We thank Ellen Ytebrouck for her valuable information regarding method application in rat. This work was supported by the Research Council of the KU Leuven (OT09/22) and the Fund for Scientific Research-Flanders (FWO Vlaanderen). Jeroen Aerts is supported by a Ph.D. fellowship of the Agency for Innovation through Science and Technology Flanders (IWT Vlaanderen) and Julie Nys by a Ph.D. grant from FWO Flanders.

모든 실험은 KU 루뱅의 윤리적 연구위원회의 승인과 유럽 공동체위원회 지침을 엄격히 준수했다되었다 2010년 9월 22일 (63분의 2,010 / EU)과 벨기에 법령 (KB (29)의 2013 년 5 월). 가능한 모든 노력은 동물의 고통을 최소화하고 동물의 수를 줄이기 위해 제출되었다. 1 동물 치료 및 마취제 <ol><li> 케타민 하이드로 클로라이드 (75 ㎎ / ㎖) 및 식염수 medetomidine 염산염 (1 ㎎ / ㎏)의 혼합물을 복강 내 주사하여 마우스를 마취. </li><li> 마우스가 완전히 진정되고 보장하기 위해 집게 발가락을 곤란하게하여 반사를 확인합니다. </li><li> 눈꺼풀 및면 팁을 사용하여 눈 주변 지역을 소독하기 위해 70 % 에탄올을 적용합니다. 또한 진정 작용의 정도를 평가하기 위해 눈꺼풀의 반사를 확인합니다. </li></ol> 2 눈을 제거 <ol><li> 확인 동물이있는에, 평면 건조하고매끄러운 표면. </li><li> 곡선, 톱니 모양의 팁 (: 0.5 × 0.4 mm 선호 팁 크기)과 집게를 소독. </li><li> 조심스럽게 안구가 소켓에서 변위 및 시신경에 도달 할 때까지 집게로 눈구석 (눈의 코너)에 키를 누릅니다. </li><li> 눈 뒤에 집게를 안내합니다. 눌러 바람직 곡선의 시작과 집게 아닌 매우 끝이 단단히 시신경을 누르고 있습니다. 이 소켓에서 지구를 해제 하 고 전체 시신경을 고정하는 데 도움이 될 것입니다. </li><li> 마우스가 평평한 표면에 남아있는 동안 손이 최소한의 저항 방향으로 집게를 들고 원형의 움직임을 확인합니다. 마우스는 손 운동의 방향에 따라 표면을 따라 요동한다. </li><li> 시신경이 두 수축 될 때까지 점차적으로 증가 속도로이 작업을 수행합니다 (일반적으로 7-15 원형 운동 사이의 약 0.5 초마다 하나의 전체 회전에). 따라서, 안구는 떨어져제거. </li></ol> 3 수술 후 케어 <ol><li> (드문) 출혈시, 점착성 응고 지혈제와 궤도를 채운다. </li><li> 복강 식염수에 atipamezol 염산염 1 ㎎ / ㎏을 주입하여 마취를 반전합니다. </li><li> 통증을 완화하기 위해 복강 매 24 시간 멜 록시 캄의 1 ㎎ / ㎏을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 각막의 탈수를 방지하기 위해 나머지 눈에 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 동물이 가열판에 복구 또는 체온을 제어하는​​ 별도의 장에 절연 재료에 동물을 래핑하자. </li><li> 적어도 2 일간 매일 마우스의 무게를 측정한다. 무게의 손실은 고통을 표시하고 동물이 완전히 회복 될 때까지이 경우, 멜 록시 캄의 치료를 계속할 수 있습니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Toldi, J., Feh&#233;r, O., Wolff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+plasticity+induced+by+neonatal+monocular+(and+binocular)+enucleation.">Neuronal plasticity induced by neonatal monocular (and binocular) enucleation.</a> Progress in Neurobiology. 48 (3), 191-218 (1996).</li><li>Steeves, J. K. E., Gonz&#225;lez, E. G., Steinbach, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vision+with+one+eye:+a+review+of+visual+function+following+unilateral+enucleation.">Vision with one eye: a review of visual function following unilateral enucleation.</a> Spatial vision. 21 (6), 509-529 (2008).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cross-modal+plasticity+in+adult+mouse+visual+cortex+following+monocular+enucleation.">Evidence for cross-modal plasticity in adult mouse visual cortex following monocular enucleation.</a> Cerebral Cortex. 21 (9), 2133-2146 (2011).</li><li>Nys, J., Aerts, J., Ytebrouck, E., Vreysen, S., Laeremans, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cross-modal+aspect+of+mouse+visual+cortex+plasticity+induced+by+monocular+enucleation+is+age-dependent.">The cross-modal aspect of mouse visual cortex plasticity induced by monocular enucleation is age-dependent.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (4), 950-970 (2014).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e57 (2011).</li><li>Morales, B., Choi, S. -. Y., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dark+rearing+alters+the+development+of+GABAergic+transmission+in+visual+cortex.">Dark rearing alters the development of GABAergic transmission in visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22 (18), 8084-8090 (2002).</li><li>Chen, X. J., Rasch, M. J., Chen, G., Ye, C. Q., Wu, S., Zhang, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binocular+input+coincidence+mediates+critical+period+plasticity+in+the+mouse+primary+visual+cortex.">Binocular input coincidence mediates critical period plasticity in the mouse primary visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 34 (8), 2940-2955 (2014).</li><li>Konur, S., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+spine+and+filopodial+motility+in+primary+visual+cortex:+Reduced+effects+of+activity+and+sensory+deprivation.">Developmental regulation of spine and filopodial motility in primary visual cortex: Reduced effects of activity and sensory deprivation.</a> Journal of Neurobiology. 59 (2), 236-246 (2004).</li><li>Parrilla-Reverter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-course+of+the+retinal+nerve+fibre+layer+degeneration+after+complete+intra-orbital+optic+nerve+transection+or+crush:+A+comparative+study.">Time-course of the retinal nerve fibre layer degeneration after complete intra-orbital optic nerve transection or crush: A comparative study.</a> Vision Research. 49 (23), 2808-2825 (2009).