저자는 김 실험실, 도움이 토론과 데이터 공유를위한 제브라 피쉬의 관리 및 유지 보수, 로버트 윌러에 대한 마크 NILAN의 과거와 현재 회원을 인정, 그리고 NIH 보조금 3RO1GM087308-02S1과 1P20RR024475-01A2와 메인 농업 및 산림 것 자금 역 (공개 번호 3303)를 실험.

1. 제브라 피쉬의 관리 및 유지 보수 <ol><li> 축산 질량 스폰 성인 제브라 피쉬는 이전에 13을 설명했다. 이전 14 기술로 만들어지는 배아를 수집합니다. </li><li> 미세 주입은 (원하는 경우) : 같은 유전자 제품을 과다 발현하는 유전자의 제품의 mRNA를 넉다운하는 모르 폴리 노 올리고 뉴클레오티드와 Microinject 1-4 세포 단계의 제브라 피쉬 배아 이전 15 설명했다. <ol><li> 모의의 적절한 풀을 유지 컨트롤을 주입 (최소 48 생활, 모의 실험적으로 조작 물고기는 96 웰 마이크로 플레이트를 채우기 위해 필요한 제어 물고기 48 생활을 주입). </li></ol></li><li> 배아를 유지 : 달걀 물에 28 ° C에서 깊은 배양 접시에있는 배아를 성장 원하는 발달 단계 (호흡 버스트 응답이 제브라 피쉬 배아에이 프로토콜을 사용하여 검출되지 때까지 (60 ㎍ / ㎖의 인스턴트 오션 바다 소금 물을 멸균 증류수) 젊은 2 일 이상)이 수정 (12)을 배치한다. 참고 :이 O를하고있다1 - 페닐 -2 - 티오 우레아 (PTU) 또는 golden/slc24a5 돌연변이 제브라 피쉬의 사용 중 하나를 통해 제브라 피쉬 배아에 색소 침착을 방지하는 것은 상당히 PMA (출판되지 않은 데이터, 48, 72에서 테스트 배아 및 (96)에 의해 형광의 유도를 변경하지 않습니다 bserved HPF). <ol><li> 플라스틱 전송 피펫 매일 죽은 태아를 제거합니다. </li><li> 조심스럽게 오래된 달걀 물을 가만히 따르다 매일 새로운 계란 물을 보충한다. </li></ol></li><li> Dechorionate 배아 : 실험의 날, 같은 dechorionate 배아 (배아가 chorions하고 있으면) 이전에 두 개의 미세 집게 14 (이 호흡 버스트 분석은 성인 제브라 피쉬 (12)와 신장에 대한 자세한 프로토콜에서 해부 신장에서 수행 할 수를 사용하여 설명 성인 제브라 피쉬에서 해부 이전) (16, 17)을 설명 하였다. </li></ol> 2. 솔루션 준비 <ol><li> H2DCFDA의 재고 솔루션을 준비 : H2DCFDA의 1 MG를 달다. <ol><li> 디1 ㎎ / ㎖의 스톡 용액을 만드는 디메틸 술폭 시드 (DMSO)에 1 ㎖의 H2DCFDA ssolve 한 MG. </li><li> 1.7 ML의 microcentrifuge 튜브에이 원액 22 μL 씩 분주합니다. </li><li> 알루미늄 호일에 H2DCFDA 원액의 분취 량을 감싸고 때마다 H2DCFDA 민감한 가볍기 때문에 가능한 한 어두운 곳에서 보관하십시오. </li><li> 최대 3 개월 -20 ° C에서 보관 H2DCFDA 분량 씩. </li></ol></li><li> 주의 - 포르 미리 스테이트 아세테이트 (PMA)의 주식 솔루션을 준비 : 적절한 개인 보호 장비 (즉, 장갑, 고글, 마스크)를 사용하여 PMA의 1 MG를 달다. <ol><li> 1 ㎎ / ㎖의 원액을 만들기 위해 DMSO의 1 ㎖에 PMA를 녹입니다. </li><li> 1.7 ML의 microcentrifuge 튜브에 11 ㎕의 분취 량을 확인합니다. </li><li> 최대 3 개월 -80 ° C에서 PMA 원액의 저장 분취. </li></ol></li><li> H2DCFDA의 작업 솔루션을 준비 : 실험 당일, 1 1 부 H2DCFDA 주식 솔루션을 추가하여 H2DCFDA 작업 솔루션을부품 DMSO (500 ㎍ / ㎖의 H2DCFDA 최종 농도). 예를 들어, H2DCFDA 원액의 20 μl를 추가하고 호일에 20 μL의 DMSO 1.7 ML microcentrifuge 관을 감쌌다. </li><li> PMA의 작업 솔루션을 준비 : 실험 당일, 무료 물 (20 ㎍ / ㎖의 PMA 최종 농도) 클레아 제 49 부 1 부 PMA 주식 솔루션을 추가하여 PMA 작업 솔루션을합니다. 예를 들어, 1.7 ML microcentrifuge 관에 490 μL 클레아 무료 물에 10 μL의 PMA 원액을 희석. </li><li> H2DCFDA의 투약 솔루션을 준비 : 실험 당일, 달걀 물에 1 ㎍ / ㎖의 H2DCFDA의 최종 농도 H2DCFDA 투약 솔루션을합니다. 투여 용액의 제조 볼륨은 원하는대로 개질 만, 시약의 최종 농도가 유지되도록 할 수있다. 신장의 경우, 대신에 계란 물, (페놀 레드없이 50 % DMEM, 50 % F-12) 둘 베코의 수정 이글의 medium/F-12의 동일한 볼륨을 사용합니다. H2DCFDA 5 ㎖를 만들려면솔루션을 투약, 원뿔 원심 분리기 튜브 호일에 싸여 &#39;H&#39;라는 15 ㎖에 5 계란 ㎖의 물 (또는 DMEM/F-12)를 전송하기 위해 5 ㎖ 혈청 피펫을 사용합니다. <ol><li> 원뿔 튜브가 &#39;H&#39;표시 및 폐기 15 ML에서 계란 물 (또는 DMEM/F-12)의 10 μl를 제거합니다. </li><li> (이 볼륨은 48 배아 또는 신장 샘플 (전체 96 웰 마이크로 플레이트의 절반 충분하다) 혼합하는 &#39;H&#39;와 소용돌이 표시된 15 ML 원뿔 관에 H2DCFDA 작업 용액 10 μl를 추가하고 이러한 우물 수준의 측정을 제공합니다 배경 형광). </li></ol></li><li> H2DCFDA + PMA의 투약 솔루션을 준비 : 실험 당일의 최종 농도 H2DCFDA + PMA 투약 솔루션입니다 : H2DCFDA - 1 ㎍ / ㎖ 및 PMA - 400 겨 / ㎖를. , H2DCFDA + PMA 투약 용액을 5 ㎖을 &#39;H + P&#39;라는 새로운 15 ML 원뿔 관에 5 계란 ㎖의 물 (또는 DMEM/F-12)를 전송하기 위해 5 ㎖ 혈청 피펫을 사용합니다. <ol><li> _ (110)를 제거합니다6, 원뿔 튜브 &#39;는 H의 +의 P&#39;라는 폐기 15 ML에서 계란 물 (또는 DMEM/F-12)의 L. </li><li> H2DCFDA 작업 용액 10 μl를 추가 한 다음 표시된 15 ML 원뿔 관 &#39;H의 +의 P&#39;와 혼합하는 소용돌이 (이 볼륨은 48 샘플 또는 전체 96 웰 마이크로 플레이트의 다른 반쪽에 충분한에 PMA 작업 용액 100 μl를 추가 ). </li></ol></li><li> 얼음 투약 솔루션을 유지합니다. </li></ol> 3. 