우리는 림프 악성 종양 단위, 엘리사 열 하켄, 리디아 Scarfò, 마시모 알레, 안토니오 콘티, 안젤라 BACHI, 안젤라 카타 네오 감사합니다. 이 프로젝트에 의해 지원되었다 : Associazione Italiana의 당 라 Ricerca 술 Cancro AIRC (탐정 그랜트와 특별 프로그램 분자 임상 종양 - 5 밀레 번호 당 9,965) CS 및 BA는 연구 설계 실험을 수행, 데이터를 분석하고 원고를 썼다. MTSB는 UR, FBPR 원고를 작성하는데 도움을. PG와 FCC는 연구 제공 환자의 샘플과 임상 데이터를 디자인했다.

참고 : 모든 조직 샘플이 산 라파엘 병원 (밀라노, 이탈리아)의 기관 심사위원회의 승인을 얻을 수 있었다. 1 인간의 조직 샘플 및 세포 정제 (그림 1) 참고 : 백혈병 림프구 멀리건 등에 따라, CLL 환자의 말초 혈액 (PB)에서 얻은 진단을받은 9. PB 1.1) 백혈병 세포 분리 <ol><li> 나트륨 헤파린과 vacutainer 혈액 수집 튜브에 PB를 수집합니다. </li><li> 15 ML 튜브에 혈액을 전송하고 전체 혈액의 50 μL / mL로에서 인간 B 세포 농축 칵테일을 추가합니다. 잘 혼합하고, 실온에서 20 분 배양한다. </li><li> , PBS + 2 % FBS 같은 부피로 샘플을 희석 있는지 인터페이스를 중단하지 않도록하고, 피콜 위에 부드럽게 조심스럽게 오버레이 피를 섞는다. 15 ML의 t에서 희석 된 시료의이 부분에 피콜의 적어도 한 부분을 사용하여 (즉, 4 ㎖의 피콜는 + 10 ml의 혈액우베). </li><li> 없이 브레이크와 20 분 동안 실내 온도 (20 ° C에서)에서 400 XG에 원심 분리기. 단핵 세포는 계면 것이다. </li><li> 조심스럽게 세포를 복구하고 새로운 튜브에 배치 할 수있는 인터페이스를 대기음. 5 분 동안 어둠 속에서, 300 XG에 PBS 원심 분리기 회 4 ° C를 세포를 씻으십시오. 펠렛은 아래에 있습니다. </li><li> 상층 액을 버린다. 앞뒤로 손가락 튜브를 가볍게 치면 남은 상등액 펠렛을 재현 탁. (10 % 태아 송아지 혈청 및 15 ㎎ / ㎖ 젠타 마이신으로 보충 된 RPMI 1640) 10 ml의 완전한 RPMI 배지로 희석하고 펠렛을 트리 판 블루 배제 방법을 사용하여 세포를 카운트. </li></ol> 1.2) 순도 평가 참고 : 모든 준비의 순도는 99 % 이상으로 항상 있어야합니다. <ol><li> 다음과 같은 항체 정제 된 세포 현탁액 100 ㎕를 품어 (시판, 재료의 표 참조) CD3 FITC를 (5 μL / TESt), CD14 PE (5 μL / 테스트), CD19 ECD (6 μL / 테스트), CD16-CD56 PC5 (2 μL / 테스트), CD5 PC7에서 4 ° C에서 20 분 동안 (4 μL / 테스트) FACS 튜브. </li><li> (300 XG에 5 분 동안 원심 분리기) PBS의 4 ㎖의 시료를 세척하고 음모에 그들의 표면에 CD19와 CD5-Express를 공동 CLL 세포 (&gt; 99 %)의 %를 흐름 cytometry.Check하여 순도를 확인 도 1에 나타내는 (6). 준비가 거의 0이어야한다 플롯에 CD3, CD14 및 CD16-56의 %를 확인하여 NK, T 림프구 및 단핵구의 거의없는 지 확인합니다. </li></ol> 1.3) 샘플 저장 <ol><li> 프로테오믹스 연구를 들어, 10 분 동안 300 XG에 25 × 10 6 1.5 ML 튜브에 세포, 원심 분리기 세포를 수집 4 시간 동안 뜨는 및 동결 건조 펠릿을 폐기합니다. -80 ° C에서 사용할 때까지 유지합니다. </li><li> 전체 RPMI에서 검증 분석, 재현 탁 세포 (수량이 더 분석에 따라 들어선택) 및 4 단계를 진행합니다. </li></ol> 2 이차원 전기 영동 (2-DE) (그림 2) 2.1) Isoelectrofocusing (IEF) <ol><li> 380 ㎕의 2-DE 버퍼 (RBthio 용액 344 μL의 최종 볼륨 CLL 세포 펠렛을 용해 (구 M 우레아, 10 mM 트리스, 4 % CHAPS), 65MM DTT의 30 ㎕의 2 % IPG 버퍼 ampholine의 6 μL 산도 4-7). </li><li> 18 IPG 스트립 (산도 4-7)에 단백질 시료 (1 mg)을 적용하고 콘티 외 의해 설명 된대로 표준 프로토콜 다음 IEF를 수행합니다. (10) </li><li> RT에서 15 분 동안 신선한 DTT의 2 %로 보충, (6 M 우레아, 30 % 글리세롤, 2 % SDS를 함유하는 50 mM의 pH를 8.8 트리스 - 염산 완충액 EB) 평형 완충액 2 ㎖에 스트립을 평형화. 