</li><li>Galindo-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axotomy-induced+retinal+ganglion+cell+death+in+adult+mice:+Quantitative+and+topographic+time+course+analyses.">Axotomy-induced retinal ganglion cell death in adult mice: Quantitative and topographic time course analyses.</a> Experimental Eye Research. 92 (5), 377-387 (2011).</li><li>Kanold, P. 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M., Lieberman, A. R., Yan, Q., Campbell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+expression+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+tyrosine+kinase+B+mRNAs+and+distribution+and+ultrastructural+localization+of+their+proteins+in+the+visual+pathway+of+the+adult+rat.">Patterns of expression of brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase B mRNAs and distribution and ultrastructural localization of their proteins in the visual pathway of the adult rat.</a> Neuroscience. 140 (3), 913-928 (2006).</li><li>Hernandes, M. S., Britto, L. R. G., Real, C. C., Martins, D. O., Lopes, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+the+structural+remodeling+of+the+visual+system+after+ocular+enucleation.">Reactive oxygen species and the structural remodeling of the visual system after ocular enucleation.</a> Neuroscience. 170 (4), 1249-1260 (2010).</li><li>Cuyvers, A., Paulussen, M., Smolders, K., Hu, T. -. T., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+cell+proliferation+upon+enucleation+in+direct+retinal+brain+targets+in+the+visual+system+of+the+adult+mouse.">Local cell proliferation upon enucleation in direct retinal brain targets in the visual system of the adult mouse.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 4, 1-15 (2010).</li><li>Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+binocular+competition+in+the+visual+cortex+begins+at+eye+opening.">Experience-dependent binocular competition in the visual cortex begins at eye opening.</a> Nature Neuroscience. 10 (3), 370-375 (2007).</li><li>Toldi, J., Farkas, T., V&#246;lgyi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+enucleation+induces+cross-modal+changes+in+the+barrel+cortex+of+rat.+A+behavioural+and+electrophysiological+study.">Neonatal enucleation induces cross-modal changes in the barrel cortex of rat. A behavioural and electrophysiological study.</a> Neuroscience Letters. 167 (1-2), 1-4 (1994).</li><li>Newton, J. R., Sikes, R. W., Skavenski, A. 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X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+changes+in+visual+cortex+of+neonatal+monocular+enucleated+rat:+a+proton+magnetic+resonance+spectroscopy+study.">Metabolic changes in visual cortex of neonatal monocular enucleated rat: a proton magnetic resonance spectroscopy study.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 29 (1), 25-30 (2011).</li><li>Dyer, R. S., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+enucleation+in+retinal+degenerate+mice.">Effects of enucleation in retinal degenerate mice.</a> Physiology &amp; behavior. 14 (2), 207-210 (1975).</li><li>Smith, S. A., Bedi, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+eye+enucleation+in+adult+rats+causes+neuronal+loss+in+the+contralateral+superior+colliculus.">Unilateral eye enucleation in adult rats causes neuronal loss in the contralateral superior colliculus.</a> Journal of Anatomy. 190 (4), 481-490 (1997).</li><li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+enucleation+on+calbindin-D+28k+and+c-Fos+expression+in+the+lateral+geniculate+nucleus+in+rats.">Effects of monocular enucleation on calbindin-D 28k and c-Fos expression in the lateral geniculate nucleus in rats.</a> Okajimas folia anatomica Japonica. 82 (1), 9-18 (2005).</li><li>Faguet, J., Maranhao, B., Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ipsilateral+eye+cortical+maps+are+uniquely+sensitive+to+binocular+plasticity.">Ipsilateral eye cortical maps are uniquely sensitive to binocular plasticity.</a> Journal of Neurophysiology. 101 (2), 855-861 (2008).</li><li>Van der Gucht, E., Hof, P. R., Van Brussel, L., Burnat, K., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+protein+and+neuronal+activity+markers+define+regional+architectonic+parcellation+in+the+mouse+visual+cortex.">Neurofilament protein and neuronal activity markers define regional architectonic parcellation in the mouse visual cortex.</a> Cerebral Cortex. 17 (12), 2805-2819 (2007).</li><li>Chaudhuri, A., Matsubara, J. A., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+in+primate+visual+cortex+assessed+by+immunostaining+for+the+transcription+factor+Zif268.">Neuronal activity in primate visual cortex assessed by immunostaining for the transcription factor Zif268.</a> Visual Neuroscience. 12 (1), 35-50 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