마이크로 플레이트 리더 프로그램 <ol><li> 마이크로 플레이트 리더에 힘 : 장비를 준비합니다. <ol><li> 광원을 따뜻하게. </li><li> 예를 들어, 흥분 : 형광 읽을 수있는 프로그램 설정 485 nm의, 방출 : 528 nm의, 광학 위치 : 최고 510 nm의, 감도 : 65, 이전까지의 5 초 흔들어 단계를. </li></ol></li></ol> 4. 96 웰 마이크로 플레이트 세트 업 (그림 2 참조) <ol><li> 물품을 수집합니다 dechorionated 배아, 블랙 96 웰 마이크로 플레이트, P200의 피펫과 함께 요리를 얻팁, H2DCFDA 및 H2DCFDA + PMA 투여 솔루션과 얼음 양동이, 멀티 채널 P200의 피펫, 두 멸균 저수지, 알루미늄 호일, 가위. </li><li> 96 웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 전송 한 배아 이용 가위 피펫 팁을 절감 할 수 있도록 개방을 통해 적합 배아 또는 신장. <ol><li> 원하는대로 (이 각각 다른 용 피펫 팁을 변경할 필요가 없습니다 100 μL에 P200의 피펫을 설정하고 검은 96 웰 마이크로 플레이트의 웰의 많은에 계란 물 (또는 DMEM/F-12)와 함께 하나의 배아를 전송 배아 실험 조건 내에서 샘플 만) 실험 조건 사이의 팁을 변경해야 할 수 있습니다. 이 수집 한 데이터를 왜곡하는 경향, 잔류 chorions 묻지 않도록해야합니다. 신장의 전송을 위해, (100 μL로 설정) 큰 부피 피펫이 사용될 수 있고, 필요한 경우 피펫 팁은, 큰 내경을 얻기 위해 절단 될 수있다. 그것은 배아 또는 신장 샘플없이 우물을 통합 할 필요가 있지만, 함께 할 수 있습니다일부 실험 조작에 대한 제어 투약 솔루션을 제공합니다. </li></ol></li><li> 투약 솔루션을 추가 멸균 25 ML 저수지에 H2DCFDA 투약 솔루션을 붓는다. <ol><li> 동시에 96 웰 마이크로 플레이트 (H2DCFDA 500 NG / ML 최종 농도)에 하나의 컬럼에 H2DCFDA 투약 용액 100 μl를 피펫하는 멀티 채널 P200의 피펫 여덟 팁을 사용합니다. </li><li> (일반적으로 여섯 열 또는 48 우물은 전체 96 웰 마이크로 플레이트를 작성하는 경우) 원하는만큼 열이 (팁을 변경하는 것은 필요하지 않다)를 반복합니다. 제어 배아 샘플 및 실험적으로 조작 배아 샘플의 절반의 절반에이 솔루션을 추가 (예를 들어 96 웰 마이크로 플레이트가 설정 그림 2와 같다,이 우물 (컬러 오렌지) PMA로 유도하지 샘플에서 배경 형광 데이터를 제공 할 것입니다) . </li><li> 새로운 멸균 25 ML 저수지에 H2DCFDA + PMA 투약 솔루션을 붓는다. </li><li> 멀티 채널 P200의 피펫과 simult 여덟 팁을 사용하여aneously (팁을 변경하는 것은 필요하지 않습니다, H2DCFDA-500의 NG / ML 및 PMA-200 NG / ML의 최종 농도)를 96 웰 마이크로 플레이트의 (그림 2 색 레드) 나머지 열로 H2DCFDA + PMA 투여 용액 100 μl를 피펫 . </li></ol></li><li> 알루미늄 호일로 마이크로 플레이트를 커버. </li><li> 물론 각각의 솔루션을 균질화 150 rpm에서 약 20 초 동안 마이크로를 흔들어. </li><li> 읽은되지 않을 때 28 ° C에서 마이크로 플레이트를 품어. </li></ol> 5. 형광 정량 <ol><li> 한번에 마이크로 알아 = 단계 3.1.2에서 설명한 매개 변수를 사용하여 PMA의 첨가 후 0 시간. <ol><li> 측정에게 원하는 시간 간격에 대한 몇 분 간격으로 촬영을 계속하거나 나중에 지점까지 28 ° C에서 호일 포장 마이크로를 배양 한 후 (예 : 4 시간 PMA의 첨가 후) 원하는 시간에 엔드 포인트의 측정을 수행. </li></ol></li><li> 플라스틱 (T)를 사용하여우물에서 배아를 검색하기를 ransfer 피펫. </li><li> 당신의 동물 관리 및 사용 프로토콜, tricaine의 MS222의 예를 들어 침수에 따라 배아를 안락사. </li><li> 생물학적 폐기물 용기의 마이크로 및 기타 처분 할 수있는 재료를 폐기하십시오. </li></ol> 6. 데이터 분석 <ol><li> 당신이 형광 값 (PMA, 표 1을 추가 한 후 예를 들어, 4 시간)을 비교하고 싶습니다되는 시점을 결정합니다. </li><li> 개인 PMA 유도 제어 그룹의 형광 값의 평균 않은 유도 제어 그룹의 형광 값을 뺍니다. </li><li> 과와 PMA없이 실험 그룹에 대해이 단계를 반복합니다. </li><li> 이 열 제어 + PMA 기 및 실험 + PMA 군 (표 2)에 이러한 정규화 된 형광 값을 저장한다. </li><li> 컨트롤 + PMA의 GROU의 정규화 된 형광 값에 대한 수단과 표준 편차를 계산p와 실험 +의 PMA 그룹. </li><li> (표 2) 통계적 중요성을 결정하기 위해 짝 t-검정을 사용하여 표준화 된 형광 값을 비교한다. </li><li> 그래프 컨트롤 + PMA 그룹과 해당 표준 편차를 반영하는 오차 막대와 실험 + PMA 그룹의 수단. </li><li> 그래프와 그림 전설의 유의 수준 (그림 2)를 기록합니다. </li></ol>

