동시에 수집 할 수 있습니다. <ol><li> 단일 마크 간호사 꿀벌은 벌통에서 수집, 간호 행동 (오픈 브루 셀에 내려 놓고 머리와 먹이와 애벌레의 청소)에 의해 식별됩니다. </li><li> 매일 먹이를 찾아 다니는 활동을 시작하기 전에 두 번 표시 일벌은 벌통에서 수집됩니다. </li><li> 충분한 환기를 제공 케이지 (튜브, 박스)에 꿀벌을 수집하고, 추가 처리 될 때까지 어두운 유지. 또한, transcriptomic, 성적인 또는 프로테오믹스 연구에 직접 액체 질소에 동결 꿀벌 웁니다. 모든 테스트 그룹에서 개인의 균형 번호를 수집하고 식민지를 복제합니다. </li></ol></li></ol> 2. 하이브의 인구 &lt;변경 속도가 느려 노화와 노동자에 대한 신속한와 노동자의 반전/ P&gt; 이 섹션 둔화 노화 (간호사 꿀벌) 근로자에​​ 대한 가속 노화 (초지) 근로자의 반전이 수행되는 방법에 대해 자세히 설명. 초지는 일반적으로 무리 케어에 종사 간호사 꿀벌의 부족을 경험 할 때 이러한 행동 반전은 유도된다. 간호사 꿀벌 분획 한 하이브 ( &quot;간호사 유래&quot;) 및 초지 기계의 일부와 또 다른 하나는 ( &quot;초지 기계 유래&quot;) : 복귀 절차는 하나의 식민지가 두 두드러기로 복제 분리됩니다. 성공적으로 반전, 플라스틱 가능한 증상과 반대로 노화 복귀 노동자, 지속적인 기계, 지속적인 간호사 꿀벌과 신입 초지와 하나의 연령대에서 공부 할 수 있습니다 후. 이전과 같이, 하나의 연령대가 아닌 정체 불명의 둥지 꿀벌의 일대의 확인 꿀벌, 실험 포커스 그룹을 구성한다. <ol><li> 준비 : 이전 섹션에 설명 된대로 간호사 (싱글 표시) 및 초지 (더블 표시)와 두드러기 복제는 사용할 수 있습니다. 복귀가 완료된 후 충분한 검색을 보장하기 위해 복제 식민지 미만 500 표를 초지로의 복귀를 시작하지해야합니다. <ol><li> 회복 후 검사 그룹의 안전 확인을 위해 원래 하이브 전체 초지 기계의 인구가 복귀하기 전에 전원 표시되어 있습니다하는 것이 중요합니다. 다음 절차는 하나의 복제에 대해 설명합니다. </li><li> 복귀 전날, 초지 기계 파생 하이브에 대한 하나의 추가 하이브 상자 (단계 1.1 참조) 준비합니다. 기증자 하이브에서 두 왕비와 두 종족의 빗을 찾습니다. 실험 식민지로 전송하기 전에이 빗에서 모든 성인 꿀벌을 닦아내. 하나 갇힌 여왕 (단계 1.3 참조) 한 무리 빗 원래 하이브 상자에 여왕과 무리 빗을 대체합니다. 여왕과 무리 빗의 다른 세트는 새로운 하이브 상자 다음날 사용됩니다. 모두 원본과 새로운 하이브가 있는지 확인하는 것이 좋습니다 새로운 종족 빗과 외계인 여왕의 유사 할당 분리 초지와 간호사의 동일하게 경험 하이브 큐 ( &quot;하이브 냄새&quot;)을 변경합니다. </li></ol></li><li> 복귀 : 아침에 바로 복귀하기 전에, 초지 기계에서 파생 된 부분을 수신 할 새 상자에 갇힌 여왕과 무리 빗을 추가합니다. 피크 먹이를 찾아 다니는 시간이 시작될 때까지 기다립니다. 그런 다음 적어도 100m 거리에 원래 위치에서 표시 초지와 간호사 꿀벌 원래 식민지를 이동합니다. <ol><li> 원래 위치에서 무리 만 여왕 초지 기계 파생 하이브의 새로운 상자를 설정합니다. </li><li> 일벌은 탈구 원래 하이브 상자를두고, 원래의 위치로 다시 머리 것입니다. 초지가 둥지 꿀벌의 초지 기계 인구의 분리를 완료하기 위해 다음을 달성하기 위해 2 시간 동안 원래 위치로 복귀 할 수 있습니다. </li><li> 그런 다음, 분리를 종료 원본을 닫고, 지금 하이브를 &quot;간호사 유래&quot;, 최소 3 km 거리 양봉장에 전송합니다. </li></ol></li><li> 성공적인 사회 작업에 대한 하이브 유지 보수 및 모니터링반전 : 건강, 오픈 무리 정기적으로 실험 두드러기를 확인합니다. <ol><li> 식민지 조작 후 첫 일 동안 잠재적 인 병원체의 부하를 줄이기 위해 무인 죽은 무리를 교체합니다. </li><li> 복귀 실험 (그림 2) 완료 될 때 빗이 교체 될 때 또는 다시이 도입되기 전에 무리 빗의 사진을 촬영하고, 초지 기계 파생 하이브에서 성공적으로 반전의 유효성을 검사합니다. 이전에 상한선이 무리와 함께 오픈, 라이브 무리와 지역 초지 기계 파생 식민지에서 간호 활동의 믿을 수있는 마커입니다. </li></ol></li><li> 샘플링 : 사회 반전을 동반 생리 효과 3~8일 초지와 간호사 후 검출 할 수있다을 분리 하였다. <ol><li> 우리는 반전이 시작된 후 팔일 모든 테스트 그룹, 즉 복귀 노동자와 계속 초지 (초지 기계 파생 하이브),뿐만 아니라 계속 간호사와 새로 영입 초지 (간호사 파생 하이브를) 샘플링 조언한다. </li><li> 안부단계 1.5에 설명 된대로 lect 샘플. </li></ol></li></ol> 3. 리포 푸신의 정량화하여 작업자 형 특정 세포 노화 패턴 분석 리포 푸신은 세포 노화의 보편적 인 바이오 마커입니다. 고유 축적 제품으로, 리포 푸신의 특정 형광도는 (방출 최대 = 530-650 nm의) 검출 18 사용할 수 있습니다. <ol><li> 해부 및 고정 : 움직임까지 얼음에 칠 꿀벌, 제거하고 원하는 조직 샘플을 해부하다. <ol><li> 4 ℃에서 하룻밤 배양을 위해, 정착에 (산도 7.2 인산염 완충 식염수, PBS에 4 % 파라 포름 알데히드)을 전송 </li><li> PBS에서 샘플을 3 번 씻으십시오. </li></ol></li><li> 조직 처리 및 설치 : 진동 블레이드 마이크로톰, 예를 들면 라이카 VT 1000S (라이카 생물계, Nussloch, 독일)를 사용하여 예를 들어, 더 이상 40 ㎛ 이상의 두께 섹션으로 조직 샘플을 잘라. <ol><li&gt; 청소를 들어, 30 % 글리세롤 (PBS)에서 하룻밤 조직 섹션을 품어, 50 % 글리세롤 (PBS)의 또 다른 2 시간. </li><li> 50 % 글리세롤 (PBS)에서 현미경 슬라이드에 섹션을 탑재합니다. 장기 저장 씰 커버 매니큐어 전표. </li></ol></li><li> 이미지 수집 : 리포 푸신를 감지하기 위해, 우리는 λ = 514, 561nm 또는 여기 비슷한을 가진 레이저 라인을 제공하는 레이저 스캐닝 공 초점 현미경을 사용하여 제안하고, 검출기의 대역폭이 570-650 nm의 설정으로. <ol><li> 리포 푸신의 더 나은 식별을 위해, 두 번째 채널을 포함하고, 짧은 파장의 스펙트럼에서 동시 검사를 수행 (여기 = 405 nm의; 방출 = 410-450 nm의). 긴 파장 채널 인해 autofluorescent 기관 및 기타 비 과립 구조로 세분화 리포 푸신를 모두 공개뿐만 아니라, 불특정 &quot;배경&quot;합니다. 둘째로, 더 짧은 파장 채널은 불특정 형광도를 공개 아니지만 리포 푸신 것이다. 따라서, 리포 푸신 식별 facili이 될 수 있습니다<html> 둘 중 하나만 리포 푸신 특정 형광으로 과립을 공개, 두 채널의 신호를 비교하여 tated. </li><li> 고해상도 이미지의 획득은 40X 배율 이상, 1.25 이상, 바람직하게 개구 수 대물를 사용. 스캔 이미지는 약 100 × 100 × 10 μm의 3 차원으로 스택. 모든 개인과 조직 샘플은 여러 이미지 스택으로 표시해야합니다. </li><li> 기술적 편차로 인한 인트라 개인과 개인간 편차를 줄이기 위해 항상 레이저 출력 및 검출 감도를 일정하게 유지. </li><li> 하루 하루의 기술 변화에 의해 편견을 줄이기 위해 몇 가지 검사 각 세션에서 모든 테스트 그룹의 동일한 샘플 번호를 검색합니다. </li></ol></li><li> 이미지 처리 : 현미경 이미지 스택의 고급 처리 할 수​​있는 모듈과 소프트웨어 패키지를 사용하여, 예를 들어 ImageJ에 (건강, 베데스다, 메릴랜드, 미국의 미국 국립 연구소,gej.nih.gov / IJ / &quot;대상 =&quot;_blank &quot;&gt; http://imagej.nih.gov/ij/). <ol><li> 3D 이미지 스택의 각 차원의 최대 투사를 생성합니다. </li><li> 고주파 노이즈를 감쇠하고, 리포 푸신 과립의 크기와 구조를 보존하기 위해 적당한 커널 크기가 가우스 필터를 적용한다. </li><li> 리포 푸신의 식별 (단계 3.2 참조) 용이하게하기 위해 두 색상 채널을 병합합니다. </li></ol></li><li> 이미지 분석 : 정량 단계를 수행하는 주체가 그룹 ID를 테스트 할 장님이 될 것이라고 확신합니다. <ol><li> 모든 이미지에 대해 먼저 관련 구조를 포함하고, 다른 이미지에서의 ROI와 유사한 크기를 가지고 관심 (ROI)의 영역을 선택합니다. </li><li> 그런 다음 각 ROI를 나타내는 리포 푸신 과립의 원하는 번호를 선택합니다. ROI 내에 리포 푸신 과립을 선정 할 때, 다음과 같은 규칙의 애플리케이션은 주관적인 바이어스를 감소시킬 것이다. <ol><li> 첫 번째 granu을 선택하기위한 일관성있는 위치를 선택합니다르. 