취소 EB + DTT 및 EB 2 ㎖를 추가 2.5 % 요오도 아세트 아미드로 보충. 락 플랫폼에서 실온에서 15 분 동안 품어. </li></ol> 2.2) SDS-PAGE <ol><li> 제거 젤을 건드리지 않고 종이에 스트립을 건조EB의 과잉. 9~16% 그라데이션 SDS-PAGE 겔의 상단에 각 스트립을로드합니다. SDS-전기 영동 버퍼 (25 mM의 트리스, 글리신 192 밀리미터, V / w SDS 0.1 %) 겔의 상단에이 스트립의 로딩을 용이하게하기의 작은 볼륨을 추가합니다. </li><li> 스트립의 부유를 방지 한천 용액 (0.8 %)의 ~ 5 ㎖를 첨가하여 겔을 봉쇄 한 다음, 전기 영동 장치를 조립하고 SDS-전기 영동 완충액으로 채운다. 4 ° C에서 4 시간 동안 60mA / 젤에서 실행을 수행합니다. </li><li> 전기 영동 장치에서 젤을 제거하고 적절한 염색 상자에 넣습니다. </li></ol> 제조 젤 2.3) 실버 스테인 <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" fo:keep-together.within-page="always"><tbody><tr><td> 해결사 </td><td> 50 % 메탄올 12 % 아세트산 0.05 % 포르말린 </td><td> 2 시간 (또는 야간) * </td></tr><tr><td> WASH BUFFER </td><td> 35 % Ehanol </td><td> 20 분 (단계를 세 번 반복) </td></tr><tr><td> 과민성 </td><td> 0.02 % 티오 황산나트륨 </td><td> 2 분 </td></tr><tr><td> WASH </td><td> H 2 O </td><td> 5 분 (단계를 세 번 반복) </td></tr><tr><td> 질산은 </td><td> 0.2 % 질산은 0,076퍼센트 포르말린 </td><td> 20 분 </td></tr><tr><td> WASH </td><td> H 2 O </td><td> 1 분 (두 번 단계를 반복) </td></tr><tr><td> 개발자 </td><td> 6 % 탄산나트륨 0,0004 % 티오 황산나트륨 0.05 % 포르말린 </td><td> 염색은 충분까지 </td></tr><tr><td> STOP </td><td> 50 % 메탄올 </td><td> 30 분 </td></tr><tr><td></td><td> * 둘의 시간은 최소 시간은 단백질 고정이 필요합니다 </td><td></td></tr></tbody></table> 표 1. 참고 : 단백질 반점은 MS 호환 실버 스테인 (11)와 젤을 염색하여 시각화 할 수 있습니다. 모든 솔루션은 필요실버 염색은 표 1에 나열되어 있습니다. <ol><li> 각 솔루션 / 겔의 약 200 ML을 준비하고 표 1과 같이 처리 할 것. 조심스럽게 겔을 포함하는 염색 상자에 각 솔루션을 추가합니다. 락 플랫폼에서 모든 인큐베이션을 수행합니다. </li><li> 염색 후 정지 용액을 제거 및 수집 될 때까지 1 % 아세트산 용액에 겔을 떠난다. </li></ol> 2.4) 젤 수집 및 분석 <ol><li> 염색 3 일 이내에 농도계를 사용하여 높은 해상도의 이미지를 획득. </li><li> 2-DE 젤 용 소프트웨어를 이용하여 2-D 단백질의 패턴을 분석한다. 참고 :이 소프트웨어는 빠르고 신뢰할 수있는 이미지 비교를 할 수 있습니다. <ol><li> 상황에 맞는 메뉴에서 &quot;새 프로젝트를 만듭니다&quot;를 선택하여 프로젝트를 만듭니다. 폴더를 생성하고,이 .tif와 &quot;수입 젤 이미지&quot;를 선택 .png를하여 젤을 가져옵니다. 또는 .gel 확장. </li><li> 젤은 수입 w​​orksp에 추가하면에이스, 메뉴에서 &quot;검색 편집&gt; 자리를&gt;&quot;자리 감지 젤을 선택하고 선택하여 자동 자리 감지를 수행합니다. </li><li> 다음으로, 메뉴 &quot;빼기 배경&quot;에서 선택하여 배경 빼기를 수행합니다. 주 : 여러 겔과 비교하고, 정량적 및 / 또는 정 성적 분석에 의한 차이 또는 유사성을 검출하는 것이 가능하다 후있다. </li></ol></li></ol> MALDI-TOF MS 분석에 의해 3 단백질 식별 (그림 3) 3.1) 단백질 소화 <ol><li> 중 (깨끗한 메스로 절단) 수동 또는 자동 절제하여 젤 관심의 물과 소비세 관광 명소와 젤을 씻어. </li><li> , 물 (100 ~ 150 μL)와 젤 입자를 세척 스핀 다운 (400 XG에 30 초)와 액체를 제거합니다. </li><li> 겔 조각 CH 3 CN의 (겔 볼륨에 따라 다름) 동일한 볼륨을 추가하고 젤 조각이 줄어들 때까지 10 ~ 15 분 동안 기다립니다. 