저자는 작은 동물 초음파 이미징 플랫폼의 사용에 대한 자신의 명령에 대한 종양 세포 라인과 벤 Deeley의 바이러스 전달을 수행하는 엘리 아나 Beraldi을 인정하고 싶습니다. 이 프로젝트는 독일의 재단 시스템에 의해 지원되었다 (DFG, JA 2117/1-1 : 1), 캐나다 암 협회 연구소 및 밴쿠버 연안 건강 연구소에서 가르 의사 과학자 상. 초음파 이미징 플랫폼은 혁신에 대한 캐나다 재단에 의해 투자되었다.

모든 동물의 절차는 동물 보호에 캐나다위원회 (CCAC)의 지침에 따라 수행 하였다. 프로토콜은 브리티시 컬럼비아 대학의 동물 관리위원회 (: A10-0192 프로토콜 번호)에 의해 승인되었다. 1. 세포주의 제조 <ol><li> DNA 지문 (7)에 의해 각각 인간 방광암 세포주의 신원을 확인한다. </li><li> 생물 발광에 의한 이종 이식 종양의 성장 분석을 위해, 개똥 벌레 루시퍼 라제 유전자를 나르는 3 렌티 바이러스 구성체 세포주를 형질. </li><li> 해동 및 가습 된 5 % CO 2 분위기에서 37 ° C에서 10 % 태아 소 혈청 (FBS)으로 둘 베코 변성 이글 배지에 존재하는 세포 라인 (DMEM)를 확장. 통로 세포 적어도 3 배 그러나 3개월 초과 문화 시간을 피할 수 있습니다. </li></ol> 2. 세포 현탁액의 준비 <ol><li> 리겔을 해동. 아래의 온도를 유지젤의 점도가 증가를 방지하기 위해 4 ° C에서. </li><li> 70 % 합류에 세포를 Trypsinize 정상적인 성장 배지에서 중단. </li><li> 혈구 또는 자동 세포 계수기로 세포 수를 계산합니다. </li><li> 200 X g에서 5 분 세포 현탁액을 스핀. 뜨는을 제거합니다. </li><li> (8-15 × 106 / ㎖)을 이용 세포주에 따라 원하는 성장 동역학이다 원하는 세포 농도에 도달하기 위하여 DMEM (10 % FBS) 및 마트 리겔 (1:1 비율)의 적절한 부피를 추가. 종양 세포 현탁액의 주입 부피는 40 ㎕를 할 것이다. </li><li> 로 pipetting 아래로 (P1000)에 의해 잘 혼합, 서스펜션에 공기 방울을 생성하지 마십시오. </li></ol> 3. 동물의 준비 참고 : 지원 단계 4.7에서 요도 카테터에 대한 잠재적 인 필요를, 여성 마우스는이 동물 모델에서 선호하는 성별입니다. <ol><li> 주택의 쥐 기관 및 국가 동물 보호 번지에 따라idelines. 마우스를 포함한 모든 실험 윤리위원회의 승인을 얻습니다. </li><li> 3 % 이소 플루 란 / 산소의 혼합물로 마우스를 마취. 동물의 적절한 마취 (발가락 핀치에 응답하지 않는 등)를 확인합니다. </li></ol> 4. 실험 설정 <ol><li> 평면 단단한 플라스틱 소재 [그림 2 I] 모든 종류의에서 방광 안정화를 잘라. 조심스럽게 끈을 검사하고 마우스에 적용하기 전에 날카로운 모서리를 제거합니다. </li><li> 활력 징후의 지속적인 모니터링과 작은 동물 이미징 플랫폼의 [그림 1 I] 가열 된 영상 테이블에 동물을 탑재합니다. [그림 1 III] 고무 밴드와 낮은 사지를 고정합니다. </li><li> 2 % 클로르헥시딘 글루코 네이트 복부를 소독 및 멸균 면봉으로 피부를 닦아냅니다. </li><li> 방광 안정화 스트랩 방광 [그림 2 II]를 고정시킨다. 따라서, 회피단계 5.6 교내 주입하는 동안 방광 피해야합니다. </li><li> 하복부에 무균 초음파 젤을 적용합니다. </li><li> 천천히 초음파 scanhead (주파수 40 메가 헤르츠) 피부에 [그림 1 IV] (45 ~ 70 °의 두개골 각도와 길이를) 접근하고 초음파 화면에서 방광 [그림 3 I]를 시각화. </li><li> 방광이 비어 있으면, 경 요도 24 G의 angiocatheter 통해 50 ㎕의 멸균 따뜻한 인산 완충 식염수 (PBS)로 채운다. </li></ol> 5. 방광 벽의 레이어의 분리 <ol><li> PBS로 가득하고 30 G에 연결된 1.0 ML의 주사기를 부착, ¾ 바늘의 주사기 클램프 (전방 감독 베벨). </li><li> 30 ~ 45 °의 각도 단지 치골 위의 피부를 향해 바늘 (초음파 scanhead의 길이 방향 축에 대해 80 ~ 90 ° [그림 1]) 위치. </li><li> 바늘을 감지초음파 화면. </li><li> 천천히 피부와 복부 벽의 근육 [그림 3 II]를 관통. </li><li> (현재 후방 감독) 바늘 180 °의 경사를 켭니다. </li><li> 점막을 관통하지 않고 방광 벽에 바늘의 끝 부분을 삽입 [그림 3 III] </li><li> 천천히 인공 공간 [그림 3 IV]를 만들기 위해 근육 층과 점막 사이의 PBS의 50 μl를 주입. 