이것은 예를 들어, ROI의 가장 왼쪽 가장자리와 가장자리에 가까운 과립이 항상 우선 선택 될 것 일 수있다. </li><li> 다른 후 하나는, 과립 이전 선택 (다음 이웃)에 가장 가까운 것을 선택된다. </li><li> 다음 이웃을 선택할 경우에만 이전 선택에서 바로 검색하고, 예를 들어, 하나의 방향으로 이동한다. 이 규칙은 선택이 밀집 과립 가끔 클러스터에 의해 지배되는 것을 방지 할 수 있습니다. </li><li> 선택이 완료되면, 각각의 과립 영역을 요약하고 측정함으로써 각 리포 푸신 입자의 크기를 평가. 다른 테스트 그룹의 사람들을 비교하는 적절한 통계 테스트를 사용합니다. </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Munch, D., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+curious+case+of+aging+plasticity+in+honey+bees.">The curious case of aging plasticity in honey bees.</a> FEBS Lett. 584, 2496-2503 (2010).</li><li>Buffenstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negligible+senescence+in+the+longest+living+rodent,+the+naked+mole-rat:+insights+from+a+successfully+aging+species.">Negligible senescence in the longest living rodent, the naked mole-rat: insights from a successfully aging species.</a> J Comp Physiol B. 178, 439-445 (2008).</li><li>Parker, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+social+insects+telling+us+about+aging?.">What are social insects telling us about aging?.</a> Myrmecological News. 13, 103-110 (2010).</li><li>Seeley, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Wisdom of the Hive. , (1995).</li><li>Amdam, G. V., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulatory+anatomy+of+honeybee+lifespan.">The regulatory anatomy of honeybee lifespan.</a> J Theor Biol. 216, 209-228 (2002).</li><li>Amdam, G. V., Norberg, K., Hagen, A., Omholt, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+exploitation+of+vitellogenin.">Social exploitation of vitellogenin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 1799-1802 (2003).</li><li>Guidugli, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitellogenin+regulates+hormonal+dynamics+in+the+worker+caste+of+a+eusocial+insect.">Vitellogenin regulates hormonal dynamics in the worker caste of a eusocial insect.</a> FEBS Lett. 579, 4961-4965 (2005).</li><li>Amdam, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+reversal+of+immunosenescence+in+honey+bee+workers.">Social reversal of immunosenescence in honey bee workers.</a> Exp Gerontol. 40, 939-947 (2005).</li><li>Seehuus, S. C., Norberg, K., Gimsa, U., Krekling, T., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+protein+protects+functionally+sterile+honey+bee+workers+from+oxidative+stress.">Reproductive protein protects functionally sterile honey bee workers from oxidative stress.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 962-967 (2006).</li><li>Scheiner, R., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+tactile+learning+is+related+to+social+role+in+honeybees.">Impaired tactile learning is related to social role in honeybees.</a> J Exp Biol. 212, 994-1002 (2009).</li><li>Behrends, A., Scheiner, R., Baker, N., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+aging+is+linked+to+social+role+in+honey+bees+(Apis+mellifera.">Cognitive aging is linked to social role in honey bees (Apis mellifera.</a> Exp Gerontol. 42, 1146-1153 (2007).</li><li>M&#252;nch, D., Baker, N., Kreibich, C. D., Braten, A. T., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+the+laboratory+and+during+free-flight:+old+honey+bees+reveal+learning+and+extinction+deficits+that+mirror+mammalian+functional+decline.">In the laboratory and during free-flight: old honey bees reveal learning and extinction deficits that mirror mammalian functional decline.</a> PLoS One. 5, e13504 (2010).</li><li>Vance, J. T., Williams, J. B., Elekonich, M. M., Roberts, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+age+and+behavioral+development+on+honey+bee+(Apis+mellifera)+flight+performance.">The effects of age and behavioral development on honey bee (Apis mellifera) flight performance.</a> J Exp Biol. 212, 2604-2611 (2009).</li><li>Dukas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+rates+of+honey+bees+in+the+wild.">Mortality rates of honey bees in the wild.</a> Insect Soc. 55, (2008).