겔 입자를 건조 전NA 진공 원심 분리기. </li><li> 50 mM의 NH 4 HCO 3에 희석 된 10 mM Dithioerythritol의 75 ~ 100 μl를 추가하고 56 ° C (감소 단계)에서 30 분 동안 배양한다. 단계 3.1.3에서 설명 된 바와 같이 다시 CH 3 CN으로 겔 부분을 수축. </li><li> mM의 요오도 아세트 아미드가 50 mM의 NH 4 HCO 3에 희석과 어둠 속에서 실온에서 20 분 동안 배양 용액 (55)의 75 ~ 100 μl를 추가하여 알킬화를 진행합니다. </li><li> 단계 3.1.3에서 설명 된 바와 같이 겔 조각을 커버하기에 충분한 양을 사용 CH 3 CN으로 한번 겔 조각 수축. 진공 원심 분리기에서 건조. </li><li> 20 분 동안 4 ° C에서 4 HCO 3 25 mM의 NH, 5 mM의 염화칼슘 2, 12,5 NG 트립신 / μl를 포함하는 버퍼에 입자를 재수. 겔 조각을 충당하기 위해 버퍼의 충분한 볼륨을 사용합니다. 겔 조각에서 해제 흡수 상층 액을 제거하고 25 mM의 NH 4 HCO 3, 5 mM의 염화칼슘이 트립신없이 외부 전문가위원회를 추가젤을 어. </li><li> 하룻밤 37 ° C에서 적어도 3 시간 (펩타이드 소화에 필요한 최소 시간)에에서 샘플을 둡니다. </li></ol> 3.2) 질량 분광법 분석 (말린 방울 기법) <ol><li> 스테인리스 MALDI 플레이트 상에 스팟의 각 샘플 1 ㎕를 분취하고 50 % CH 3 CN, 0.1 % TFA에서 제조 α-시아 노 -4 - 히드 록 시신 행렬로서 산의 1 μL와 혼합한다. </li><li> MALDI-TOF 질량 분석기에 질량 스펙트럼을 얻습니다. 레이저 강도 신호의 포화를 방지하기 위해 또는 신호를 증가시키기 위해 조정, 스폿 당 약 200 스펙트럼을 축적. 데이터 탐색기 소프트웨어를 통해 프로세스의 스펙트럼은 아래에 설명 된대로 <ol><li> .DAT 파일을 가져와 &quot;과정&gt; 기준 수정&quot;을 선택하여베이스 라인 보정을 수행합니다. &quot;프로세스&gt; 질량 보정&gt; 수동 보정을 선택하여 트립신 자기 분해 제품 및 매트릭스 피크를 사용하여 질량을 보정; m / z 855.1와 2163.1 B에 가까운 피크를 선택y를 누른 후, &quot;음모&quot;를 클릭하고 수동 교정 창에 &quot;교정을 적용&quot;, 드래그와 해당 참조 질량을 선택 떠났다. </li><li> ( &quot;활성 추적을 중복&gt; 디스플레이&quot;) 활성 추적을 복제, 피크 검출에 대한 임계 값 ( &quot;피크&gt; 피크 검출&quot;)을 조정 새 추적을 선택하고 deisotoping ( &quot;피크&gt; deisotoping&quot;)을 수행합니다. 매크로 &quot;getpeaklist&quot;를 사용하여, 식별을 위해 사용되는 대중의리스트를 생성한다. 필요한 경우 수동으로 목록을 정리하고 더 나은 식별을 얻을 수있는 봉우리로 고른 잡음 신호를 제거합니다. </li></ol></li><li> 검색 엔진 (12)으로 심오하고 마스코트를 사용하여 포괄적 인 비 중복 단백질 데이터베이스를 검색하여 단백질을 식별합니다. <ol><li> 모든 검색에 다음 매개 변수를 사용하여 하나는 고정 수정 및 initi 펩티드 당 분열, 변수 수정과 같은 메티오닌 산화, 시스테인 carbamidomethylation를 놓쳤다50 ppm으로 알 질량 공차. </li></ol></li></ol> (4) 세포 골격 활동 분석 실험 (그림 4) 참고 : 재현 탁 세포는 완전한 RPMI (10 6 세포 / 200 μL)에서 1 단계에서 정제. 4.1) 마이그레이션 분석. 이 테스트는 분석 세포 (림프구)의 철새 용량의 정량화 할 수 있습니다. 6.5 mm 직경과 5.0 μm의 세공 크기의 트랜스 웰 챔버를 사용 중으로 분석을 수행한다. 