참고 : 점막이 실수 단계 5.6시 천공 된 경우, 천천히 바늘을 당겨 점막 층은 바늘 끝을 통해 다시 반전 한 후 PBS의 50 μl를 주입. </li><li> 바늘을 철회. </li></ol> 6. 방광암 세포의 교내 접종 <ol><li> 30 G와 (리겔에 현탁 암 세포로 가득) 제 1.0 ML의 주사기를 부착, ¾ 주사기 클램프에 바늘. </li><li> 동일하게 바늘의 선단을 안내단계 5.7에서 생성 된 PBS-가득한 공간. </li><li> 이 공간에 세포 현탁액의 40 μl를 주입 [3 V 및 VI 피규어]. </li><li> 바늘을 철회. </li></ol> 7. 사후 중재 적 치료 (Supportive Care) <ol><li> 이미징 플랫폼에서 마우스를 분리합니다. </li><li> 마취에서 회복하는 동안 지속적인 감시 따뜻하고 편안한 환경에서 동물을 유지합니다. </li><li> 의식을 회복하고 정상적인 보행을 재개 한 후, 자신의 홈 케이지에 다시 동물을 배치합니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+orthotopic+models+for+bladder+cancer+research.">Mouse orthotopic models for bladder cancer research.</a> BJU Int. 104, 1286-1291 (2009).</li><li>Kubota, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+models+of+human+cancer+xenografted+in+the+nude+mouse:+the+importance+of+orthotopic+transplantation.">Metastatic models of human cancer xenografted in the nude mouse: the importance of orthotopic transplantation.</a> J. Cell. Biochem. 56, 4-8 (1994).</li><li>Hadaschik, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging.">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU Int. 100, 1377-1384 (2007).</li><li>Kang, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Orthotopic+Bladder+Tumor+Model+and+the+Evaluation+of+Intravesical+saRNA+Treatment.">An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment.</a> J. Vis. Exp. (65), (2012).</li><li>Dobek, G. L., Godbey, W. 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R., Heston, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravesical+liposome-mediated+interleukin-2+gene+therapy+in+orthotopic+murine+bladder+cancer+model.">Intravesical liposome-mediated interleukin-2 gene therapy in orthotopic murine bladder cancer model.</a> Gene Ther. 7, 844-851 (2000).</li><li>Dinney, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice.">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> J. Urol. 154, 1532-1538 (1995).</li><li>Black, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validating+bladder+cancer+xenograft+bioluminescence+with+magnetic+resonance+imaging:+the+significance+of+hypoxia+and+necrosis.">Validating bladder cancer xenograft bioluminescence with magnetic resonance imaging: the significance of hypoxia and necrosis.</a> BJU Int. 106, 1799-1804 (2010).</li></ol>