</li><li>Behrends, A., Scheiner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Learning+at+old+age:+a+study+on+winter+bees.">Learning at old age: a study on winter bees.</a> Front Behav Neurosci. 4, 15 (2010).</li><li>Huang, Z. -. Y., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honeybee+colony+integration:+Worker-worker+interactions+mediate+hormonally+regulated+plasticity+in+division+of+labor.">Honeybee colony integration: Worker-worker interactions mediate hormonally regulated plasticity in division of labor.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 89, 11726-11729 (1992).</li><li>Huang, Z. Y., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+honey+bee+division+of+labor+by+colony+age+demography.">Regulation of honey bee division of labor by colony age demography.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 39, 147-158 (1996).</li><li>Double, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comparative+biology+of+neuromelanin+and+lipofuscin+in+the+human+brain.">The comparative biology of neuromelanin and lipofuscin in the human brain.</a> Cell Mol Life Sci. 65, 1669-1682 (2008).</li><li>Fonseca, D. B., Brancato, C. L., Prior, A. E., Shelton, P. M., Sheehy, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+rates+reflect+accumulating+brain+damage+in+arthropods.">Death rates reflect accumulating brain damage in arthropods.</a> Proc Biol Sci. 272, 1941-1947 (2005).</li><li>Baker, N., Wolschin, F., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+learning+deficits+can+be+reversible+in+honeybees+Apis+mellifera.">Age-related learning deficits can be reversible in honeybees Apis mellifera.</a> Exp Gerontol. 47, 764-772 (2012).</li><li>Capaldi, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+orientation+flight+in+the+honeybee+revealed+by+harmonic+radar.">Ontogeny of orientation flight in the honeybee revealed by harmonic radar.</a> Nature. 403, 537-540 (2000).</li><li>Marco Antonio, D. S., Guidugli-Lazzarini, K. R., do Nascimento, A. M., Simoes, Z. L., Hartfelder, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-mediated+silencing+of+vitellogenin+gene+function+turns+honeybee+(Apis+mellifera)+workers+into+extremely+precocious+foragers.">RNAi-mediated silencing of vitellogenin gene function turns honeybee (Apis mellifera) workers into extremely precocious foragers.</a> Naturwissenschaften. 95, 953-961 (2008).</li><li>Whitfield, C. W., Cziko, A. -. M., Robinson, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiles+in+the+brain+predict+behavior+in+individual+honey+bees.">Gene expression profiles in the brain predict behavior in individual honey bees.</a> Science. 302, 296-299 (2003).</li><li>Schmidt, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attraction+of+reproductive+honey+bee+swarms+to+artificial+nests+by+Nasonov+pheromone.">Attraction of reproductive honey bee swarms to artificial nests by Nasonov pheromone.</a> Journal of Chemical Ecology. 20, 1053-1056 (1994).</li><li>De Moraes, R., Bowen, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+cell+death+in+the+hypopharyngeal+gland+of+the+honey+bee+(Apis+mellifera+L).">Modes of cell death in the hypopharyngeal gland of the honey bee (Apis mellifera L).</a> Cell Biol Internat. 24, 737-743 (2000).</li><li>Sheehy, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+flow-cytometric+method+for+quantification+of+neurolipofuscin+and+comparison+with+existing+histological+and+biochemical+approaches.">A flow-cytometric method for quantification of neurolipofuscin and comparison with existing histological and biochemical approaches.</a> Arch Gerontol Geriatr. 34, 233-248 (2002).</li><li>Hsieh, Y. S., Hsu, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honeybee+trophocytes+and+fat+cells+as+target+cells+for+cellular+senescence+studies.">Honeybee trophocytes and fat cells as target cells for cellular senescence studies.</a> Exp Gerontol. 46, 233-240 (2011).</li><li>Wolschin, F., Munch, D., Amdam, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+proteomic+analyses+reveal+regional+brain+differences+during+honeybee+aging.">Structural and proteomic analyses reveal regional brain differences during honeybee aging.</a> J Exp Biol. 212, 4027-4032 (2009).</li></ol>