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저자가 공개하는 게 없다.

식세포의 기본 기능은 병원균을 감지 침몰하고 파괴하는 것입니다. 적절한 호흡 버스트를 생성하는 식세포의 능력은이 기능을 위해 중요하다. 따라서, 호흡 버스트 응답의 정량화는 개인 및 / 또는 실험 조작에 대한 응답의 그룹 사이에 일반적으로 선천성 면역의 건강과 기능의 비교를 할 수 있도록 한 방법입니다. 여기서 우리는, 유도의 양, 개인 제브라 피쉬 배아의 그룹 간의 호흡 버스트 반응?...

타고난 및 적응 면역 : 면역 시스템은 두 가지로 구성되어 있습니다. 선천성 면역은 진화 적으로 적응 면역보다 더 고대합니다. 척추 동물은 모두 타고난 및 적응 가지를 가지고 반면, 무척추 동물은 현재 만 선천성 면역을 것으로 생각됩니다. 적응 면역은 특정 병원체에 대한 구체적이고 오래 지속되는 면역을 부여하면서, 선천성 면역은 침입 한 세균, 바이러스, 곰팡이에 즉각적인 반응이다. 타고난 면역 반응의 중요한 측면은 외국 침략자를 침몰하고 파괴하는 식세포 (예를 들어, 대 식세포, 호중구)의 염증과 모집 결과 사이토 카인과 케모카인의 방출을, 포함한다. 성공적인 선천성 면역 반응은 포함 : 침입하는 미생물의 (1) 인식, 적절한 신호 폭포 (사이토 카인과 케모카인의 예를 들어 릴리스)의 것 (2) 유도, 식세포의 (3) 적절한 개발 / 적절한 번호, (4) 감염의 사이트에 식세포의 이동, 병원균 (5) 말림, 그리고 가득 채우고 미생물 (6) 파괴. 다음 단계 중 하나의 결핍에 의해 압도되는 호스트로 이어질하고, 감염에 굴복 할 수 있습니다. 이 모든 식물과 동물의 병원균에 대한 방어의 첫 번째 라인 때문에 강력한 선천성 면역 반응은 생명체의 건강에 매우 중요합니다. 척추 동물에서, 또한 적응 면역 반응 1 potentiates. 따라서, 우리는 더 잘 이해하고 그 기능을 최적화하기 위해 선천성 면역 반응의 모든 측면을 평가할 수있는 것이 중요하다. 대부분의 모델 생물은 Arabadopsis에서 C.에 이르기까지, 선천성 면역을 연구하는 데 사용됩니다 배양 된 인간 세포로 쥐에 초파리에 엘레. 선천성 면역을 연구하기 위해 제브라 피쉬 (다니오 rerio) 모델 시스템을 사용하는 장점은 제브라 피쉬는 타고난 및 적응을 모두 메신저로, 척추 것입니다지역 사회, 그러나 타고난 및 적응 면역의 발전은 시간적으로 분리됩니다. 적응 면역이 완전하게 작동 될 때까지 제브라 피쉬는 약 4-6 주 포스트 수정이 발생하는 단독 감염에 대한 보호를 위해 선천성 면역에 의존하고 있습니다. 유전자 조작, 광학 선명도와 급속한, 외부 개발을위한 도구뿐만 아니라, 제브라 피쉬 배아 방어의 원칙 모드로 선천성 면역은 생체 내에서 타고난 면역 반응의 복잡성을 연구하는 단순화 된 모델을 제공합니다. 다중 프로토콜은 제브라 피쉬 배아 선천성 면역 반응의 다른 측면을 평가하기 위해 개발되어왔다. 마이크로 어레이 및 RNAseq는 제브라 피쉬의 타고난 면역 반응에 의해 유발 사이토 카인의 프로파일은 인간의 그것과 유사하며 또한 선천성 면역 3,4 예상치 못한 유전자의 참여를 제안했다고 확인했다. 제브라 피쉬 배아 및 형광, transgen의 투명도병원균 및 제브라 피쉬의 IC 균주는 실시간으로 생체 내에서 동적 호스트 병원체 상호 작용을 시각화 할 수 있습니다. 호중구 별 폐장 내 myeloperoxidase 프로모터 5,6 또는 대식 세포의 특정 MPEG1 발기인 7의 제어하에 GFP를 발현하는 형질 전환 제브라 피쉬 배아 시각화하고 정량화 식세포의 이동을 지역화 감염 8의 사이트뿐만 아니라 식균 작용과 파괴를 시각화하는 것이 가능하게했다 찬란 8,9는 병원균 표시. 제브라 피쉬 배아는 높은 처리량 분석 및 화학 화면의 생성에 순종합니다. 따라서, 감염 (10)과 화학적으로 유도 부상 11의 사이트에 식세포의 이동에 따라 사체 분석의 높은 처리량 방법은 최근에 개발되었다. 위에 나열된 기술, 아무도 정량적 식세포에 의해 병원균 파괴의 마지막 단계를 평가하지 않습니다. 이 마지막 단계침몰 병원균을 죽일 호흡 버스트 (즉, 활성 산소의 생산 및 기타 독성 화합물)을 포함한다. 효소 NADPH 산화 효소는 식세포에서 ROS의 주요 원천입니다. 산소에 대한 전자의 전달에 NADPH 옥시 다제 효소 결과의 서브 유닛의 조립, 수퍼 옥사이드 음이온을 발생시킨다. 후속 효소 반응을 통해, 과산화물은 과산화수소 및 차아 산 (도 1a)로 전환 될 수있다. 그것은 병원균을 죽이기 때문에, 제브라 피쉬 배아의 호흡 버스트 가능성의 정량화가 전체 선천성 면역 건강을 나타내는 식세포의 호흡 버스트입니다. 우리는 개인의 제브라 피쉬 배아 12 개에서 호흡 버스트를 정량화 할 수있는 형광 기반의 분석을 개발했다. 이 분석은 시판, 세포 투과성 염료의 비 형광, 환원 된 형태를 사용합니다. 이 염료, 2 &#39;, 7&#39;-dichlorodihydrofluorescein 디 아세테이트 (H2DCFDA가)로 변환된다 fluores산화시 센트 화합물, 2 &#39;, 7&#39;-dichlorofluorescein (DCF). 식세포 호흡 버스트에 의해 생성 된 다양한 ROS는 H2DCFDA을 산화 및 형광 (24)를 생성 할 수 있습니다. 형광의 외형 지브라 피쉬의 그룹 사이 호흡기 버스트 반응을 정량화하고 비교하는데 사용될 수있다. 단백질 키나제 C 효능 포르 미리 스테이트 아세테이트 (PMA)는 화학적으로 활성 산소를 생산하는 NADPH 산화 효소를 유도하고, 따라서 형광 판독 (그림 1B)를 증가하는 데 사용됩니다. 