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암 치료의 거의 모든 주요 발전은 임상 시험을 시작하기 전에 동물 모델에서 테스트가 필요합니다. 암의 동물 모델은 생체 내에서 종양 생물학을 연구하는 연구자 수 있도록 필수적인 도구입니다. 소성을 이종 이식 모델은 1,2 금 표준을 유지하고 (셀 라인의 선택의 측면에서) 가장 유연성을 제공하고, 가장 실용적인 유틸리티를 계속합니다. 예시 된 절차는 우리가 100 %의 기술적 성공률 세 가지 다른 세포 라인의 초음파 유도 경피적 주사로 이종 이식 종양을 설립 이전에 Dinney 등. (12)에 의해 기술 된 동 소성 모델의 최소 침습 수정합니다. 지속적인 추적 관찰 기간 동안, 생쥐의 98 %가 종양의 부피 상수의 증가를 보여 주었다. 최소 침습 기술을 수행함으로써 우리는 교내 모델의 기존의 한계를 해결 할 수 있었다. respe 게다가동물 복지를 cting,이 절차의 감소 침입은 수술 합병증의 수를 감소시켜 생체 실험의 재현성에 기여한다. 그것은 매우 복부 개복 수술과 상처 봉합에 대한 관련 필요성을 피하기 위해 효과적인 시간입니다. 우리는 (1.6 ±) 3.4 분에 크게 동물 당 절차 시간을 단축 할 수 있었다. 그러나, 우리의 새로운 접근 방식의 주요 장점은 정확성입니다. 고해상도 초음파는 우리가 방광 벽의 점막 아래에 생리 식염수 주입에 의해 생성 된 공간을 시각화 할 수 있습니다. 이 첫 번째 단계의 주입은 제 2 단계에서 종양 세포 주입을 촉진하고 종양 세포 누출의 위험을 최소화한다. 이것은 바늘 배치를 시각화하는 것은 불가능하다 사출의 정확한 깊이에 관한 불확실성의 요소가 항상 존재 개복 후의 벽내 주입 기술에 대조. 또한, 우리는 엄격히 전방 방광벽에 종양 세포를 접종 한, 종양 growt후부 방광 벽에 ​​시간을 피할 수 있습니다. 그 후 요관 구멍의 근접 종양의 성장으로 인해 방해 합병증의 비율은 매우 드문 경우입니다. 이 첨부 효과는 더 이상 성장과 치료 기간을 수 있습니다. 초음파 유도 종양 접종의 주요 제한은 적절한 기술 장비에 대한 필요성이다. 따라서이 절차의 성능 가능성이 인간의 암 동물 모델을 전문으로하는 센터로 제한됩니다. 여기에는 새로운 동물 모델링에 전문성을 갖춘 이들 기관 및 단체의 외부 연구 그룹 간의 협력을 장려해야한다. 초음파 영상과 약간의 손재주에 대한 지식에 의존하지만,이 모델은 유능한지도 아래 배우기 쉽습니다. 절차의 주요 단계는 생리 식염수로 방광 벽에 ​​인공 공간 submucosally의 창조이다. 이 공간은 천공 O없이 생성되면점막층 F를, 그것은 몇 분 동안 안정적으로 유지. 종양 세포를 접종하기 위해이 공간에 두 번째 바늘의 지침은 비교적 간단하다. 점막하 공간을 만드는 동안 주요 합병증은 방광 루멘에 바늘 구멍 뚫기입니다. 점막하 공간의 창조는, 그러나 가능한 남아있다. 바늘이 방광 벽으로 천천히 회수되어야하고 식염수 점막층은 바늘의 팁 위에 대칭 갈때 주입했다. 이 기동 후 점막하 공간은 덜 안정하다 (식염수 30-60 초 이내 방광 루멘 탈출한다) 및 종양 세포의 주입은 신속하게 수행되어야한다. 방광 내강으로 종양 세포의 유출은 점막의 천공 이러한 경우에 발생할 수있다. 교내 공간에서 종양 세포의 손실이 추적 관찰 기간 동안 감소 종양 볼륨을 초래할 수도 있지만, 우리는 어떤 방광 종양 흡수를 관찰 적이 없다. 또 다른 잠재적 인 Complication는 주입 채널을 통해 복강에 종양 세포의 누출이다. 우리는 (50) 동물의 하나의 복강 내 종양 세포의 확산을 관찰하고, 이것은 우리의 첫 번째 시도 중 하나가 발생했습니다. 우리는 너무 큰 종양 세포 현탁액 부피의 주입이 때문이다. 이것은 50-40 μL의 볼륨을 줄이는 것이 더 이상의 복강 내 유출의 결과는 사실에 의해 지원되었다. 쥐 동소 방광 암 이종 이식이 최소 침습 접종은 동일하게 조사 및 동물 모두를 혜택을 기존의 &quot;교내 모델&quot;의 혁신적인 변경을 나타냅니다. 이 모델의 장점은 최소한의 침습적 인 방식으로 소성을 이종 이식 종양을 확립하기 위해 신장, 전립선, 간 등의 다른 장기에의 적응을 권장합니다.

