단안 시각적 박탈은 1 차적인 시각적 피질 반응 가소성을 유도하는 우수한 실험 프로토콜입니다. 일반적으로, 마우스내 1차 시각 피질의 쌍안경 세그먼트에 있는 뉴런은 ipsilateral 눈과 마찬가지로 모순된 눈의 자극에 약 2배 강하게 반응한다. 그러나, 안구 우도 가소성에 대한 임계 기간 동안 콘트라탈 눈을 종료 봉합은 반대로 눈 자극에 V1 뉴런에 의한 반응의 급속한 손실의 결과 또한 ipsilateral 눈의 반응에 후속 증가에 선행.
여기서, 우리는 단안 박탈을 위한 실험 프로토콜을 소개하고 시각적 박탈 도중 안구 지배의 추세를 분석하기 위하여 일반적으로 이용되는 방법을 건의합니다. 수술 도구를 알루미늄 상자에 넣고 섭씨 120도 이하로 반 시간 동안 오토클레이브하십시오. 수조 주전자에 2 % 아가로즈 용액을 준비하고 섭씨 75도에서 유지하십시오.
두 눈에 눈 연고의 얇은 층을 적용합니다. 조명을 가진 해부학 현미경의 밑에, 눈꺼풀을 봉합합니다. 약 4 개의 바늘을 만듭니다.
스레드의 2~3개의 노드를 만듭니다. 노드의 안정성을 높이기 위해 노드 의 머리에 인스턴트 건조 접착제 502의 세 마이크로 리터를 적용합니다. 그런 다음 스레드를 충분히 짧게 자른다.
마우스가 완전히 깨어있을 때 분리 된 유지 케이지에 넣습니다. 전기 생리학적 기록 전에 이소플루란을 사용하여 마우스를 마취하십시오. 바늘을 제거하고 안구를 노출합니다.
눈꺼풀을 조심스럽게 다듬습니다. 콘택트렌즈 용액으로 눈을 씻어내고 눈을 확인하여 선명도를 확인합니다. 안구의 상태가 양호한 마우스만 사용할 수 있습니다.
마우스를 마취한 후 마우스를 스테레오탁스 프레임에 놓습니다. 가열 패드를 사용하여 시술 내내 체온을 유지합니다. 눈 표면에 눈 연고를 바르면 촉촉하게 유지하십시오.
마우스의 머리카락을 제거하여 피부를 노출합니다. 두개골을 드러내고 두피 조직을 제거하기 위해 두 귀 사이에 8 밀리미터의 피부 면적을 곱한 8 밀리미터를 절개하십시오. 그런 다음 과산화수소와 오버리 결합 조직을 제거합니다.
소뇌 위의 두개골에 구멍을 뚫습니다. 구멍에 작은 골격 나사를 참조로 고정합니다. V1 쌍안경 영역에서 직경 1mm의 작은 두개골 절제술을 수행합니다.
조심스럽게 뇌를 다치게하지 않고 두개골 조각을 제거합니다. 노출된 피질 표면을 2%의 아가로즈로 덮어 건조를 방지합니다. 스테레오탁스 프레임에 텅스텐 전극을 고정합니다.
텅스텐 전극을 쌍안경 V1 부위에 수직으로 배치하여 기록 된 세포가 양쪽 눈에 반응하는지 확인합니다. 자극은 무작위 블록에서 30도 구분됩니다. 각 측정에 총 3~5개의 블록이 제시되었다.
투명하지 않은 플라스틱 플레이트로 한쪽 눈을 가시합니다. 마우스의 눈에서 23센티미터 에 배치 LCD1을 제시합니다. 오일 유압 마이크로 조작기에 의해 천천히 미세 전극을 진행합니다.
전극이 4층으로 진행되고 측정을 시작할 때 높은 신호 잡음 비 신호의 진행을 중지합니다. 스파이크 활동을 1, 000의 비율로 증폭시키고 300에서 10 킬로헤르츠로 필터링한 다음 40 킬로헤르츠에서 샘플링합니다. 그런 다음 다른 눈을 가리고 반대쪽 눈의 반응을 측정합니다.
단일 전극으로 측정된 신호는 인구 활동입니다. 소프트웨어를 사용하여 다른 셀의 스파이크를 분리합니다. 먼저 신호를 500내지 5, 000 헤르츠로 필터링한다.
두 커서를 설정, 긍정적 인 편향에 대한 하나 와 부정적인 편향 스파이크에 대한 하나. 스파이크 템플릿을 설정합니다. 다양한 스파이크 클래스 간에 가장 큰 변형을 표시하는 템플릿 영역을 설정합니다.
주 구성 요소 분석을 사용하여 클러스터로 분리합니다. K수단 알고리즘을 사용하여 경계의 스파이크를 분류합니다. 방향을 스파이크 발사 속도와 상관 관계를 지정하고 ipsilateral 및 반대로 눈을 위한 방향 튜닝 곡선을 플롯합니다.
그런 다음 OD 인덱스에 따라 각 셀에 대한 OD 점수를 할당하는 단면 및 ipsilateral 응답을 나타내는 단일 셀에 대한 OD 인덱스를 계산합니다. 수식에 따라 반대 편향 지수를 계산합니다. 이 다이어그램은 단안경 박탈 및 박탈되지 않은 마우스의 입시측 및 단면 눈의 방향 튜닝 곡선을 보여줍니다.
이 프로토콜은 중요한 기간에 박탈된 마우스와 박탈되지 않은 마우스로부터 성공적인 단반 적정 박탈 및 안구 지배 측정을 가능하게 합니다. 우리는 방금이 실험을 수행하는 방법을 보여 주었고 시각적 박탈 시 안구 지배의 변화를 분석했습니다. 실험 중, 전기 생리학적 기록 동안 봉합 과정 및 상호 작용에서 감염을 피하는 것이 중요하다.
우리의 비디오를 보고 주셔서 감사합니다.