상이한 세포 유형의 경우 기공의 크기와 이동 시간 (단계 4.1.3)를 최적화한다. <ol><li> 각각 유발과 자발적인 이동을 측정하기 위해 또는 특정 자극 (즉, SDF-1)없이 완전한 RPMI 600 μl를 첨가하여 하부 챔버를 준비한다. </li><li> 그 위에 상부 챔버를 넣고 시스템이 배양기에서 37 ° C에서 30 분 동안 평형 수 있습니다. </li><li> 종자 10 6 세포 / 다락방에서 200 μL (총 세포 수)와 배양인큐베이터에서 37 ° C에서 4 시간 동안 접시입니다. </li><li> , 상부 챔버를 제거하고 하부 챔버에서 미디어를 수집하고 1 ml의 PBS로 한번 하부 챔버를 씻으십시오. 튜브에 PBS를 수집합니다. </li><li> 오분 300 XG에 원심 분리기, 500 ㎕의 PBS에서 뜨는에 resuspend 폐기합니다. </li><li> 유세포, 인수 1 분 후에 마이그레이션 셀의 개수를 카운트. 절연 세포군 경우에는 어떠한 표면 항체를 추가 할 필요가 없다. 셀 사이드 산란 및 계산에 사용하는 번호는 1 분, 시각화 이벤트의 수를 고려하여 BI 차원 도트 플롯에 셀의 수를 확인한다. </li><li> 마이그레이션 지수 (MI)을로 계산 : <img alt="식 (1)" fo:content-width="3.5in" src="/files/ftp_upload/51942/51942eq1.jpg" /></li></ol> 4.2) 접착 분석. 이 분석은 세포의 부착 능력을 측정한다. 회 반복 분석을 수행합니다. <ol><li> 사전 코트 96-아LS의 50 μL 플레이트 (바닥이 평평한) / 웰 중 하나 밤새 4 ° C에서, PBS에 희석 2 % BSA-PBS (배경) 또는 1 μg ICAM-1. </li><li> PBS로 두 번 접시를 세척하고 37 ℃에서 1 시간 동안 2 % BSA-PBS (100 μL / 웰)에 추가하여 비 특정 사이트를 차단합니다. </li><li> 전체 RPMI에서 5 × 10 6 / ㎖에서 그 동안의 재현 탁 세포에서 1 ㎜ CMFDA 녹색 세포 추적기로 레이블을 37 ° C에서 30 분을 품어. </li><li> 차단 솔루션 (스텝 4.2.2) 폐기 후 1 × 10 6 세포 / 웰 사전 코팅 된 웰에 추가하고 37 ° C에서 1 시간 배양. </li><li> ELISA 리더를 사용하여 접착 성을 정량화 (인가 전압 필터 : 485 nm의 방출 필터 : 535 nm의). 총 입력 (INPUT)에 첫 번째 측정을 수행합니다. </li><li> 2 % BSA-PBS 부드럽게 접시를 씻으 (200 μL / 웰)의 4 배 (배). 각 세척 단계 (접착 배) 후 판의 읽기를 수행합니다. </li><li> 각 측정에 대한 배경 공제 한 후, 특정 ADHES을 계산이온 (접착력) : <img alt="식 (1)" fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51942/51942eq2.jpg" /></li></ol> 4.3) 중합 분석. 이 F-액틴의 중합을 정량화 비색 분석이다. 회 반복 분석을 수행합니다. <ol><li> 재현 탁 1 × ^ 10 분 6 미리 예열 완료 RPMI 100 ㎕의 세포와 특정 자극을 추가 (즉, α-IgM 항체 20 μg / mL)에서 세척 하였다. </li><li> 4 % 파라 포름 알데히드의 400 μL로 반응을 중지하고 실온에서 10 분 동안 세포를 고정한다. </li><li> (5 분, 4 ° C에 300 XG에 원심 분리기) PBS로 3 회 반복한다. </li><li> 2 분 동안 얼음에 PBS-saponine 0.2 % (200 μL)와 함께 뜨는 Permeabilize 하시려면 세포를 폐기하십시오. </li><li> (5 분, 4 ° C 100 XG에 원심 분리기) PBS-saponine 0.1 %로 3 회 세척 100 ㎕의 PBS-saponine 0.1 %에서 뜨는에 resuspend 폐기합니다. </li><li> t 방에서 30 분 동안 Phalloidin Alexafluor-488 (3 μg / ml)으로 염색어둠 속에서 온도. </li><li> PBS-0.1 % saponine로 3 회 반복한다. 300 ㎕의 PBS에서 뜨는에 resuspend 폐기하십시오. </li><li> Phalloidin의 평균 형광 강도 (MFI)를 계산, 유동 세포 계측법에 의해 F-액틴의 양을 정량화. 형광 강도에 기초하여 히스토그램을 생성하기 위해 단일 ​​차원 플롯에서 생성 된 데이터를 분석하여, MFI 값 그래프 리포트에 나타낸다. </li><li> F-액틴의 중합 (Δ F-액틴) 등을 측정한다 : <img alt="식 (1)" fo:content-width="2in" src="/files/ftp_upload/51942/51942eq3.jpg" /></li></ol>