암 연구는 종양 생물학에 대한 우리의 이해를 심화하기 위해 환자의 종양에서 유래 세포주를 사용하여 인간의 암 동물 모델에 따라 달라집니다. 다른 치료 전략 하에서 생체 내 성장 분석 뮤린 동소 방광암 모델은 참조 표준 1,2 남아있다. 면역 결핍 마우스 (이종 이식 모델)에서 인간의 방광 암 세포의 접종은 방광 내 점적에 방광 벽에 ( &quot;방광 모델&quot;) 3,4,5 또는 직접 분사 ( &quot;교내 모델&quot;) 6.7을 사용합니다. 두 가지 기술로는 8,9 래트에서 수행 될 수있다. 방광 내 점적은 새로운 치료 에이전트의 후속 방광 점적 의무가 있습니다 방광의 rats에서 방광 상피 세포의 표면에 종양의 형성을 유도한다. 그러나,이 방법을 통해 전달 될 때 안정적이다 종양 형성 세포 라인의 개수는 제한된다D 이들 세포주 KU7 중 하나는, 최근 헬라 4,10 것으로 입증되었다. 방광 내 점적 또한 시간으로 인해 필요한 체류 시간을 소모하고, 빈번히 요도, 요관, 신우 및 11 등 요로의 인접 요소에서 종양의 성장을 유도한다. 또한, 방광 내 점적은 종종 요관 방광을 입력 방광의 바닥에 종양의 성장을 이끌고, 이는 상부 협착과 동반 신장 장애를 일으킬 수 있습니다. 전신 치료에 적합한 차 침략 방광 암 이종 이식은 방광 벽 (12)에 종양 세포를 직접 주입에 의해 만들어집니다. 많은 세포주가이 모델에서 적절히 성장하지만, 그것의 제한은 복부 절개 (13)의 필요성에 관한 모델의 침입이다. 또한이 모델은 때문에 정확하게 근육의 벽에 세포를 주입의 기술적 어려움으로 배우고 도전방광. 쥐에서 동소 일차 침습적 방광 암 이종 이식을 확립하기 위해 새로운 접근 방식은 &quot;벽내 모델&quot;기존의 단점을 해결하기 위해 우리 부서에서 개발되었다. 우리는 성공적으로 설립 침습 모형을 대체하기 위해 새로운 기술의 결과 전방 방광벽에 방광암 세포의 경피적, 초음파 유도 주사를 최적화 할 수 있었다. 또한 우리는 잠재적으로 &quot;교내 모델&quot;의 정확성과 재현성을 강화했다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col span="4" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine gluconate (2%)</td>
			<td>Aplicare</td>
			<td>82-319</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="121">
			<td height="121" style="height:121px;width:64px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3008101</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:64px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3007103</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Matrigel</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">356234</td>
			<td style="width:64px;">Keep between 2-4&#8304;C</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:64px;">Baxter Corporation</td>
			<td style="width:64px;">402-069-02</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:64px;">Trypsin (0.25%)</td>
			<td style="width:64px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:64px;">SH3004202</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Syringe (1ml)</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">309659</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">Hypodermic needle (30G; &#190; inch)</td>
			<td style="width:64px;">Kendall</td>
			<td align="right" style="width:64px;">830340</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">Angiocatheter (24G)</td>
			<td style="width:64px;">BD Bioscience</td>
			<td align="right" style="width:64px;">381112</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">Vevo 770 small animal imaging platform</td>
			<td style="width:64px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="101">
			<td height="101" style="height:101px;width:64px;">RMV 706 ultrasound scanhead</td>
			<td style="width:64px;">VisualSonics</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:64px;">IVIS Lumina III</td>
			<td style="width:64px;">&#160;Caliper Life Science</td>
			<td style="width:64px;"></td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimally invasive establishment of murine orthotopic bladder xenografts