우리는 공개 아무것도 없어.

우리는 여기에서 이전에 설명 8,16,17,19,20 접근 채택하고, 꿀벌 유연한 노화 연구를 촉진하는 하나의 워크 플로우에 통합. 우리의 목표는 관련 샘플 자료를 얻기 위해 설정하는 표준화 된 도구를 사용하여이 분야에 초보자 과학자를 제공하고, 다른 연구 팀 간의 실험 재현성을 개선하는 것입니다. 우리의 절차를 단순화하고 (예 : 8에 대한 비교) 이전 설명과 특수 장비를 필요로하지 ...

높은 사회적 동물의 복잡한 식민지 구조는 생식 계급의 상호 작용을 통해 유지되고, 다른 사회 작업 행동과 일반적으로 비 재생 노동자의 도우미 계급. 다른 노동자에 특정 생리 학적 적응은 별개의 SIB 관리 동작을 가능하게하고, 또한 극단적 인 수명의 차이로 연결되어 있습니다. 꿀벌과 두더지 쥐 사회성이 가속 무시할 또는 1-3 노화 반전의 패턴에 연결하는 방법을 연구하는 가장 좋은 개발 동물 모델을 나타냅니다. 꿀벌 식민지에서, 하나의 알을 낳는 여왕은 음식의 무리, 사료 경향이 노동자의 수천에 의해 지원되고, 체온 조절이나 위생 행동 4를 지키고에 종사. 이 노동자 중 극히 단명 기계, 중간 간호사 꿀벌, 및 긴 수명과 겨울 (diutinus) 꿀벌입니다. 개인은, 그러나, 영구적이에요 특정에 바인딩되지 않습니다rker 형,하지만 유연한 행동 개체 발생을 표시 : 그들은 ( &quot;시간 카스트&quot;) 또 다른 하나의 사회 작업 동작에서 변경합니다. 풋내기 꿀벌은 결국 외부 꼴로 변경할 수있는, 무리 경향 간호사 꿀벌을 변경할 수 있습니다. 그러나 풋내기 둥지 꿀벌은 긴 수명 겨울 꿀벌로 변환 할 수 있으며, 수명이 짧은 초지도 일반적으로 더 이상 수명이 간호사로 되돌릴 수 있습니다. 극단적 인 (겨울 꿀벌) 및 중간 (간호사 꿀벌) 수명을 가진 근로자는 풍부한 자원과 식량 생산 및 저장 기관을 잘 개발 - (1,5 검토) 수명이 짧은 초지에 반대. 그러나, 개별 수명의 규정이 개인의 자원 균형 간단한 변경을 넘어 것이이 같은 젤리 생산 6, 호르몬 제어 7, 면역과 비 재생 노동자 계급의 다양한 적응 기능이 난황 단백질에 대한 연구에 의해 제안 8 항산화 방어 9. F의 패턴후각 설립하고, 다른 뇌 모터 기능 10-13 등 unctional 감소 (노화) 노동자 중 거울 수명 격차. 수명이 긴 겨울 꿀벌 (15)의 검출 감소 (무시할 노화)의 부족과 반대로 특히, 꼴의 두 주 후 학습 기능의 상당한 감소, 초지 14에서 비슷한 사망률의 진행을 일치합니다. 우리는 모니터링 및 노화 형 전환에게 8,16,17 조작을 허용 설립 실험 패러다임에 적응 유연성 노화의 분자 지문을 식별합니다. 연대기 나이와 노화에 근로자 형 특정 사회적 행동의 효과를 분리 할 수​​있는 샘플을 구하는 방법 1 세부 사항을 실험. 실험 2는 둔화 노화 역학 간호사 꿀벌에 가속과 초지의 역전을 설명합니다. 실험 3 anatomica에 의해 세포 노화의 영향을 프로빙에 대한 접근 방식을 제공합니다세포 노화 (리포 푸신) 18 일 설립 된 바이오 마커의 L 정량화.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Apifonda</td>
 <td>S&uuml;dzucker AG, Mannheim/Ochsenfurt, Germany</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>paraformaldehyde</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>158127</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>phosphate-buffered saline</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P4417</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glycerol</td>
 <td>Merck</td>
 <td>1.04094.1000</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