여기서, 우리는이 제브라 피쉬 배아 호흡 버스트 분석의 수정 및 최적화 된 버전에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 이 분석은 시간이 지남에 및 / 또는 실험 조작 (예를 들어, 모르 폴리 노 - 매개 단백질 최저)에 대한 응답으로 개별 제브라 피쉬 배아의 그룹 간의 호흡 버스트을 비교하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법의 사용은, 다른 제브라 선천성 면역 분석법과 함께, 복잡하고 중요한의 더욱 완전한 그림을 제공 할 것이다타고난 면역 반응.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Instant Ocean Sea Salt</td>
			<td>Instant Ocean</td>
			<td>SS15-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>H2DCFDA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>35845-1G</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>PMA</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP6851</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2438-5X10ML</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Tricaine S MS222</td>
			<td>Western Chemical</td>
			<td>100 grams</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>DMEM/F-12, No Phenol Red </td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11039-021</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Deep Petri Dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89107-632</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Plastic Transfer Pipettes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-711-7M</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>#5 Dumont Forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72700-D</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>1.7 ml Micro Centrifuge Tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>10011-724</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>15 ml Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-918</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>5 ml Serological Pipettes</td>
			<td>Greiner Bio One</td>
			<td>606180</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Synergy 2 Multi-Mode Microplate Reader</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>Contact BioTek</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Black 96 Well Microplate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82050-728</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>25 ml Sterile Reservoirs</td>
			<td>VistaLab</td>
			<td>3054-2003</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>P200 Pipettor</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Multichannel Pipettor</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89079-948</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pipette Tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89079-478</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

quantification of the respiratory burst response as an indicator of innate immune health in zebrafish