동 소성 방광 암 이종 이식은 생체 내에서 세포 분자 조작과 새로운 치료제를 연구하는 골드 표준입니다. 적합한 세포주 방광 점적 (nonmuscle 침략 성장 모델) 또는 방광 벽에 ​​교내 주사 (침략의 성장 모델)에 의해 하나 접종. 두 절차가 복잡하고 매우 시간 소모적이다. 또한, 표면 모델은 종양 형성 다음 점안 세포주의 부족으로 인한 단점을 갖는다. 벽내 주입은, 다른 한편으로는, 절차의 침입 및 호스트 마우스 연관된 병적 상태에 의해 손상된다. 마음에 이러한 단점과 함께, 우리는 동소 방광 암 이종 이식을 만들기위한 최소 침습적 방법을 개발하기 위해 이전의 방법을 수정했습니다. 초음파지도를 사용하여 우리는 성공적으로 방광암 세포주 UM-UC1, UM-UC3 및 UM-경피적 접종을 수행 한(50)를 누드로 UC13. 우리는이 방법이 효율적으로 정확하고 안전한 시간이 있음을 입증 할 수 있었다. 이 기술로, 초기 공간 PBS와 함께 방광 점막 아래에 작성되고, 종양 세포는 그 다음 제 2 단계에서 그 공간에 주입된다. 종양의 성장은 생물 발광 이미징 및 초음파 정기적으로 모니터링된다. 평균 종양 볼륨은 연구 기간에 우리의 50 마우스 중 하나를 제외하고 모두에서 꾸준히 증가했다. 본원에서, 최소 침습 신속하고 고정밀 방식 방광 암 이종 이식을 허용 접종이 신규 한 방법은, 기존의 모델을 대체했다.