obtaining specimens with slowed, accelerated and reversed aging in the honey bee model

높은 사회적 동물의 사회는 밀접한 관련이 개인 사이의 광대 한 수명의 차이가 있습니다. 사회적 곤충 가운데, 꿀벌은 수명과 노화의 가소성이 사회적 요인에 의해 설명되는 방법을 연구하는 최선의 설립 모델입니다. 꿀벌의 노동자 계급은 꿀과 꽃가루를 수집하는 무리 경향 간호사 꿀벌, 및 초지 기계 꿀벌이 포함되어 있습니다. 이전 작업은 뇌 기능과 비행 성능이 간호사보다 초지에 더 빠르게 senesce 것으로 나타났습니다. 초지 다시 간호 업무에 복귀 할 때 그러나, 뇌 기능, 복구 할 수 있습니다. 가속 반전 기능 노화의 이러한 패턴은 단백질 풍부의 변화와 면역 기능, 변경된 대사 자원 수준에 연결되어 있습니다. 비텔로 제닌, 호르몬 조절 및 세포 방어에 적응 기능을 가진 난황 단백질은 노동자의 다른 노화의 역 동성을 제어하는​​ 네트워크의 중요한 조절 요소로 역할을 할 수있다. 여기에서 우리는 간호사와 초지의 출현을 모니터링하고, 이상 수명이 간호사로 일반적으로 수명이 짧은 초지의 역전을 포함, 조작 할 수있는 방법에 대해 설명합니다. 우리의 대표적인 결과는 유사한 연대기 연령 개인이 실험 조건에서 초지와 간호사 꿀벌로 분화 방법을 보여줍니다. 우리는 다시 간호사로 초지에서 행동 반전의 유효성을 검사 할 수있는 방법을 예시. 마지막으로, 우리는 세포 노화가 리포 푸신의 축적, 노화의 보편적 인 바이오 마커를 측정하여 평가 할 수있는 방법을 다른 보여준다. 사회적 영향을 링크 할 수 있습니다 메커니즘을 연구하고 소성 노화를 들어,이 프로토콜은 관련 샘플 자료를 확보하고, 미래 연구간에 데이터의 비교 가능성을 개선하기 위해 설정하는 표준화 된 도구를 제공합니다.

프로토콜 섹션 1과 테스트 그룹은 가속의 특성을 연구하기 위해 얻을 수있는 방법을 2 세부 둔화 단일 연령대와 식민지에서 노화 반전. 우리는 (그림 1, 제 1 절 비교) 6 식민지를위한 초지 기계 카운트 ( &quot;입구 카운트&quot;)을 평가 정상적인 개체 발생을 함께 노동자 타입의 차별화를 모니터링 할 수 있습니다. 그래프는 개인이 10 일 이상 이전되기 전에 초지 기계의 상태로 간호사에 ?...