식세포 호흡기 버스트는 병원균 감염에 대한 선천성 면역 반응의 일부이며, 반응성 산소 종 (ROS)의 생성을 포함한다. ROS는 독성이 phagocytized 미생물을 죽이는 기능을한다. 식세포 유래 ROS의 생체 정량화 강력한 타고난 면역 반응을 탑재 할 수있는 유기체의 능력에 관한 정보를 제공합니다. 여기서 우리는 식세포 호흡 버스트의 화학 유도에 전체 제브라 피쉬 배아에 ROS의 양을 비교하는 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 활성 산소에 의한 산화에 따라 형광이되는 비 형광 화합물을 사용한다. 개인 제브라 피쉬 배아는 마이크로 플레이트의 웰에 피펫과 호흡 버스트의 화학 유도 유무에 관계없이이 형광 기판에서 배양된다. 각 웰의 형광 마이크로 플레이트 리더를 이용하여 원하는 시점에서 정량화한다. 형광 판독이 배경 형광을 제거하도록 조절하고 공동 아르짝 t-검정을 사용하여 mpared. 이 방법은 서로 다른 발달 단계에와 단백질의 최저, 과발현 또는되는 약물과 치료로 실험 조작에 대한 응답에있는 제브라 피쉬 배아의 호흡 버스트 잠재력의 비교를 할 수 있습니다. 이 방법은 또한 어른 지브라 피쉬의 신장 및 다른 어류로부터 해부 전체 신장 또는 세포 제제의 호흡 버스트 응답을 모니터링하기 위해 사용될 수있다. 우리는이 프로토콜의 상대적 단순성과 적응성이 기존의 프로토콜을 보완하고 더 나은 타고난 면역 반응을 이해하고자 연구에 관심이있을 것이라고 믿는다.

여기에, 우리는 48에서 제브라 피쉬 배아에서 호흡 버스트 응답 (야생 형, AB 배경을) 비교 데이터를 72 시간 포스트 수정 (HPF)를 제공합니다. 우리의 통제 그룹과 우리의 실험 그룹과 72 HPF 배아로 행동 48 HPF의 배아. 사용 된 표본의 크기는 24 유엔에 의한 배아 발달 단계 당 24 PMA에 의한 배아했다. (상대 형광 단위 (RFU)에서) 천연 형광 판독 값을 4 시간 PMA의 첨가 후 마이크로 플레이트를 판독함으로써 ...

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Quantification of the Respiratory Burst Response as an Indicator of Innate Immune Health in Zebrafish

선천성 면역 반응은 병원체의 감염에 대한 유기체를 보호합니다. 타고난 면역 반응의 중요한 구성 요소, 식세포 호흡 버스트, 침입 미생물을 죽이는 활성 산소를 생성한다. 우리는 타고난 면역 반응이 화학적으로 유도 될 때 생성 된 활성 산소 종을 정량화 호흡 버스트 분석에 대해 설명합니다.

제브라 피쉬의 선천성 면역 건강의 지표로 호흡 버스트 응답의 정량화

The phagocyte respiratory burst is part of the innate immune response to  pathogen infection and involves the production of reactive oxygen species (ROS). ...

quantification-respiratory-burst-response-as-an-indicator-innate

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

21.5K 조회수.  University of Maine.  선천성 면역 반응은 병원체의 감염에 대한 유기체를 보호합니다. 타고난 면역 반응의 중요한 구성 요소, 식세포 호흡 버스트, 침입 미생물을 죽이는 활성 산소를 생성한다. 우리는 타고난 면역 반응이 화학적으로 유도 될 때 생성 된 활성 산소 종을 정량화 호흡 버스트 분석에 대해 설명합니다. 

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Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response following an infection. Despite efforts to identify unique surface marker on Tregs, the only unique feature is their ability to suppress the proliferation and function of effector T cells. While it is clear that only in vitro assays can be used in assessing human Treg function, this becomes problematic when assessing the results from cross-sectional studies where healthy cells and cells isolated from subjects with autoimmune diseases (like Type 1 Diabetes-T1D) need to be compared. There is a great variability among laboratories in the number and type of responder T cells, nature and strength of stimulation, Treg:responder ratios and the number and type of antigen-presenting cells (APC) used in human in vitro suppression assays. This variability makes comparison between studies measuring Treg function difficult. The Treg field needs a standardized suppression assay that will work well with both healthy subjects and those with autoimmune diseases. We have developed an in vitro suppression assay that shows very little intra-assay variability in the stimulation of T cells isolated from healthy volunteers compared to subjects with underlying autoimmune destruction of pancreatic &beta;-cells. The main goal of this piece is to describe an in vitro human suppression assay that allows comparison between different subject groups. Additionally, this assay has the potential to delineate a small loss in nTreg function and anticipate further loss in the future, thus identifying subjects who could benefit from preventive immunomodulatory therapy1. Below, we provide thorough description of the steps involved in this procedure. We hope to contribute to the standardization of the in vitro suppression assay used to measure Treg function. In addition, we offer this assay as a tool to recognize an early state of immune imbalance and a potential functional biomarker for T1D.

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Tregs are potent suppressors of the immune system. There is a lack of unique surface markers to define them, hence, definitions of Tregs are primarily functional. Here we describe an optimized in vitro assay capable of identifying immune imbalance in subjects at risk to develop T1D.