<html> 세 가지 종양 세포 라인 (UM-UC1의 루크, UM-UC3의 루크와 UM-UC13의 루크)의 교내 주사를 세 번 연속 일에 초음파지도하에 50 동물에서 수행되었다. 접종을 효율적으로 수행되었다 (시간 5.7 분 / 동물을 의미) 및 내 또는 사후 중재 적 합병증과 관련되지 않았습니다. 종양 성장의 모니터링은 초음파 이미징 및 생물 발광에 의해 수행되었다. 하루 # 3에서 종양이 50 동물의 전방 방광 [그림 4 I] 초음파에 의해 감지 될 수있다. 생쥐의 98 %는 추적 관찰 기간 동안 일정 종양의 성장을 보였다 [그림 4와 그림 5]. UM-UC3의 루크의 접종에 따라, 하나의 마우스 복강 내 종양의 보급 및 제 동물 [표 1] 하루 # 7 후 involuted 종양을 개발했다. 이것은이 새로운 기술을 접종 마우스의 첫 번째 그룹이었다. NT &quot;&gt; 마우스는 하루 # 24, # 28에 희생되었고, # 37에 각각 UM-UC3의 루크, UM-UC1의 루크와 UM-UC13의 루크, 접종 후. 이종 이식 종양은 헤 마톡 실린 및 에오신에 수확하여 조사 하였다 (H &amp; E ) 섹션. 모든 종양은 근육 침략했고, 일부는 perivesical 지방에 침투하지만, 인접 장기에 어떤 침략은 [그림 6 I]. UM-UC13의 루크 종양을 갖는 마우스의 60 %와 UM-UC3의 루크 베어링 생쥐의 20 %는 관찰되지 않았다 종양은 염색 [그림 6 II]를 H &amp; E에 의해 확인 된 후 복막 림프절 전이를 개발했다. <img alt="그림 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig1.jpg" /> 그림 1. 이미지 및 실험 장치의 개략도. 마우스는 가열 작업 테이블 (I)에 탑재되며, &lt;(마취하에 개최강한&gt; II) 3 % ​​이소 플루 란 / 산소 혼합. 낮은 사지는 고무 밴드 (III)로 고정되어 있습니다. 피부 (45 ~ 70 °의 두개골 각도 세로 정렬)에 초음파 scanhead (IV)에 접근 한 후 방광 (V)가 초음파 화면에 시각화된다. 30 G 바늘 (VI)와 주사기는 30-45 °의 각도 (초음파 scanhead의 종축에 대하여 80 ~ 90 °)에서 피부로 안내된다. <img alt="그림 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig2.jpg" /> 그림 2. 방광의 고정. 치수 및 방광 안정화 스트랩 (I)를 구성하는 그림은 스트랩은 낮은 복부에 부착 방광 (II)를 움직이게된다. 의 따라서 회피<html> 교내 주입하는 동안 방광은 피할 수 있습니다. <img alt="그림 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig3.jpg" /> 그림 3. 초음파 화면 (I)에서 방광의 종양 세포의 접종 벽내. 시각화. 피부와 복부 벽의 근육의 천공 (II). 점막의 침투없이 방광 벽에 바늘을 삽입 (III). 근육 층과 느린 주입 후 점막 사이의 PBS (50 μL) (IV). 교내 인위적으로 만들어진 공간 (V, VI)에 리겔에 현탁 종양 세포. 1123fig4.jpg &quot;/&gt; 그림 4. . 초음파에 의한 후속 초음파에 의해 지속적인 후속 종양 부피의 유의 한 증가를 보였다 (I : 1 일 3 위, II : 1 일 7 위, III : 하루 # 13). <img alt="그림 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig5.jpg" /> 그림 5. 생물 발광에 의한 후속 생물 발광에 의해. 지속적인 후속 연구 기간 동안 발광의 지속적인 증가를 보여 주었다. <img alt="그림 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51123/51123fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51123/51123fig6.jpg" /> 그림 6. 이종 이식 종양과 림프절 전이의 조직학. 대표 이종 이식 TU의 토토 H &amp; E 섹션에서<html> MOR은 인접 장기 (I)에 침입하지 않고 근육에 침략적인 성장을 보여. UM-UC13의 루크 종양을 갖는 마우스의 60 %와 UM-UC3의 루크 종양 제시 후 복막 림프절 전이 (II)을 베어링 생쥐의 20 %. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="320"><colgroup><col span="5" /></colgroup><tbody><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> 접종 세포주 </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> UM-UC1의 루크 </td><td style="width:64px;"> UM-UC3의 루크 </td><td style="width:64px;"> UM-UC13의 루크 </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"> 마우스의 수 </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> (20) </td><td style="width:64px;"> 15 </td><td style="width:64px;"> 15 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> 볼륨 주입 μL </td>idth : 64px; &quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> (40) </td><td style="width:64px;"> (50) </td><td style="width:64px;"> (50) </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> 세포 수, 절대 </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 3.6 × 10 5 </td><td style="width:64px;"> 6 × 10 5 </td><td style="width:64px;"> 5.5 × 10 5 </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> 동물 당 시간, 분 </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 3.4 (1.6 ±) </td><td style="width:64px;"> 7.7 (3.7 ±) </td><td style="width:64px;"> 6.8 (2.9 ±) </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> 종양 발생 </td><td style="width:64px;"></td><td colspan="3" style="width:192px;"> 49 (98 %) </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"></td><td style="width:64px;"&gt; </td><td style="width:64px;"> 20 (100 %) </td><td style="width:64px;"> 14 (93 %) </td><td style="width:64px;"> 15 (100 %) </td></tr><tr height="81"><td height="81" style="height:81px;width:64px;"> 림프절 전이 </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 0 </td><td style="width:64px;"> 3 (20 %) </td><td style="width:64px;"> 9 (60 %) </td></tr><tr height="81"><td height="81" style="height:81px;width:64px;"> 후속 (일) </td><td style="width:64px;"></td><td style="width:64px;"> 28 </td><td style="width:64px;"> 22 [치료 전] </td><td style="width:64px;"> 28 [치료 전] </td></tr><tr height="61"><td height="61" style="height:61px;width:64px;"> 종양 부피 (μL) </td><td style="width:64px;"> 4 일 </td><td style="width:64px;"> 11.6 (± 1.3) </td><td style="width:64px;"> 12.5 (± 1.7) </td><td style="width:64px;"> 14.4 (± 1.3) </td></tr><tr height="20"><td height="61" row스팬 = &quot;2&quot;스타일 = &quot;높이 : 61px; 폭 : 64px;&quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> 끝 </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 394.6 (± 72.4) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 288.7 (± 66.1) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 78.3 (13.4 ±) </td></tr><tr height="41"><td height="41" style="height:41px;width:64px;"> 추적 조사 </td></tr><tr height="56"><td height="100" rowspan="2" style="height:100px;width:64px;"> 종양 발광 (광자 / 초) </td><td rowspan="2" style="width:64px;"> 4 일 </td><td style="width:64px;"> 4.6 × 10 8 </td><td style="width:64px;"> 2.0 × 10 8 </td><td style="width:64px;"> 5.8 × 10 8 </td></tr><tr height="44"><td height="44" style="height:44px;width:64px;"> (9.4 × 10 7 ±) </td><td style="width:64px;"> (3.7 × 10 7 ±) </td><td style="width:64px;"> (1.3 × 10 8 ±) </td></tr><tr height="23"><td height="67" rowspan="2"스타일 = &quot;높이 : 67px; 폭 : 64px;&quot;&gt; </td><td style="width:64px;"> 끝 </td><td style="width:64px;"> 1.9 × 10 10 </td><td style="width:64px;"> 1.4 × 10 10 </td><td style="width:64px;"> 1.5 × 10 10 </td></tr><tr height="44"><td height="44" style="height:44px;width:64px;"> 추적 조사 </td><td style="width:64px;"> (4.0 × 10 9 ±) </td><td style="width:64px;"> (2.3 × 10 9 ±) </td><td style="width:64px;"> (1.9 × 10 9 ±) </td></tr></tbody></table> 표 1. 초음파 유도 종양 세포 주입 - 절차 및 결과.