우리의 방법에 따라 성공적으로 적출술을 수행하기 위해 고려해야 할 가장 중요한 단계는 다음과 같다 : 1) 적절한 크기의 만곡 및 톱니 끝과 집게를 사용; 2) 건조 매끄러운 표면 적출술을 수행하는 단계; 3) 서서히 적어도 마찰 방향의 원형 움직임을 가속화. 효과적인 결과를 들어이 곡선 및 톱니 모양의 팁을 특징으로 적절한 집게를 사용하는 것이 필수적입니다 (: 마우스 : 선호 팁 크기 0.5 × 0.4 mm를, 쥐 : 2.15 X 1.3 mm). 곡률이 안구 변위 후의 시신경에 쉽게 액세스 할 수 있고 회전 동작을 수행 할 때 올바른 손 배치 할 필요가있다. 시신경을 들고 때 필요한 그립이 부족하기 때문에 부드러운 팁은 권장되지 않습니다. 원형의 움직임 동안 올바르게 시신경을 보유하지 않으면 안과 동맥, 눈의 가난한 분리 따라서 가난한 재현성 파열 발생합니다.따라서이 생체 내에서 방법을 적용하면 최대 동물 복지를 보장하기 위해 처리 포셉의 최적화를 위해 안락사 동물에 첫 번째 연습에이 방법을 권장합니다. 성공적인 눈 적출술 최근 수동 동물 신체를 선회하고 겸자를 고정 유지하는 것을 제외하고는 동일한 방법을 사용하여 실험실에서 우리 래트에서 수행되었다. 기술의 한 가지 제한은 가능성이 망막에 손상을 줄 수 있다는 것입니다. 따라서이 방법은 5 조직학을 수행하는 망막 수집 덜 적합하다. 또한, 우리의 방법은 안구를 제거하거나 눈꺼풀을 절단하지 않고 소켓에서 변위 될 필요가 있기 때문에 눈을 열어 세를 게시 제한됩니다. 설치류 등 다양한 종의 눈 안구 적출술은 일상적으로 자주 눈꺼풀의 제거를 수반하는 다른 방법을 사용하여 시신경 18,23-25 ​​절단이 수행됩니다. 이러한 방식 운전 방식DS보다 침습적 경향 여기 기재된 기술보다 더 높은 학습 곡선이있다. 제거 또는 눈꺼풀을 봉합 할 필요없이 수술 후 회복 시간이 높은 동물 보호 및 재현성 귀결 최소화된다.