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S., Kohn, E. C., Azad, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ongoing+evolution+of+proteomics+in+malignancy.">The ongoing evolution of proteomics in malignancy.</a> Drug Discov Today. 12, 700-708 (2007).</li><li>Ummanni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+clinically+relevant+protein+targets+in+prostate+cancer+with+2D-DIGE+coupled+mass+spectrometry+and+systems+biology+network+platform.">Identification of clinically relevant protein targets in prostate cancer with 2D-DIGE coupled mass spectrometry and systems biology network platform.</a> PLoS One. 6, (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

<html> 이 원고의 목적은이 방법은 다른 질병 및 / 또는 다른 종류의 시료 16 ~ 18로 확장 될 수있다하더라도, CLL의 병인에 관여하는 분자의 식별을 위해 최적화 된 프로토콜을 설명하는 것이다. 나쁜 예후 19 대 좋은 CLL 환자의 두 부분 집합의 프로테옴 프로파일을 비교함으로써, 우리는 그들이 HS1의 인산화 상태에 차이가 있고 정품 인증은 백혈병 세포의 부착 및 이동 용량 영향...

만성 림프 구성 백혈병 (CLL), 서양 국가에서 가장 일반적인 성인 백혈병, 단일 클론 양성 CD5 + B 림프구의 축적에서 파생 임상 적으로 매우 이질적이다. 그것은 단일 클론 B 세포 림프구 (MBL) 1,2,3 정의 사전 백혈병 형태로서 존재할 수있다. 질병 중 하나 나태한 임상 경과와 함께 나타날 수있는 다른 경우에, 그 치료를 필요로하기 전에 년 동안 안정적으로 유지하거나 실력을 예후 진보적 chemorefractory 질환 등의 치료에도 불구하고. 마지막으로, 자주 치명적인 고 등급 림프종 ​​(리히터 증후군-RS) 2,3,4로 진행 할 수 있습니다. 좋고 나쁜 예후, 질병의 결과 및 생존 예측 인자에 대한 보완적인 정보를 제공 예후 인자의 집합을 기반으로 : 환자는 일반적으로 두 가지 주요 부분 집합으로 분류된다. 임상 적 이질성 가능성이 생물학적 이질성을 반영한다. 유전, 미세 환경 및 CE의 수llular 요인은 더 통합 메커니즘 5 발견되고 있지만 질병의 발병 기전에 동의하는 것으로 나타났다. 상세하게는, 몇몇 연구는 질병의 임상 경과의 차이가 부분적으로 예후 값 6,7,8있는 일부 생물학적 마커의 존재 (또는 부재)에 의해 설명 될 수 있음을 증명하고있다. 이러한 데이터는 질병의 생물학을 더 잘 이해가 예후 표지자 및 치료 대상 모두의 식별 정보를 이용하여, 임상 병리학의 관리를 위해 추가적인 힌트를 제공 할 수 있다는 것을 보여 주었다. 본 연구의 목표는 다른 단백체 기법의 조합은 CLL의 발병과 진행에 관여하는 단백질의 동정에 사용할 수있는 방법을 보여주기위한 것이다. 우리의 접근은 함께 기본적인 단백질체 및 임상 데이터 (5)에 가입 할 수 있음을 보여준다. 선택된 환자에서 본 워크 플로우에서, 주 백혈병 세포(나쁜 예후가 좋은 VS) 격리하고 세포 용 해물이어서 단백체 맵을 얻기 위해 사용된다. 2DE 따라서 각 단백질의 생물학적 활성에 대한 간접적 인 정보를주는 번역 후 변형을 포함하는 세포 집단의 프로테옴 프로파일의 특성화를 허용한다. 전체 세포 용 해물은 그들의 분자량에 기초하여 단백질을 해결 폴리 아크릴 아미드 겔상에서 실행 번째 차원이어서, 등전점에 기초하여 제 적합 실행에 의해 해결된다. 프로테오믹스 맵의 비교 분석은 차등 발현 된 단백질의 동정을 허용 (모두 풍부하고 번역 후 변형의 관점에서) 절단 및 질량 분광법에 의해 분석 될 수 겔 반점. 각 후보의 역할은 다음 서로 다른 분석에 의해 악용 될 수 있습니다. 현재 원고 CLL에 제한이 방식은, 쉽게 따라서 proteomi에 대한 정보를 제공하는 다른 질병 / 샘플로 확장 될 수있다(최저 대 비자극, 야생형 대 자극 정상 대 병리 즉,) 두 군 사이에 C / 생물학적 차이.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="796">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:359px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:160px;">Company</td>
			<td style="width:111px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:359px;">Acetonitril</td>
			<td style="width:160px;">MERCK</td>
			<td style="width:111px;">61830025001730&#160;</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Ammonium Bicarbonate</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td style="width:111px;">A6141-500G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">1,4-Dithioerythritol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td style="width:111px;">D9680-5G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Iodoacetamide</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td style="width:111px;">I6125-25G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td style="width:111px;">223506-25G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Trypsin, Sequencing Grade</td>
			<td style="width:160px;">ROCHE</td>
			<td style="width:111px;">11418475001</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#945;-cyano-4-hydroxycinnamic acid</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td style="width:111px;">C2020-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Trifluoroacetic acid</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td style="width:111px;">T6580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:359px;">ZipTip&#181;-C18</td>
			<td>MILLIPORE</td>
			<td>ZTC18M096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">RosetteSep Human B Cell Enrichment Cocktail</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>15064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">PBS</td>
			<td>EUROCLONE</td>
			<td>ECB4004L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">FBS</td>
			<td>DOMINIQUE DUTSCHER</td>
			<td>S1810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Lymphoprep</td>
			<td>SENTINEL DIAGNOSTICS</td>
			<td>1114547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Trypan Blue</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">CD19</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>082A07770</td>
			<td>ECD</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">CD5</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>082A07754</td>