Watch this Scientific Journal Video about Obtaining Specimens with Slowed, Accelerated and Reversed Aging in the Honey Bee Model at JoVE.com

Obtaining Specimens with Slowed, Accelerated and Reversed Aging in the Honey Bee Model

꿀벌 노동자, 노화는 사회적 행동보다는 연대기 나이에 따라 달라집니다. 여기에서 우리는 매우 다른 노화 패턴과 노동자 유형을 얻을과 세포 노화를 분석 할 수있는 방법을 보여줍니다.

둔화 가속과 반전 꿀 꿀벌 모델에서 노화와 표본을 얻기

Societies of highly social animals feature vast lifespan differences between closely related individuals. Among social insects, the honey bee is the best ...

obtaining-specimens-with-slowed-accelerated-reversed-aging-honey-bee

Research

JoVE Journal

Biology

11.2K 조회수.  Norwegian University of Life Sciences.  꿀벌 노동자, 노화는 사회적 행동보다는 연대기 나이에 따라 달라집니다. 여기에서 우리는 매우 다른 노화 패턴과 노동자 유형을 얻을과 세포 노화를 분석 할 수있는 방법을 보여줍니다. 

비디오: Obtaining Specimens with Slowed, Accelerated and Reversed Aging in the Honey Bee Model

In vivo Ca2+- Imaging of Mushroom Body Neurons During Olfactory Learning in the Honey Bee

The in vivo and semi-in vivo preparation for Calcium imaging has been developed in our lab by Joerges, K&uuml;ttner and Galizia over ten years ago, to measure odor evoked activity in the antennal lobe1. From then on, it has been continuously refined and applied to different neuropiles in the bee brain. Here, we describe the preparation currently used in the lab to measure activity in mushroom body neurons using a dextran coupled calcium-sensitive dye (Fura-2). We retrogradely stain mushroom body neurons by injecting dye into their axons or soma region. We focus on reducing the invasiveness, to achieve a preparation in which it is still possible to train the bee using PER conditioning. We are able to monitor and quantify the behavioral response by recording electro-myograms from the muscle which controls the PER (M17)2.
After the physiological experiment the imaged structures are investigated in greater detail using confocal scanning microscopy to address the identity of the neurons.

In vivo Ca2+- Imaging of Mushroom Body Neurons During Olfactory Learning in the Honey Bee

Bees can be conditioned in an appetitive olfactory learning paradigm (PER-conditioning). Using odors as stimuli, we established a method in which behavior is recorded while simultaneously Calcium Imaging is used to measure odor evoked activity in mushroom body neurons in vivo.

생체내 칼슘 2 + - 허니 비에 강한 학습하는 동안 버섯 바디 뉴런의 영상

The in vivo and semi-in vivo preparation for Calcium imaging has been developed in our lab by Joerges, K&uuml;ttner and Galizia over ten years ago, to ...

연구

생물학

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

The Drosophila heart has recently emerged as a good model system for examining the genetic, cellular, and molecular mechanisms underlying function in myogenic hearts. A key step in examining heart function in the fly is finding a way to access the heart in a manner that preserves its myogenic function while still allowing the beating heart organ to be observed and recorded. Two different methods for observing and recording the beating heart in both larva and adult Drosophila are described here. Our semi-intact preparation using adult flies allows clear visualization of the abdominal heart without interference from the pigmented cuticle and overlying fat bodies. To record larval heart beats it is necessary to immobilize the larva, which minimizes body wall movements thereby reducing heart movements that are not associated with myocardial contractions. Our methodologies produce stable adult and larval heart preparations that can beat for hours at rates of 1-3 Hz.

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Technique required for visualizing the beating heart in larval and adult Drosophila are presented. Each life stage requires a different methodology.

에 잔 심장을 떠올리 Drosophila</em

The Drosophila heart has recently emerged as a good model system for examining the genetic, cellular, and molecular mechanisms underlying function in ...

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees collect and convert to beebread by placing colonies in a specially constructed enclosed flight area. Methods were developed to analyze the protein and amino acid composition of the pollen and beebread. We also describe how consumption of the beebread was measured and methods used to determine adult worker bee hemolymph protein titers after feeding on beebread for 4, 7 and 11 days after emergence. Methods were applied to determine if genotype affects the conversion of pollen to beebread and the rate that bees consume and acquire protein from it. Two subspecies (European and Africanized honey bees; EHB and AHB respectively) were provided with the same pollen source. Based on the developed methods, beebread made by both subspecies had lower protein concentrations and pH values than the pollen. In general, amino acid concentrations in beebread made by either EHB or AHB were similar and occurred at higher levels in beebread than in pollen. Both AHB and EHB consumed significantly more of the beebread made by AHB than by EHB. Though EHB and AHB consumed similar amounts of each type of beebread, hemolymph protein concentrations in AHB were higher than in EHB. Differences in protein acquisition between AHB and EHB might reflect environmental adaptations related to the geographic region where each subspecies evolved. These differences could contribute to the successful establishment of AHB populations in the New World because of the effects on brood rearing and colony growth.

Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies.