눈을 제거함으로써 비가 역적 감각 수용체 표면 (망막)을 파괴한다, 시각적 통로를 따라 감각 입력의 상당한 손실을 부과한다. 청소년 및 성인의 시각 시스템에 적출술 모델은 다른 비주얼 센터 1-4의 개발, 가소성 및 기능을 이해하는데 유용한 것으로 입증되었다. 이 감각 박탈, 분자 세포 및 생리 학적 결과는 대뇌 피질 회로 대처 경험 등 광범위한 변화에 대한 응답으로 자신의 구조와 기능을 변경하는 방법을 정상적인 발달 규제 방법과 설립에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 시각 박탈의 다른 방법이 존재하고 그들 모두는 비전 관련 연구의 특정 장점이있다. 예를 들어 어두운 양육 특별히 시각적으로 활동을 구동 없애 아직 그것은 자연 망막 활동에 영향을주지 않습니다. 마찬가지로, 뚜껑 봉합 또는 눈 패치 패턴 삭제 visua리터 입력 자발적인 활동을 방해하지 않고 있지만 닫힌 눈을 통해 분산 된 빛이 침투 할 수 있습니다. 이러한 방법은 가역적이며 개발 중에 6-8 피질 회로 조각에서 양안 시력의 입력 패턴 및 낮은 수준의 상관 관계의 역할을 이해하는데 유용한 것으로 밝혀졌다. 이 시신경 9,10 구성 망막 신경절 세포의 진보적 입력 손실을 설정하기 때문에 녹내장 연구에서는 성인 동물에서 시신경 크러쉬 모델은 광범위하게 사용되어왔다. 목표는 비가 역적으로 한번에 자발 패터닝 모두 비전을 제거 할 때 눈의 망막은 이와 완전히 즉시 제거 한편, 적출에, 박탈의 적절한 선택이다. 또한 활동 맵핑 연구 11,12에서 신호 대 잡음비를 향상시킬 수있는 강력한 안압 활동 불균형을 유도한다. 번째로 적출에 응답 기능적, 구조적 변화를 비교OSE 예컨대 뚜껑 봉합사 덜 과감한 방법으로 박탈 한 후, 또한 소성 모두 항상성 및 시냅스 종류 망막 자발 활동의 역할에 새로운 통찰력을 노출시킬. 탈핵 직접 망막 대상에서 영양 영향의 손실을 트리거합니다. 예를 들어, BDNF 수준이 크게 좌우 geniculate 핵 (LGN) 및 성인 적출 래트 (13)의 우수한 둔덕에 하향 조절된다. 구조적 리모델링을 중재하는 메신저 분자로서 기능 활성 산소 종은 또한 성인 쥐의 시각 시스템 (14)의 피질 하 구조에서 검출된다. 더욱이, 마우스의 시각 피질 상이한 타겟 구조 및 소교 걸쳐 astroglial 활성화 일주 (15)의 특정 후 적출 시간 프레임에서 발생한다. 함께, 아교, 구조 및 분자 수준에서 서로 다른 피질 반응에서 광학 deafferentation 결과. 이러한 피질에도 불구하고효과, 그것은 반드시 대뇌 피질의 레벨 16에서 효과를 연루되지 않습니다. 다음 박탈 시각 피질에 시각이 아닌 입력의 강화에 다른 감각 영역에서 수정을 포함하여 주목할만한 크로스 모달 피질 가소성이 두 단안 이후에 발생 (ME)는 3,4,17,18 및 양안 1,17 (BE) 안구 적출술. 선정한 시각 신경에 기여에서, deafferentation의 유형으로 적출술은 중추 신경계의 퇴행성 신경 19 20-22 특성 간의 균형을 연구하는데 사용될 수있다. 안구 적출술을 수행 할 수있는 다른 절차는 이미 문헌에 설명되어 있습니다. 쥐와 생쥐의 생체 ME에 대한 특정 방법으로 인해 궤도 근육과 조직 23-25 ​​불필요한 절편 덜 간단합니다. 이러한 마하 잔 등과 같은 다른 서적. (2011) 5 사용하여 상세한 프로토콜을 제공<html> 유전자형 - 표현형의 상관 관계 가능성이 사후를 연구하는 눈의 높은 처리량 수집을 위해 무딘 절개. 자신의 목적을 위해,이 방법은 편리하고 빠르다. 하나가 아니라 눈 자체보다 (살아있는 동물에서) 핵의 제거 다음 심성 시각 경로를 연구하기 위해 옵트 그러나,이 방법은 생체 안구 적출술 덜 적합하다. 이러한 설정에서, 후 안구 적출 생존율은 높은 중요하다. 또한, 생체 손상 및 시신경의 보존 및 안와 조직에서 최소한이 바람직하다. 여기서는 Faguet 등에 의해 설명 된 것과 더 유사한 대안 적출술 방법을 제시한다 (2008) 26, 즉 특정한 유리한 특성을 제공한다 :.가 빠른 수술 후의 회복과 연관되어 매우 낮은 학습 임계 특징 연구원. 눈의 형태 나 시각 통로 연구 : 일반적으로, 다른 방법은 후속 연구의 초점에 따라 상호 보완 적이다. 요컨대 ve_content은 &quot;&gt;, 안구 적출술은 항상성 및 크로스 모달 뇌 가소성, 아교 응답 특성 및 축삭 안정성 조사 향해 비전 연구에서 적용 할 수 있습니다.이 가시화 문서에서는, 우리는 생체 내 눈 안구 적출술을위한 실현 가능한 신뢰할 수 방법을 보여 마우스.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride (Anesketin)</td>
			<td>Dechra Veterinary Products (Eurovet)</td>
			<td>BE-V136516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine hydrochloride (Domitor)</td>
			<td>Orion Corporation (Janssen Animal Health)</td>
			<td>BE-V151742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol hydrochloride (Antisedan)</td>
			<td>Orion Corporation (Elanco Animal Health)</td>
			<td>BE-V153352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Vetmedica</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment (Fucithalmic)</td>
			<td>Leo Pharma nv-sa</td>
			<td>BE 144654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria MC31 Forceps - Serrated Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td>For application in the mouse. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Pattern Forceps - Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11003-13</td>
			<td>For application in the rat. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic cotton wool</td>
			<td>Qualiphar</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Other hemostatic agents are equally suitable (e.g. Viscostat, #649, Ultradent Products)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening

적출술 또는 눈의 수술 제거는 일반적으로 신경 deafferentation 모델로 간주 될 수있다. 그것은 포유류의 시각 시스템 1-4를 따라 시각적, 크로스 모달 발달 가소성의 다양한 측면을 연구하는 유용한 도구를 제공합니다. 여기서 우리는 성인 20 일 이전의 마우스에서 확인 된 마우스에서 하나의 제거 또는 양쪽 눈을위한 우아하고 간단한 기술을 보여줍니다. 간단히, 소독 곡선 포셉은 눈 뒤에있는 시신경을 고정하는 데 사용됩니다. 그 후, 원형 운동은 시신경을 수축하고 안구를 제거하기 위해 수행된다. 이 기술의 장점은 어떤 출혈을 최소화 재현성, 빠른 수술 후 회복과 실험에 대한 매우 낮은 학습 임계 값입니다. 따라서, 동물의 다량 조작과 노력을 최소한으로 처리 될 수있다. 기술의 성격에 약간의 손상을 야기 할 수 있음절차를 수행하는 동안 망막. 마하 잔 등이에 비해 부작용이있어서 덜 적합하다. (2011) 5 골 수집하고 망막 조직을 분석하는 경우. 안구가 눈꺼풀을 제거하지 않고 소켓에서 변위 될 필요가 있기 때문에 - : 또한, 우리의 방법은 후 눈을 열어 세 (13 년 이후 P10 마우스)로 제한됩니다. 이 논문에 기술 된 생체 안구 적출 기술은 최근에 성공적으로 쥐에 약간의 수정을 적용 일반적으로 설치류의 심성 시각 경로를 연구하기 위해 유용 표시되었습니다.

도 1은 설명 된 프로토콜을 이용하여 눈의 성공적인 제거를 도시하고 출혈의 부재 또는 안와 조직 또는 눈구멍 (도 1A, 1B)에 대한 물리적 손상이 명백한 특징으로한다. 또한, 제거 눈은 완전히 그대로 세계 (그림 1C)에 대한 나타내는 부드러운 각막, 맥락막 및 광학 디스크를 가지고 있습니다. 우리 프로토콜 눈 및 기계적 회동 뒤에 시신경의 클램핑을 포함하기 때문에, 제거 된 눈의 시신경은 망막 (도 1D)의베이스에 잘록한이다. 주변 뇌 영역 (그림 1E)에 손상없이 깨끗한 컷 시신경의 설명 프로 시저를 수행하면. 단안 안구 적출술은 활동 매핑 (그림 2)와 함께, 하나가 급격히 반대쪽 visua의 기능 또는 눈 특정 입력 영역을 묘사 할 수 있습니다원숭이 (28)와 같은 고차 포유 동물에서 마우스 12,27 또는 눈 우성 열 리터 피질. 쥐 실험, 하나의 제거 (ME) 또는 양안 타겟팅 시각적 자극 zif268의 mRNA 또는 C-에 Fos 단백 발현 량의 검출과 조합 (BE하는) 시각 피질 12,27 지역적 신경 활성화를 밝히기 위해서인가 . 시각 자극 제어 (도 2a)과는 대조적으로, BE 마우스 입력 시각 (도 2b)의 부족을 완료 할 예정 시각 피질 기저 활성을 보였다. 이와 같이, 비 시각 피질 (예. 더 전방 부보다 후방 부분에서 청각 피질에서 체성 감각 피질)과 시각 사이의 경계가 발견되었다. 일주일 생존 시간과 ME 생쥐의 결과는 반대측 시각 피질에 눈 소정의 입력 영역을 가시화. 이 monocularly 구동 영역은 감퇴했고, 메디칼에 위치Al 및 중앙 영역 쌍 (도 2c)의 횡. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig1highres.jpg" width="500" /> 눈구멍, 제거 눈 및 시신경의 사후 적출술 상태의도 1 정성 평가. 곡선 포셉 (A)에는 출혈이나 손상 눈구멍 (B)에서 관찰되지와 눈의 제거 후. 각막과 맥락막 (C, D)의 정상적인 외관에 의해 반영된 바와 같이 눈이 완전히 제거 된 그대로이다. 시신경은 (는) 눈 (D)를 잎 시신경 유두에 수축된다. 뇌의 복부 부분의 시험은 깨끗한 컷 시신경 (별표)와 다른 구조 (E)에 뚜렷한 손상을 알 수있다. C, D의 스케일 바 : 1mm. E의 스케일 바 : 5mm. A : 전방; L : 왼쪽; P : 후방; R : 오른쪽. 그림 안구 적출술에 의해 계시 된 마우스 시각 피질에서 2 기능 눈길을 입력 특정 세분. 눈과 대뇌 피질을 연결하는 검은 색과 회색 선은 망막 신경 섬유와 눈 특정 입력 영역을 통해 교차를 나타낸다. 신경 활동이 제어 (A)의 관상 부분에 가시화, (B), 그리고 zif268 (그레이 스케일)에 대한 현장 하이브리드 (ISH)에서 방사성하여 ME (C) 쥐 브레 그마 수준 주위 -3.40 mm. 대조군 (A), 두 반구의 시각 피질은 시각적 자극 다음 높은 활성을 표현한다. 한쪽 또는 양쪽 눈 (들) extirpated되면 활성 신호에 명확한 감소가 박탈 피질 영역에 대응하는 볼. Monocularly은 (C) 생쥐는 높은 맛보게의 영역을 보여 적출제거 된 눈에 반대편 단안 영역의 감소 신호에 의해 둘러싸인 시각 피질의 양안 영역에서 vity. 스케일 바 : 2mm. 반 브뤼셀 등 12의 허가 재판.