			<td>PC5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">CD3</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>082A07746</td>
			<td>FITC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">CD14</td>
			<td>BD</td>
			<td>345785</td>
			<td>PE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">CD16</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>082A07767</td>
			<td>PC5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">CD56</td>
			<td>BECKMAN COULTER</td>
			<td>082A07789</td>
			<td>PC5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Ettan IPGphor 3 Isoelectric Focusing Unit</td>
			<td style="width:160px;">GE-Healthcare</td>
			<td>11-0033-64&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Urea</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>U6504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Tris-Hcl Buffer</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-0799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">CHAPS</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>C2020-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">DTT</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>D9163-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">IPGstrips</td>
			<td>GE-Healthcare</td>
			<td>17-1233-01&#160;</td>
			<td>Linear pH 4-7 18cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">IPGbuffer</td>
			<td>GE-Healthcare</td>
			<td>17-6000-86</td>
			<td>pH 4-7</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Glycerol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>G6279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">PROTEAN II XL Cell</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>165-3188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">SDS</td>
			<td>INVITROGEN</td>
			<td>NP0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Acrilamide</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-0156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Agarosio</td>
			<td>INVITROGEN</td>
			<td>16500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Methanol</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>32213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Acetic Acid</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Formalin</td>
			<td>BIO-OPTICAL</td>
			<td>05-K01009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>9832500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Sodium Thiosulfate</td>
			<td>FLUKA</td>
			<td>72049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Silver Nitrate</td>
			<td>FLUKA</td>
			<td>85228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Molecular Dynamics Personal SI Laser Densitometer</td>
			<td>Amersham Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ImageMaster 2D Platinum 5.0</td>
			<td>Amersham Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Sodium Carbonate</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>A0250292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">MALDI-TOF Voyager-DE STR</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Data Explorer software (version 3.2)&#160;</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">transwell chambre 6.6 mm diameter</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>3421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">RPMI</td>
			<td>EUROCLONE</td>
			<td>ECB2000L</td>
			<td>WITH L-GLUTAMINE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Gentamicin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>G1397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">SDF-1</td>
			<td>PREPROTECH</td>
			<td>300-28A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Flat-bottom 96-well plate</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>353072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">BSA</td>
			<td>SANTA CRUZ</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">ICAM-1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>720-IC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">CMFDA</td>
			<td>Life Thechnology</td>
			<td>C7025</td>
			<td>Green</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">IgM</td>
			<td>SOUTHERNBIOTECH</td>
			<td>2020-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Saponine</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>S-7900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Phalloidin&#160;</td>
			<td>Life Thechnology</td>
			<td>A12379</td>
			<td>Alexa fluor 488</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