사람의 체외에서</em면역 불균형의 초기 국가의 인정을위한 심사 도구를> 억제

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

연구

면역학 및 감염병학

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. 1A-C), females of the genus Leptopilina (Fig. 1D, 1F, 1G) and Ganaspis (Fig. 1E) attack the larval stages. We use these parasites to study the molecular basis of a biological arms race. Parasitic wasps have tremendous value as biocontrol agents. Most of them carry virulence and other factors that modify host physiology and immunity. Analysis of Drosophila wasps is providing insights into how species-specific interactions shape the genetic structures of natural communities. These studies also serve as a model for understanding the hosts' immune physiology and how coordinated immune reactions are thwarted by this class of parasites.
The larval/pupal cuticle serves as the first line of defense. The wasp ovipositor is a sharp needle-like structure that efficiently delivers eggs into the host hemocoel. Oviposition is followed by a wound healing reaction at the cuticle (Fig. 1C, arrowheads). Some wasps can insert two or more eggs into the same host, although the development of only one egg succeeds. Supernumerary eggs or developing larvae are eliminated by a process that is not yet understood. These wasps are therefore referred to as solitary parasitoids.
Depending on the fly strain and the wasp species, the wasp egg has one of two fates. It is either encapsulated, so that its development is blocked (host emerges; Fig. 2 left); or the wasp egg hatches, develops, molts, and grows into an adult (wasp emerges; Fig. 2 right). L. heterotoma is one of the best-studied species of Drosophila parasitic wasps. It is a "generalist," which means that it can utilize most Drosophila species as hosts1. L. heterotoma and L. victoriae are sister species and they produce virus-like particles that actively interfere with the encapsulation response2. Unlike L. heterotoma, L. boulardi is a specialist parasite and the range of Drosophila species it utilizes is relatively limited1. Strains of L. boulardi also produce virus-like particles3 although they differ significantly in their ability to succeed on D. melanogaster1. Some of these L. boulardi strains are difficult to grow on D. melanogaster1 as the fly host frequently succeeds in encapsulating their eggs. Thus, it is important to have the knowledge of both partners in specific experimental protocols.
In addition to barrier tissues (cuticle, gut and trachea), Drosophila larvae have systemic cellular and humoral immune responses that arise from functions of blood cells and the fat body, respectively. Oviposition by L. boulardi activates both immune arms1,4. Blood cells are found in circulation, in sessile populations under the segmented cuticle, and in the lymph gland. The lymph gland is a small hematopoietic organ on the dorsal side of the larva. Clusters of hematopoietic cells, called lobes, are arranged segmentally in pairs along the dorsal vessel that runs along the anterior-posterior axis of the animal (Fig. 3A). The fat body is a large multifunctional organ (Fig. 3B). It secretes antimicrobial peptides in response to microbial and metazoan infections.
Wasp infection activates immune signaling (Fig. 4)4. At the cellular level, it triggers division and differentiation of blood cells. In self defense, aggregates and capsules develop in the hemocoel of infected animals (Fig. 5)5,6. Activated blood cells migrate toward the wasp egg (or wasp larva) and begin to form a capsule around it (Fig. 5A-F). Some blood cells aggregate to form nodules (Fig. 5G-H). Careful analysis reveals that wasp infection induces the anterior-most lymph gland lobes to disperse at their peripheries (Fig. 6C, D).
We present representative data with Toll signal transduction pathway components Dorsal and Sp&auml;tzle (Figs. 4,5,7), and its target Drosomycin (Fig. 6), to illustrate how specific changes in the lymph gland and hemocoel can be studied after wasp infection. The dissection protocols described here also yield the wasp eggs (or developing stages of wasps) from the host hemolymph (Fig. 8).

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

Parasitoid (parasitic) wasps constitute a major class of natural enemies of many insects including Drosophila melanogaster. We will introduce the techniques to propagate these parasites in Drosophila spp. and demonstrate how to analyze their effects on immune tissues of Drosophila larvae.

의 기생충 말벌에 대한 소개<em&gt; Drosophila</em&gt; 그리고 Antiparasite 면역 반응

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

A complex interaction between the immune response and host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in particular, is known to occur as a response to infection in mammals 1 and has also recently been described in Drosophila melanogaster2. It is generally accepted that sleep is beneficial to the host during an infection and that it is important for the maintenance of a robust immune system3,4. However, experimental evidence that supports this hypothesis is limited4, and the function of excess sleep during an immune response remains unclear. We have used a multidisciplinary approach to address this complex problem, and have conducted studies in the simple genetic model system, the fruitfly Drosophila melanogaster. We use a standard assay for measuring locomotor behavior and sleep in flies, and demonstrate how this assay is used to measure behavior in flies infected with a pathogenic strain of bacteria. This assay is also useful for monitoring the duration of survival in individual flies during an infection. Additional measures of immune function include the ability of flies to clear an infection and the activation of NF&kappa;B, a key transcription factor that is central to the innate immune response in Drosophila. Both survival outcome and bacterial clearance during infection together are indicators of resistance and tolerance to infection. Resistance refers to the ability of flies to clear an infection, while tolerance is defined as the ability of the host to limit damage from an infection and thereby survive despite high levels of pathogen within the system5. Real-time monitoring of NF&kappa;B activity during infection provides insight into a molecular mechanism of survival during infection. The use of Drosophila in these straightforward assays facilitates the genetic and molecular analyses of sleep and the immune response and how these two complex systems are reciprocally influenced.

Quantitative Measurement of the Immune Response and Sleep in Drosophila

To understand a link between the immune response and behavior, we describe a method to measure locomotor behavior in Drosophila during bacterial infection as well as the ability of flies to mount an immune response by monitoring survival, bacterial load, and real-time activity of a key regulator of innate immunity, NF&kappa;B.

면역 반응과 수면에서의 양적 측정<em&gt; Drosophila</em

A complex interaction between the immune response and  host behavior has been described in a wide range of species. Excess sleep, in  particular, is known ...

Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. Conversely, viruses have evolved intricate strategies to evade and exploit host immune signaling for survival and propagation. Viral immune evasion, entailing host defense and viral evasion, provides one of the most fascinating and dynamic interfaces to discern the host-virus interaction. These studies advance our understanding in innate immune regulation and pave our way to develop novel antiviral therapies.
Murine &#947;HV68 is a natural pathogen of murine rodents. &#947;HV68 infection of mice provides a tractable small animal model to examine the antiviral response to human KSHV and EBV of which perturbation of in vivo virus-host interactions is not applicable. Here we describe a protocol to determine the antiviral cytokine production. This protocol can be adapted to other viruses and signaling pathways.
Recently, we have discovered that &#947;HV68 hijacks MAVS and IKK&#946;, key innate immune signaling components downstream of the cytosolic RIG-I and MDA5, to abrogate NF&#922;B activation and antiviral cytokine production. Specifically, &#947;HV68 infection activates IKK&#946; and that activated IKK&#946; phosphorylates RelA to accelerate RelA degradation. As such, &#947;HV68 efficiently uncouples NF&#922;B activation from its upstream activated IKK&#946;, negating antiviral cytokine gene expression. This study elucidates an intricate strategy whereby the upstream innate immune activation is intercepted by a viral pathogen to nullify the immediate downstream transcriptional activation and evade antiviral cytokine production.