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Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts

차 침략 동 소성 방광 암 이종 이식을 접종하는 설치 방법은 개복 수술과 방광의 동원을 필요로한다. 이 절차는, 마우스에 상당한 이환율을 입히고 기술적으로 어렵고 시간 소모적이다. 따라서 우리는 경피적 접근 방식은 초음파 안내를 이용하는, 높은 정밀도를 개발했다.

쥐과 동 소성 방광 이종 이식의 최소 침습 설립

Orthotopic bladder cancer xenografts are the gold standard to study molecular cellular manipulations and new therapeutic agents&#160;in vivo. Suitable ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

15.8K 조회수.  University of British Columbia.  차 침략 동 소성 방광 암 이종 이식을 접종하는 설치 방법은 개복 수술과 방광의 동원을 필요로한다. 이 절차는, 마우스에 상당한 이환율을 입히고 기술적으로 어렵고 시간 소모적이다. 따라서 우리는 경피적 접근 방식은 초음파 안내를 이용하는, 높은 정밀도를 개발했다. 

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An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Murine 방광 암의 Orthotopic 모델

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

연구

의학

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder tumor model. The mouse model is established by urethral catheterization under inhaled general anesthetic. Chemical burn is then introduced to the bladder mucosa using intravesical silver nitrate solution to disrupt the bladder glycosaminoglycan layer and allows cells to attach. Following several washes with sterile water, human bladder cancer KU-7-luc2-GFP cells are instilled through the catheter into the bladder to dwell for 2 hours. Subsequent growth of bladder tumors is confirmed and monitored by in vivo bladder ultrasound and bioluminescent imaging. The tumors are then treated intravesically with saRNA formulated in lipid nanoparticles (LNPs). Tumor growth is monitored with ultrasound and bioluminescence. All steps of this procedure are demonstrated in the accompanying video.

Establishing an orthotopic bladder tumor model to evaluate antitumor effects of intravesically delivered saRNA and monitoring tumor growth by ultrasound and bioluminescent imaging.

Orthotopic 방광 종양 모델 및 Intravesical saRNA 트리 트먼트의 평가

We present a novel method for treating bladder cancer with intravesically delivered small activating RNA (saRNA) in an orthotopic xenograft mouse bladder ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

유전자 전달 연구 동소 방광암 모델

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Primary Orthotopic Glioma Xenografts Recapitulate Infiltrative Growth and Isocitrate Dehydrogenase I Mutation

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary orthotopic xenografts recapitulate the histopathological and molecular features of malignant glioma subtypes in preclinical animal models. To model WHO grades III and IV malignant gliomas in transplantation assays, human tumor cells are xenografted into an orthotopic site, the brain, of immunocompromised mice. In contrast to secondary xenografts that utilize cultured tumor cells, human glioma cells are dissociated from resected specimens and transplanted without prior passage in tissue culture to generate primary xenografts. The procedure in this report details tumor sample preparation, intracranial transplantation into immunocompromised mice, monitoring for tumor engraftment and tumor harvesting for subsequent passage into recipient animals or analysis. Tumor cell preparation requires 2 hr and surgical procedure requires 20 min/animal.

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary orthotopic xenografts recapitulate the histopathological and molecular features of malignant glioma subtypes in preclinical animal models.

1차 성우 성안 성액 제노이식은 침투 성장을 재구성하고 탈수소 효소 I 돌연변이를 이소염시분해합니다.

Malignant gliomas constitute a heterogeneous group of highly infiltrative glial neoplasms with distinct clinical and molecular features. Primary ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold standard treatment for the high-grade non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC). However, since the treatment-related side effects are relevant, newer biological response modifiers with a better benefit/side effects ratio are needed.
The tumour microenvironment can influence both tumour development and therapy efficacy. In order to obtain a good model, it is desirable to implant tumour cells in the organ from which the cancer originates.
In this protocol, we describe a method for establishing a tumour in the bladder cavity of female mice and subsequent delivery of therapeutic agents; the latter are exemplified by our use of Helicobacter pylori neutrophil activating protein (HP-NAP). A preliminary chemical burn of the mucosa, followed by the injection of mouse urothelial carcinoma cell line MB49 via urethral catheterization, enables the cells to attach to the bladder mucosa. After a period, required to allow an initial proliferation of the cells, mice are treated with HP-NAP, administrated again via catheterization. The anti-tumour activity of HP-NAP is evaluated comparing the tumour volume, the extent of necrosis and the degree of vascularization between vehicle- and HP-NAP-treated animals.

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Here the method to establish a syngeneic mouse model of orthotopic bladder tumour to evaluate the anti-tumour efficacy of the bacterial protein HP-NAP is described.

효능 평가<em&gt; H. 파이로리</em동소 이식 쥐 모델에서 방광암의 치료를위한 치료 도구로&gt; 단백질 HP-NAP

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

지방 조직의 종점에 이식 캡슐화 열 발생 Preadipocytes

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard open-chest transverse aortic constriction (TAC). Although transverse aortic constriction is a highly functional method for the induction of high pressure in the left ventricle, it is a more difficult and lengthy procedure due to its use of artificial ventilation with tracheal intubation. TAC is oftentimes also less survivable, as the newer method, MTAC, neither requires the cutting of the ribs and intercostal muscles nor tracheal intubation with a ventilation setup. In MTAC, as opposed to a thoracotomy to access to the chest cavity, the aortic arch is reached through a midline incision in the anterior neck. The thyroid is pulled back to reveal the sternal notch. The sternum is subsequently cut down to the second rib level, and the aortic arch is reached simply by separating the connective tissues and thymus. From there, a suture can be wrapped around the arch and tied with a spacer, and then the sternal cut and skin can be closed. MTAC is a much faster and less invasive way to induce left ventricular hypertension and enables the possibility for high-throughput studies. The success of the constriction can be verified using high-frequency trans-thoracic echocardiography, particularly color Doppler and pulsed-wave Doppler, to determine the flow velocities of the aortic arch and left and right carotid arteries, the dimension of the blood vessels, and the left ventricular function and morphology. A successful constriction will also trigger significant histopathological changes, such as cardiac muscle cell hypertrophy with interstitial and perivascular fibrosis. Here, the procedure of MTAC is described, demonstrating how the resulting flow changes in the carotid arteries can be examined with echocardiography, gross morphology, and histopathological changes in the heart.