from a 2de-gel spot to protein function: lesson learned from hs1 in chronic lymphocytic leukemia

종양의 개시 및 진행에 관여하는 분자의 확인은 환자의 임상 적 관리를 위해, 그 결과로서, 질병의 이해를위한 기초 생물학이고. 본 연구에서 우리는 만성 림프 구성 백혈병 (CLL)의 진행에 관여하는 분자의 식별을위한 최적화 프로테오믹스 방법을 설명한다. 구체적으로, 백혈병 세포 용 해물은 2 차원 전기 영동 (2DE)에 의해 해결되고 2DE 젤의 &quot;명소&quot;로 시각화. 단백질체지도의 비교 분석은 질량 분석 (MS)에 의해 격리 포착하고 식별 (풍부하고 번역 후 변형의 관점에서) 서로 다르게 발현 된 단백질의 식별을 할 수 있습니다. 확인 된 후보의 생물학적 기능은 우리가 주 백혈병 세포에 최적화 된 것으로, 다른 분석 (즉, 마이그레이션, 접착력과 F-액틴의 중합)에 의해 테스트 할 수 있습니다.

우리는 차 백혈병 B 세포 만성 림프 구성 백혈병 환자의 PB를 형성 고립 된 우리는 프로테옴지도를 분석 하였다. 샘플 (N = 104)는 각 환자 (좋은 예후 대 나쁜 예후)과 2DE 젤의 비교 분석이 수행 된 임상 기능에 따라 두 가지 주요 부분 집합으로 그룹화 하였다. 분석을 허용 차등이 부분 집합 사이에 표현 명소의 식별 (번역 후 변형의 변화를 암시하는 존재 / 부재 또는 겔에...

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From a 2DE-Gel Spot to Protein Function: Lesson Learned From HS1 in Chronic Lymphocytic Leukemia

여기에서 우리는 커플이 프로테오믹스 기술, 즉 전기 영동 (2DE)와 질량 분석기 (MS) 2 차원, 차동 차 샘플 두 개 이상의 그룹 중 / 번역 후 변형 된 단백질을 발현 식별 할 수있는 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은, 실험과 함께 기능성, 예후 마커 / 치료 대상의 식별 및 특성을 허용한다.

단백질 기능에 2DE - 젤 지점에서 만성 림프 구성 백혈병에 HS1에서 배운 레슨

The identification of molecules involved in tumor initiation and progression is fundamental for understanding disease&#8217;s biology and, as a ...

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Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic processes that prepare the alimentary canal for digestion. Steady progress is being made towards understanding the early biochemical and molecular events underlying taste transduction (for a review, Breslin and Spector, 20081). However, progress to date has largely resulted from animal models. Yet, since marked differences in receptor specificity and receptor density vary among species, human taste transduction will only be understood by using human taste tissue. Here we describe a biopsy technique to collect human fungiform papillae, visible as rounded pink anterior structures, about 0.5 mm in diameter that contain taste buds. These biopsied papillae are used for several purposes including the isolation of viable taste bud cells, in situ hybridization, immunohistochemistry and, through techniques of molecular biology, the identification of taste-specific novel proteins.

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Knowledge of molecular mechanisms underlying gustatory transduction has recently enjoyed significant advances, largely due to using animal models. However, the wide diversity in taste sensitivity and specificity among mammals warrants studies in human tissue. We describe a biopsy technique to collect living taste cells from the papillae on human tongue.

인간 혀에서 Fungiform (맛) 용의자를 수집하는 기술

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

연구

의학

Utilizing Repetitive Transcranial Magnetic Stimulation to Improve Language Function in Stroke Patients with Chronic Non-fluent Aphasia

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been shown to significantly improve language function in patients with non-fluent aphasia1. In this experiment, we demonstrate the administration of low-frequency repetitive TMS (rTMS) to an optimal stimulation site in the right hemisphere in patients with chronic non-fluent aphasia. A battery of standardized language measures is administered in order to assess baseline performance. Patients are subsequently randomized to either receive real rTMS or initial sham stimulation. Patients in the real stimulation undergo a site-finding phase, comprised of a series of six rTMS sessions administered over five days; stimulation is delivered to a different site in the right frontal lobe during each of these sessions. Each site-finding session consists of 600 pulses of 1 Hz rTMS, preceded and followed by a picture-naming task. By comparing the degree of transient change in naming ability elicited by stimulation of candidate sites, we are able to locate the area of optimal response for each individual patient. We then administer rTMS to this site during the treatment phase. During treatment, patients undergo a total of ten days of stimulation over the span of two weeks; each session is comprised of 20 min of 1 Hz rTMS delivered at 90% resting motor threshold. Stimulation is paired with an fMRI-naming task on the first and last days of treatment. After the treatment phase is complete, the language battery obtained at baseline is repeated two and six months following stimulation in order to identify rTMS-induced changes in performance. The fMRI-naming task is also repeated two and six months following treatment. Patients who are randomized to the sham arm of the study undergo sham site-finding, sham treatment, fMRI-naming studies, and repeat language testing two months after completing sham treatment. Sham patients then cross over into the real stimulation arm, completing real site-finding, real treatment, fMRI, and two- and six-month post-stimulation language testing.