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A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

또한 안구 적출술라는 눈의 제거는, 그것은 돌이킬 수없는 부분 (단안) 또는 전체 (쌍안) 시력 손실을 유발하기 때문에 포유류의 시각 시스템에 따라 시각, 크로스 모달, 발달 가소성의 측면을 연구하기위한 유용한 전략을 제공합니다. 여기에서 우리는 생체 안구 적출술에서 수행 할 수있는 높은 재현성 및 간단한 방법을 설명합니다.

높은 재현성과 단순 명료 한 방법이 수행하는<em&gt; 생체</em눈 개봉 후 마우스에서&gt; 안구 탈핵

Enucleation or the surgical removal of an eye can generally be considered as a model for nerve deafferentation. It provides a valuable tool to study the ...

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Research

JoVE Journal

Biology

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

23.0K 조회수.  KU Leuven - University of Leuven.  또한 안구 적출술라는 눈의 제거는, 그것은 돌이킬 수없는 부분 (단안) 또는 전체 (쌍안) 시력 손실을 유발하기 때문에 포유류의 시각 시스템에 따라 시각, 크로스 모달, 발달 가소성의 측면을 연구하기위한 유용한 전략을 제공합니다. 여기에서 우리는 생체 안구 적출술에서 수행 할 수있는 높은 재현성 및 간단한 방법을 설명합니다. 

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Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a tremendous amount of data available comes an explosion of genotyping methods. Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. It also has the ability to identify tri-allelic, indels, short-repeat polymorphisms, along with determining allele percentages for methylation or pooled sample assessment. In addition, there is a standardized control sequence that provides internal quality control. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.


Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.

Pyrosequencing : 정확한 Genotyping을위한 간단한 방법

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

연구

생물학

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC complexes). These protein scaffolds span the nuclear envelope and connect the interior of the nucleus to components of the surrounding cytoplasmic cytoskeleton. LINC complexes consist of two evolutionary-conserved protein families, Sun proteins and Nesprins that harbor C-terminal molecular signature motifs called the SUN and KASH domains, respectively. Sun proteins are transmembrane proteins of the inner nuclear membrane whose N-terminal nucleoplasmic domain interacts with the nuclear lamina while their C-terminal SUN domains protrudes into the perinuclear space and interacts with the KASH domain of Nesprins. Canonical Nesprin isoforms have a variable sized N-terminus that projects into the cytoplasm and interacts with components of the cytoskeleton. This protocol describes the validation of a dominant-negative transgenic mouse strategy that disrupts endogenous SUN/KASH interactions in a cell-type specific manner. Our approach is based on the Cre/Lox system that bypasses many drawbacks such as perinatal lethality and cell nonautonomous phenotypes that are associated with germline models of LINC complex inactivation. For this reason, this model provides a useful tool to understand the role of LINC complexes during development and homeostasis in a wide array of tissues.

Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.

마우스 모델의 유효성 검사는 세포 고유의 방식으로 LINC 단지를 방해

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad to extract cellular DNA from whole blood in less than 2 min. The blood specimen is treated with detergent, mixed briefly and applied by pipet to the separation membrane. The lysate wicks into the blotting pad due to capillary action, capturing the genomic DNA on the surface of the separation membrane. The extracted DNA is retained on the membrane during a simple wash step wherein PCR inhibitors are wicked into the absorbent blotting pad. The membrane containing the entrapped DNA is then added to the PCR reaction without further purification. This simple method does not require laboratory equipment and can be easily implemented with inexpensive laboratory supplies. Here we describe a protocol for highly sensitive detection and quantitation of HIV-1 proviral DNA from 100 &#181;l whole blood as a model for early infant diagnosis of HIV that could readily be adapted to other genetic targets.

We describe here a simple and rapid paper-based DNA extraction method of HIV proviral DNA from whole blood detected by quantitative PCR. This protocol can be extended for use in detecting other genetic markers or using alternative amplification methods.

핵산의 여과 분리 : 간단하고 신속한 DNA 추출 방법

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a versatile analytical tool for characterizing viscoelastic mechanical properties for a variety of materials ranging from hard (plastic, glass, metal, etc.) surfaces to cells on any substrate. It has been widely used to measure the stiffness of cells, but less frequently used to measure the stiffness of aortas. In this paper, we will describe the procedures for using AFM in contact mode to measure the ex vivo elastic modulus of unloaded mouse arteries. We describe our procedure for isolation of mouse aortas, and then provide detailed information for the AFM analysis. This includes step-by-step instructions for alignment of the laser beam, calibration of the spring constant and deflection sensitivity of the AFM probe, and acquisition of force curves. We also provide a detailed protocol for data analysis of the force curves.

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

We present detailed protocols for isolation of aortas from mouse and measurement of their elastic modulus using atomic force microscopy.

의 강성 측정<em&gt; 전의 VIVO</em원자 힘 현미경을 사용하여&gt; 마우스 대동맥

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet infusion is far from ideal and therefore, the omentum is re-emerging as a potentially valuable site for islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and the implantation of the islets to the diabetic recipients. Transplantation to the omentum requires surgical steps that can be better demonstrated visually. Here, the detailed steps for this procedure are presented. Two methods of mixing the isolated islets with hydrogel before placing the mixture into the omental pouch of diabetic mice are described here. Different hydrogels are used for the different conditions. Blood glucose levels of diabetic mouse recipients of syngeneic islets in the omentum were monitored for up to 35 days. Some animals were sacrificed after 14 days to perform immuno-histochemical analysis. This pre-clinical transplantation approach can be used as preliminary data leading up to translation to clinical transplantation.

A method for the omental transplantation of islets in a mouse is introduced. The isolated islets are mixed with hydrogel and the mixture is placed into the omental pouch of a diabetic mouse. Then, the blood glucose is monitored, and immuno-histochemical analysis is performed.

마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to understand the pathophysiology of ocular diseases because of their similarities with human anatomy and physiology. Alterations in the retinal pigment epithelium (RPE), including changes in morphology and function, are common features shared by many ocular disorders. However, successful isolation and culture of primary mouse RPE cells is very challenging. This paper is an updated audiovisual version of the protocol previously published by Fernandez-Godino et al. in 2016 to efficiently isolate and culture primary mouse RPE cells. This method is highly reproducible and results in robust cultures of highly polarized and pigmented RPE monolayers that can be maintained for several weeks on Transwells. This model opens new avenues for the study of the molecular and cellular mechanisms underlying eye diseases. Moreover, it provides a platform to test therapeutic approaches that can be used to treat important eye diseases with unmet medical needs, including inherited retinal disorders and macular degenerations.

This protocol, which was originally reported by Fernandez-Godino et al. in 20161, describes a method to efficiently isolate and culture mouse RPE cells, which form a functional and polarized RPE monolayer within one week on Transwell plates. The procedure takes approximately 3 hours.