아프리칸 유럽 꿀 꿀벌에 의해 만들어 Beebread의 영양소를 비교하는 방법과하는 Hemolymph 단백질 역가에 미치는 영향

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

Dissection and Observation of Honey Bee Dorsal Vessel for Studies of Cardiac Function

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination services, as well as an important model social insect used to study memory and learning, aging, and more. Here we describe a detailed protocol for the dissection of the dorsal abdominal wall of a bee in order to visualize its dorsal vessel, which serves the role of the heart in the insect. A successful dissection will expose a functional heart that, under the proper conditions, can maintain a steady heartbeat for an extended period of time. This allows the investigator to manipulate heart rate through the application of cardiomodulatory compounds to the dorsal vessel. By using either a digital microscope or a microscope equipped with a digital camera, the investigator can make video recordings of the dorsal vessel before and after treatment with test compounds. The videos can then be scored at a time convenient to the user in order to determine changes in heart rate, as well as changes in the pattern of heartbeats, following treatment. The advantages of this protocol are that it is relatively inexpensive to set up, easy to learn, requires little space or equipment, and takes very little time to conduct.

The abdominal dorsal vessel of the honey bee and other insects serves as the functional equivalent of the mammalian heart and plays an important role in nutrient transport, waste removal, immune function, and more. Here we describe a protocol for the visualization and pharmacological manipulation of bee heart rate.

심장 기능의 연구에 대한 해부와 벌 꿀 지느러미 선박의 관측

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment methods. Here we describe methods to measure the quantities of adult bees, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, by photographing frames, and by installing hives on scales and with internal sensors. Data from these periodic evaluations are then combined with running average and daily detrended data on hive weight and internal hive temperature. The resulting datasets have been used to detect colony-level effects of imidacloprid applied in a sugar syrup as low as 5 parts per billion. The methods are objective, require little training, and provide permanent records in the form of sensor output and photographs.

Sublethal doses of pesticides may affect colonies in ways that are difficult to detect using only periodic or visual methods. Methods to measure total adult bee mass, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, photographing frames, and installing sensors, are provided. Data analysis is also addressed.

꿀 꿀벌에 Sublethal 농약 노출의 식민지 수준 효과 모니터링

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These age-associated disorders are characterized by the appearance of protein aggregates with fibrillary structure in the brains of these patients. Exactly why normally soluble proteins undergo an aggregation process remains poorly understood. The discovery that protein aggregation is not limited to disease processes and instead part of the normal aging process enables the study of the molecular and cellular mechanisms that regulate protein aggregation, without using ectopically expressed human disease-associated proteins. Here we describe methodologies to examine inherent protein aggregation in Caenorhabditis elegans through complementary approaches. First, we examine how to grow large numbers of age-synchronized C. elegans to obtain aged animals and we present the biochemical procedures to isolate highly-insoluble-large aggregates. In combination with a targeted genetic knockdown, it is possible to dissect the role of a gene of interest in promoting or preventing age-dependent protein aggregation by using either a comprehensive analysis with quantitative mass spectrometry or a candidate-based analysis with antibodies. These findings are then confirmed by in vivo analysis with transgenic animals expressing fluorescent-tagged aggregation-prone proteins. These methods should help clarify why certain proteins are prone to aggregate with age and ultimately how to keep these proteins fully functional.

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

The goal of the method presented here is to explore protein aggregation during normal aging in the model organism C. elegans. The protocol represents a powerful tool to study the highly insoluble large aggregates that form with age and to determine how changes in proteostasis impact protein aggregation.

꼬마 선 충 나이 연구 변화 내재 단백질 집계에 방법

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

SA-&#946;-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs

Cell senescence is one of the hallmarks of aging known to negatively influence a healthy lifespan. Drugs able to kill senescent cells specifically in cell culture, termed senolytics, can reduce the senescent cell burden in vivo and extend healthspan. Multiple classes of senolytics have been identified to date including HSP90 inhibitors, Bcl-2 family inhibitors, piperlongumine, a FOXO4 inhibitory peptide and the combination of Dasatinib/Quercetin. Detection of SA-&#946;-Gal at an increased lysosomal pH is one of the best characterized markers for the detection of senescent cells. Live cell measurements of senescence-associated &#946;-galactosidase (SA-&#946;-Gal) activity using the fluorescent substrate C12FDG in combination with the determination of the total cell number using a DNA intercalating Hoechst dye opens the possibility to screen for senotherapeutic drugs that either reduce overall SA-&#946;-Gal activity by killing of senescent cells (senolytics) or by suppressing SA-&#946;-Gal and other phenotypes of senescent cells (senomorphics). Use of a high content fluorescent image acquisition and analysis platform allows for the rapid, high throughput screening of drug libraries for effects on SA-&#946;-Gal, cell morphology and cell number.

SA-&amp;#946;-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs

Cellular senescence is the key factor in the development of chronic age-related pathologies. Identification of therapeutics that target senescent cells show promise for extending healthy aging. Here, we present a novel assay to screen for the identification of senotherapeutics based on measurement of senescence associated &#946;-Galactosidase activity in single cells.

SA-β-갈락토시다아제 계 선별 분석법

Cell senescence is one of the hallmarks of aging known to negatively influence a healthy lifespan. Drugs able to kill senescent cells specifically in cell ...