We describe a protocol to measure the antiviral cytokine production in mice infected with a model herpesvirus, murine gamma herpesvirus 68 (&#947;HV68) that is closely-related to human Kaposi&#8217;s sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) and Epstein-Barr virus (EBV). Utilizing genetically modified mouse strains and mouse embryonic fibroblasts (MEFs), we assessed the antiviral cytokine production both in vivo and ex vivo. &#8220;Reconstituting&#8221; the expression of innate immune components in knockout embryonic fibroblasts by lentiviral transduction, we further pinpoint specific innate immune molecules and dissect the key signaling events that differentially regulate the antiviral cytokine production.

사이토 카인 생산의 바이러스 성 회피에 타고난 면역 신호를 해부

In response to a viral infection, the host innate immune response is activated to up-regulate gene expression and production of antiviral cytokines. ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Macrophages are key phagocytic innate immune cells. When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the pathogen, produce various cytokines and chemokines to recruit and stimulate other immune cells, and present antigens to stimulate the adaptive immune response. Thus, being able to efficiently manipulate macrophages with techniques such as RNA-interference (RNAi) is critical to our ability to investigate this important innate immune cell. However, macrophages can be technically challenging to transfect and can exhibit inefficient RNAi-induced gene knockdown. In this protocol, we describe methods to efficiently transfect two mouse macrophage cell lines (RAW264.7 and J774A.1) with siRNA using the Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle System and describe procedures to maximize the effect of siRNA on gene knockdown. Moreover, the described methods are adapted to work in 96-well format, allowing for medium and high-throughput studies. To demonstrate the utility of this approach, we describe experiments that utilize RNAi to inhibit genes that regulate lipopolysaccharide (LPS)-induced cytokine production.

In this protocol, we describe methods to efficiently transfect murine macrophage cell lines with siRNAs using the Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle System, stimulate the macrophages with lipopolysaccharide, and monitor the effects on inflammatory cytokine production.

마우스 대 식세포의 타고난 면역 반응을 조사하기 위해 RNA 간섭을 사용하여

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in mice. Recently, myeloid differentiation factor 88 (MyD88) signaling was shown to be important for initial T cell priming and memory T cell development during WNV NS4B-P38G mutant infection. In this study, two flow cytometry-based methods &#8211; an in vitro T cell priming assay and an intracellular cytokine staining (ICS) &#8211; were utilized to assess dendritic cells (DCs) and T cell functions. In the T cell priming assay, cell proliferation was analyzed by flow cytometry following co-culture of DCs from both groups of mice with carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE) - labeled CD4+ T cells of OTII transgenic mice. This approach provided an accurate determination of the percentage of proliferating CD4+ T cells with significantly improved overall sensitivity than the traditional assays with radioactive reagents. A microcentrifuge tube system was used in both cell culture and cytokine staining procedures of the ICS protocol. Compared to the traditional tissue culture plate-based system, this modified procedure was easier to perform at biosafety level (BL) 3 facilities. Moreover, WNV- infected cells were treated with paraformaldehyde in both assays, which enabled further analysis outside BL3 facilities. Overall, these in vitro immunological assays can be used to efficiently assess cell-mediated immune responses during WNV infection.

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

Two flow cytometry-based methods &#8211; an in vitro T cell priming assay and intracellular cytokine staining were utilized to measure antigen presenting capacity of dendritic cells and antigen-specific T cell responses to a West Nile virus mutant infection in mice.

웨스트 나일 바이러스 돌연변이 균주의 감염에에서 MyD88 매개 세포 면역 반응의 생체 외 분석

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of causing systemic disease in both fish and humans. A better understanding of S. iniae disease pathogenesis requires an appropriate model system. The genetic tractability and the optical transparency of the early developmental stages of zebrafish allow for the generation and non-invasive imaging of transgenic lines with fluorescently tagged immune cells. The adaptive immune system is not fully functional until several weeks post fertilization, but zebrafish larvae have a conserved vertebrate innate immune system with both neutrophils and macrophages. Thus, the generation of a larval infection model allows the study of the specific contribution of innate immunity in controlling S. iniae infection.
The site of microinjection will determine whether an infection is systemic or initially localized. Here, we present our protocols for otic vesicle injection of zebrafish aged 2-3 days post fertilization as well as our techniques for fluorescent confocal imaging of infection. A localized infection site allows observation of initial microbe invasion, recruitment of host cells and dissemination of infection. Our findings using the zebrafish larval model of S. iniae infection indicate that zebrafish can be used to examine the differing contributions of host neutrophils and macrophages in localized bacterial infections. In addition, we describe how photolabeling of immune cells can be used to track individual host cell fate during the course of infection.

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Here, we present a protocol for the generation and imaging of a localized bacterial infection in the zebrafish otic vesicle.