1차 마우스 망막 색소 상피 세포의 효율적인 해부 및 배양

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative sparsity of information about C. elegans in its natural context comes from the challenges involved in the identification of the small nematode in nature. Despite these challenges, an increasing focus on the ecology of C. elegans has caused a wealth of new information regarding its life outside of the laboratory. The intensified search for C. elegans in nature has contributed to the discovery of many new Caenorhabditis species and revealed that congeneric nematodes frequently cohabitate in the wild, where they feed on microbial blooms associated with rotting plant material. The identification of new species has also revealed that the androdioecious mating system of males and self-fertilizing hermaphrodites has evolved three times independently within Caenorhabditis. The other two selfing species, C. briggsae and C. tropicalis, share the experimental advantages of C. elegans and have enabled comparative studies into the mechanistic basis of important traits, including self-fertilization. Despite these advances, much remains to be learned about the ecology and natural diversity of these important species. For example, we still lack functional information for many of their genes, which might only be attained through an understanding of their natural ecology. To facilitate ecological research of selfing Caenorhabditis nematodes, we developed a highly scalable method to collect nematodes from the wild. Our method makes use of mobile data collection platforms, cloud-based databases, and the R software environment to enhance researchers&#39; ability to collect nematodes from the wild, record associated ecological data, and identify wild nematodes using molecular barcodes.

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

This protocol can be used to perform large-scale ecological surveys of selfing Caenorhabditis nematodes. The primary advantage of this method is the efficient organization and analysis of ecological and molecular data associated with the nematodes collected from nature.

Selfing caenorhabditis 선충류의 생태 조사를 수행하기위한 고도로 확장 가능한 접근법

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative ...

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin that is secreted by conjunctival goblet cells (CGCs) onto the ocular surface contributes to multiple ocular surface diseases. The elimination of exogenous sex hormones is essential to obtain consistent results during in vitro study of sex-based differences in CGCs. This paper describes a method to minimize the presence of exogenous hormones in the study of sex-based differences in CGCs while maintaining their physiological function. CGCs from postmortem human donors of both sexes were cultured from pieces of the conjunctiva in RPMI medium with 10% fetal bovine serum (FBS) (referred to as the complete medium) until confluency. Nearly 48 h before the start of the experiments, CGCs were transferred to RPMI medium without phenol red or FBS but with 1% BSA (referred to as phenol-red-free medium). The normal cellular function was studied by measuring the increase in intracellular [Ca2+] ([Ca2+]i) after carbachol (Cch, 1 x 10-4 M) stimulation using fura 2/acetoxymethyl (AM) microscopy. The result shows that CGCs maintained normal function in the phenol-red-free media after 48 h. No significant difference in [Ca2+]i response was observed between phenol red-free RPMI medium and complete medium upon Cch stimulation. Therefore, we recommend using the phenol-red free RPMI medium with 1% BSA to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of CGCs in the study of sex-based differences.

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Phenol red-free/fetal bovine serum-free medium is a better option than advanced RPMI to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of conjunctival goblet cells in the study of sex-based differences.

In Vitro (시험관 ) 결막 잔 세포의 성별 기반 차이를 연구하는 방법

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin ...

망막 변성 모델링 및 분석

LipidUNet-Machine Learning-Based Method of Characterization and Quantification of Lipid Deposits Using iPSC-Derived Retinal Pigment Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) is a monolayer of hexagonal cells located at the back of the eye. It provides nourishment and support to photoreceptors and choroidal capillaries, performs phagocytosis of photoreceptor outer segments (POS), and secretes cytokines in a polarized manner for maintaining the homeostasis of the outer retina. Dysfunctional RPE, caused by mutations, aging, and environmental factors, results in the degeneration of other retinal layers and causes vision loss. A hallmark phenotypic feature of degenerating RPE is intra and sub-cellular lipid-rich deposits. These deposits are a common phenotype across different retinal degenerative diseases. To reproduce the lipid deposit phenotype of monogenic retinal degenerations in vitro, induced pluripotent stem cell-derived RPE (iRPE) was generated from patients&#39; fibroblasts. Cell lines generated from patients with Stargardt and Late-onset retinal degeneration (L-ORD) disease were fed with POS for 7 days to replicate RPE physiological function, which caused POS phagocytosis-induced pathology in these diseases. To generate a model for age-related macular degeneration (AMD), a polygenic disease associated with alternate complement activation, iRPE was challenged with alternate complement anaphylatoxins. The intra and sub-cellular lipid deposits were characterized using Nile Red, boron-dipyrromethene (BODIPY), and apolipoprotein E (APOE). To quantify the density of lipid deposits, a machine learning-based software, LipidUNet, was developed. The software was trained on maximum-intensity projection images of iRPE on culture surfaces. In the future, it will be trained to analyze three-dimensional (3D) images and quantify the volume of lipid droplets. The LipidUNet software will be a valuable resource for discovering drugs that decrease lipid accumulation in disease models.

저자 스포트라이트: 연령 관련 황반변성의 발병기전 규명 및 잠재적 치료법 발견 

Degenerative eye diseases that affect the retinal pigment epithelium layer of the eye have monogenic and polygenic origins. Several disease models and a software application, LipidUNet, have been developed to study mechanisms of disease, as well as potential therapeutic interventions.