A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee (Bombus) Hive Entrances

To verify the plant sources from which bumble bees forage for pollen, individuals must be collected to remove their corbicular pollen loads for analysis. This has traditionally been done by netting foragers at nest entrances or on flowers, chilling the bees on ice, and then removing the pollen loads from the corbiculae with forceps or a brush. This method is time and labor intensive, may alter normal foraging behavior, and can result in stinging incidents for the worker performing the task. Pollen traps, such as those used on honey bee hives, collect pollen by dislodging corbicular pollen loads from the legs of workers as they pass through screens at the nest entrance. Traps can remove a large quantity of pollen from returning forager bees with minimal labor, yet to date no such trap is available for use with bumble bee colonies. Workers within a bumble bee colony can vary in size making size selection of entrances difficult to adapt this mechanism to commercially reared bumble bee hives. Using 3D printing design programs, we created a pollen trap that successfully removes the corbicular pollen loads from the legs of returning bumble bee foragers. This method significantly reduces the amount of time required by researchers to collect pollen from bumble bee foragers returning to the colony. We present the design, results of pollen removal efficiency tests, and suggest areas of modifications for investigators to adapt traps to a variety of bumble bee species or nest box designs.

A 3D Printed Pollen Trap for Bumble Bee Bombus Hive Entrances

We present a non-lethal and automated mechanism to collect pollen from bumble bee (Bombus) workers returning to a hive. Instructions for producing, preparing, installing and using the devices are included. By using 3D-printed objects, modification to the design was timely, efficient and allowed for quick turnaround for testing.

범블 비(봄푸스)하이브 입구를위한 3D 인쇄 꽃가루 트랩

To verify the plant sources from which bumble bees forage for pollen, individuals must be collected to remove their corbicular pollen loads for analysis.  ...

Gonadectomy and Blood Sampling Procedures in the Small Size Teleost Model Japanese Medaka (Oryzias latipes)

Sex steroids, produced by the gonads, play an essential role in brain and pituitary tissue plasticity and in the neuroendocrine control of reproduction in all vertebrates by providing feedback to the brain and pituitary. Teleost fishes possess a higher degree of tissue plasticity and variation in reproductive&#160;strategies compared to mammals and appear to be useful models to investigate the role of sex steroids and the mechanisms by which they act. The removal of the main source of sex steroid production using gonadectomy together with blood sampling to measure steroid levels has been well-established and fairly feasible in bigger fish and is a powerful technique to investigate the role and effects of sex steroids. However, these techniques raise challenges when implemented in small size teleost models. Here, we describe the step-by-step procedures of gonadectomy in both males and female Japanese medaka followed by blood sampling. These protocols are shown to be highly feasible in medaka indicated by a high survival rate, safety for the life span and phenotype of the fish, and reproducibility in terms of sex steroid clearance. The use of these procedures combined with the other advantages of using this small teleost model will greatly improve the understanding of feedback mechanisms in the neuroendocrine control of reproduction and tissue plasticity provided by sex steroids in vertebrates.

Gonadectomy and Blood Sampling Procedures in the Small Size Teleost Model Japanese Medaka Oryzias latipes

The article describes a quick protocol to gonadectomize and sample blood from the small teleost fish, using Japanese medaka (Oryzias latipes) as a model, to investigate the role of sex steroids in animal physiology.

작은 크기의 텔레오스 모델 일본어 메다카(오리지아스 latipes)에서고나데토미및 혈액 샘플링 절차

Sex steroids, produced by the gonads, play an essential role in brain and pituitary tissue plasticity and in the neuroendocrine control of reproduction in ...

Collection and Identification of Pollen from Honey Bee Colonies

Researchers often collect and analyze corbicular pollen from honey bees to identify the plant sources on which they forage for pollen or to estimate pesticide exposure of bees via pollen. Described herein is an effective pollen-trapping method for collecting corbicular pollen from honey bees returning to their hives. This collection method results in large quantities of corbicular pollen that can be used for research purposes. Honey bees collect pollen from many plant species, but typically visit one species during each collection trip. Therefore, each corbicular pollen pellet predominantly represents one plant species, and each pollen pellet can be described by color. This allows the sorting of samples of corbicular pollen by color to segregate plant sources. Researchers can further classify corbicular pollen by analyzing the morphology of acetolyzed pollen grains for taxonomic identification. These methods are commonly used in studies related to pollinators such as pollination efficiency, pollinator foraging dynamics, diet quality, and diversity. Detailed methodologies are presented for collecting corbicular pollen using pollen traps, sorting pollen by color, and acetolyzing pollen grains. Also presented are results pertaining to the frequency of pellet colors and taxa of corbicular pollen collected from honey bees in five different cropping systems.

We describe methods for collecting corbicular pollen from honey bees as well as protocols for color sorting, acetolysis, and microscope slide preparation of pollen for taxonomic identification. In addition, we present pellet color and taxonomic diversity of corbicular pollen collected from five cropping systems using pollen traps.

꿀벌 식민지에서 꽃가루의 수집 및 식별

Researchers often collect and analyze corbicular pollen from honey bees to identify the plant sources on which they forage for pollen or to estimate ...