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) conserves the essentials of regular transverse aortic constriction (TAC) while eliminating the use of a ventilator with tracheal intubation. It proves to be a highly desirable method for high-throughput studies on left ventricular overload, particularly in translational studies.

마우스의 최소 침습 가로 대동맥 수축

Minimally invasive transverse aortic constriction (MTAC) is a more desirable method for the constriction of the transverse aorta in mice than standard ...

An Anatomical Study of Nerves at Risk During Minimally Invasive Hallux Valgus Surgery

The growing popularity of minimally invasive surgical (MIS) procedures makes it necessary that new anatomical references arise, to aid in tridimensional orientation and localization of structures that are not directly visible to the surgeon. This is especially critical for structures at risk like nerves or blood vessels. Optimization of the handling of cadaveric material and the combination of multiple techniques compensate for the limited availability of adequate specimens. The described protocol combines anatomical plane-by-plane dissection and sectional anatomy of fresh-frozen specimens to help localize relevant structures, such as nerves, arteries, veins and to correctly position the portals during MIS procedures. Depiction of these structures in anatomy textbooks can differ from what is encountered in the surgical field; and for this reason, new anatomical studies with a surgical orientation are needed. However, this is a complex, time-consuming technique requiring specific training. The anatomical references described with the so-called 'clock method' provide the surgeon with an easy and reproducible system to locate the path of the nerves at risk in Hallux Valgus MIS procedures. This model can be extrapolated to many other minimally invasive surgical procedures.

Minimally invasive surgical (MIS) procedures rely on anatomical references to localize structures not directly visible to the surgeon. This manuscript describes a combined method of plane-by-plane dissection and sectional anatomy of fresh-frozen specimens to locate the structures at risk during MIS procedures.

최소 침 습 Hallux Valgus 수술 중 위험에 신경의 해부학 적 연구

The growing popularity of minimally invasive surgical (MIS) procedures makes it necessary that new anatomical references arise, to aid in tridimensional ...

Electromagnetic Navigation Transthoracic Nodule Localization for Minimally Invasive Thoracic Surgery

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or excision. Many of these nodules are identified and excised via minimally invasive thoracic surgery; however, subcentimeter and subsolid nodules are frequently difficult to identify intra-operatively. This can be mitigated by the use of electromagnetic transthoracic needle localization. This protocol delineates the step-by-step process of electromagnetic localization from the pre-operative period to the postoperative period and is an adaptation of the electromagnetically guided percutaneous biopsy previously described by Arias et al. Pre-operative steps include obtaining a same day CT followed by the generation of a three-dimensional virtual map of the lung. From this map, the target lesion(s) and an entry site are chosen. In the operating room, the virtual reconstruction of the lung is then calibrated with the patient and the electromagnetic navigation platform. The patient is then sedated, intubated, and placed in the lateral decubitus position. Using a sterile technique and visualization from multiple views, the needle is inserted into the chest wall at the prechosen skin entry site and driven down to the target lesion. Dye is then injected into the lesion and, then, continuously during needle withdrawal, creating a tract for visualization intra-operatively. This method has many potential benefits when compared to the CT-guided localization, including a decreased radiation exposure and decreased time between the dye injection and the surgery. Dye diffusion from the pathway occurs over time, thereby limiting intra-operative nodule identification. By decreasing the time to surgery, there is a decrease in wait time for the patient, and less time for dye diffusion to occur, resulting in an improvement in nodule localization. When compared to electromagnetic bronchoscopy, airway architecture is no longer a limitation as the target nodule is accessed via a transparenchymal approach. Details of this procedure are described in a step-by-step fashion.

Presented here is a protocol for lung nodule localization using dye marking via electromagnetically navigated transthoracic needle access. The technique described here can be accomplished in the peri-operative period to optimize nodule localization and to successful resection when performing minimally invasive thoracic surgery.

최소 침습적 흉부 수술을 위한 전자기 네비게이션 흉부 결절 국소화

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

재건 미세 수술에서 허혈 재관류 손상의 연구를위한 전 임상 쥐 모델

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...