의 Zebrafish의 애벌레 모델의 선천성 면역 반응의 비 침습적 영상<em&gt; 연쇄상 구균 iniae</em&gt; 감염

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the analysis of immune mediators in fluid eluates for the study of the airway topical immune signature, without the need for stimulation procedures (often used by other techniques). The mucosal lining fluid is sampled on a strip of filter paper placed at the anterior part of the inferior turbinate and left for 2 min of absorption. Analytes are eluted from the filter papers, and the extracted protein-based eluates are analyzed by an electrochemiluminescence-based immunoassay, allowing for the high-sensitivity quantification of low- and high-level analytes in the same sample. We measured the in vivo levels of 20 preselected immune mediators related to specific immune signaling pathways in the upper airway mucosa, but the technique is not limited to that specific panel or sampling site. The technique was first implemented in 7-year-old children from the Copenhagen Prospective Studies on Asthma in Childhood2000 (COPSAC2000) cohort with allergic rhinitis. It was thereafter used in the longitudinal COPSAC2010 birth cohort, sampled at 1 month, 2 years, and 6 years of age and at instances of acute respiratory symptoms. We successfully obtained and analyzed samples from 620 (89%) of 700 1-month-old children; a few samples were below the assay detection limit (reported as the median (Inter-Quartile Range (IQR)). The number of samples below the detection limit (i.e.&#160;from 0 to the set point for the lower limit of detection) for each mediator was 29 (7.25 - 119.5). This technique enables the quantification of the in vivo airway mucosal immune profile from birth, can be applied longitudinally, and can be applied to studies on the effect of genetics and early-life environmental exposures, pathophysiology, endotyping, and monitoring of respiratory diseases, and development and evaluation of novel therapeutics.

Noninvasive Sampling of Mucosal Lining Fluid for the Quantification of In Vivo Upper Airway Immune-mediator Levels

This protocol describes a noninvasive technique for the sampling of undisturbed mucosal lining fluid from the upper airways. It can be used to perform the quantification of in vivo levels of protein mediators, such as cytokines and chemokines, in subjects of all ages.

상부 기도 면역 중재자 수준 Vivo에서 의 정량화에 대 한 점 막 안 대기의 비 침범 성 샘플링

This protocol describes noninvasive sampling of undisturbed upper airway mucosal lining fluid. It also details the extraction procedure used prior to the ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling and cellular processes that control efferocytosis. This quantification can be difficult to perform as apoptotic cells are often efferocytosed piecemeal, thus necessitating methods which can accurately delineate between the efferocytosed portion of an apoptotic target versus residual unengulfed cellular fragments. The approach outlined herein utilizes dual-labeling approaches to accurately quantify the dynamics of efferocytosis and efferocytic capacity of efferocytes such as macrophages. The cytosol of the apoptotic cell is labeled with a cell-tracking dye to enable monitoring of all apoptotic cell-derived materials, while surface biotinylation of the apoptotic cell allows for differentiation between internalized and non-internalized apoptotic cell fractions. The efferocytic capacity of efferocytes is determined by taking fluorescent images of live or fixed cells and quantifying the amount of bound versus internalized targets, as differentiated by streptavidin staining. This approach offers several advantages over methods such as flow cytometry, namely the accurate delineation of non-efferocytosed versus efferocytosed apoptotic cell fractions, the ability to measure efferocytic dynamics by live-cell microscopy, and the capacity to perform studies of cellular signaling in cells expressing fluorescently-labeled transgenes. Combined, the methods outlined in this protocol serve as the basis for a flexible experimental approach that can be used to accurately quantify efferocytic activity and interrogate cellular signaling pathways active during efferocytosis.

Efferocytosis, the phagocytic removal of apoptotic cells, is required to maintain homeostasis and is facilitated by receptors and signaling pathways that allow for the recognition, engulfment, and internalization of apoptotic cells. Herein, we present a fluorescence microscopy protocol for the quantification of efferocytosis and the activity of efferocytic signaling pathways.

단일 세포 형광 현미경 검사 법에 의해 Efferocytosis의 정량화

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence rates of S. aureus infection climbing annually, there is a demand for additional research in its&#160;pathogenicity. Animal models of infectious disease advance our understanding of the host-pathogen response and lead to the development of effective therapeutics. Neutrophils play a primary role in the innate immune response that controls S. aureus infections by forming an abscess to wall off the infection and facilitate bacterial clearance; the number of neutrophils that infiltrate an S. aureus skin infection often correlates with disease outcome. LysM-EGFP mice, which possess the enhanced green fluorescent protein (EGFP) inserted in the Lysozyme M (LysM) promoter region (expressed primarily by neutrophils), when used in conjunction with in vivo whole animal fluorescence imaging (FLI) provide&#160;a means of quantifying neutrophil emigration noninvasively and longitudinally into wounded skin. When combined with a bioluminescent S. aureus strain and sequential in vivo whole animal bioluminescent imaging (BLI), it is possible to longitudinally monitor both the neutrophil recruitment dynamics and in vivo bacterial burden at the site of infection in anesthetized mice from onset of infection to resolution or death. Mice are more resistant to a number of virulence factors produced by S. aureus that facilitate effective colonization and infection in humans. Immunodeficient mice provide a more sensitive animal model to examine persistent S. aureus infections and the ability of therapeutics to boost innate immune responses. Herein, we characterize responses in LysM-EGFP mice that have been bred to MyD88-deficient mice (LysM-EGFP&#215;MyD88-/- mice) along with wild-type LysM-EGFP mice to investigate S. aureus skin wound infection. Multispectral simultaneous detection enabled study of neutrophil recruitment dynamics by using in vivo FLI, bacterial burden by using in vivo BLI, and wound healing longitudinally and noninvasively over time.

A Mouse Model to Assess Innate Immune Response to Staphylococcus aureus Infection

An approach is described for real-time detection of the innate immune response to cutaneous wounding and Staphylococcus aureus infection of mice. By comparing LysM-EGFP mice (which possess fluorescent neutrophils) with a LysM-EGFP crossbred immunodeficient mouse strain, we advance our understanding of infection and the development of approaches to combat infection.

마우스 모델을 평가 타고 난 면역 반응 포도 상 구 균 감염

Staphylococcus aureus (S. aureus)&#160;infections, including methicillin resistant stains, are an enormous burden on the healthcare system. With incidence ...