We explore the use of repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS) to improve language abilities in patients with chronic stroke and non-fluent aphasia. After identifying a site in the right frontal gyrus for each patient that responds optimally to stimulation, we target this site during ten days of rTMS treatment.

만성 비 유창한 실어증과 뇌졸중 환자의 언어 기능을 개선하기 위해 반복적 경 두개 자기 자극을 활용

Transcranial magnetic stimulation (TMS) has been shown to significantly improve language function in patients with non-fluent aphasia1. In this ...

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spots meet this need, and can be collected in the field with high response rates. These elements are particularly important in longitudinal study designs including interventions where attrition is critical to avoid, and high response rates improve the interpretation of results. Dried Blood Spot sample collection is simple, quick, relatively painless, less invasive then venipuncture, and requires minimal field storage requirements (i.e.&#160;samples do not need to be immediately frozen and can be stored for a long period of time in a stable freezer environment before assay). The samples can be analyzed for a variety of different analytes, including cholesterol, C-reactive protein, glycosylated hemoglobin, numerous cytokines, and other analytes, as well as provide genetic material. DBS collection is depicted as employed in several recent studies.

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease or health. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spot (DBS) collection meets this need, can be collected in the field with high response rates&#160;and analyzed for a variety of biomarkers.

건강 바이오 마커의 혈액 스팟 컬렉션 인구 연구에의 참여를 극대화하기 위해 건조

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

쥐의 방광 통증 모델로 방광 팽창 유발 내장 운동 응답

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this is only partially explained by traditional CVD risk factors. Vascular dysfunction is an important non-traditional risk factor, characterized by vascular endothelial dysfunction (most commonly assessed as impaired endothelium-dependent dilation [EDD]) and stiffening of the large elastic arteries. While various techniques exist to assess EDD and large elastic artery stiffness, the most commonly used are brachial artery flow-mediated dilation (FMDBA) and aortic pulse-wave velocity (aPWV), respectively. Both of these noninvasive measures of vascular dysfunction are independent predictors of future cardiovascular events in patients with and without kidney disease. Patients with CKD demonstrate both impaired FMDBA, and increased aPWV. While the exact mechanisms by which vascular dysfunction develops in CKD are incompletely understood, increased oxidative stress and a subsequent reduction in nitric oxide (NO) bioavailability are important contributors. Cellular changes in oxidative stress can be assessed by collecting vascular endothelial cells from the antecubital vein and measuring protein expression of markers of oxidative stress using immunofluorescence. We provide here a discussion of these methods to measure FMDBA, aPWV, and vascular endothelial cell protein expression.

The degree of vascular dysfunction and contributing physiological mechanisms can be assessed in patients with chronic kidney disease by measuring brachial artery flow-mediated dilation, aortic pulse-wave velocity, and vascular endothelial cell protein expression.

만성 신장 질환 환자에서 혈관 기능의 평가

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

고립의 방법<em&gt; 전의 VIVO</em쥐 모델에서&gt; 폐 관류 : 쥐 EVLP 프로그램 개발에서 교훈을

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension and Assessment of Right Ventricular Function in the Piglet

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. Pulmonary Hypertension (PH) was induced in 3-week-old piglets by a progressive obstruction of the pulmonary vascular bed. A ligation of the left Pulmonary Artery (PA) was performed first through a mini-thoracotomy. Second, weekly embolizations of the right lower pulmonary lobe were done under fluoroscopic guidance with n-butyl-2-cyanoacrylate during 5 weeks. Mean Pulmonary Arterial Pressure (mPAP) measured by ritght heart catheterism, increased progressively, as well as Right Atrial pressure and Pulmonary Vascular Resistances (PVR) after 5 weeks compared to sham animals. Right Ventricular (RV) structural and functional remodeling were assessed by transthoracic echocardiography (RV diameters, RV wall thickness, RV systolic function). RV elastance and RV-pulmonary coupling were assessed by Pressure-Volume Loops (PVL) analysis with conductance method. Histologic study of the lung and the right ventricle were also performed. Molecular analyses on RV fresh tissues could be performed through repeated transcutaneous endomyocardial biopsies. Pulmonary microvascular disease in obstructed and unobstructed territories was studied from lung biopsies using molecular analyses and pathology. Furthermore, the reliability and the reproducibility was associated with a range of PH severity in animals. Most aspects of the human CTEPH disease were reproduced in this model, which allows new perspectives for the understanding of the underlying mechanisms (mitochondria, inflammation) and new therapeutic approaches (targeted, cellular or gene therapies) of the overloaded right ventricle but also pulmonary microvascular disease.

Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) and Right Ventricular (RV) dysfunction were induced in piglets by progressive obstruction of the pulmonary arteries. Consequences were remarkably similar to those observed in CTEPH patients. This animal model would be a very useful tool for pathophysiology and therapeutic experiments on CTEPH and RV failure.

만성 혈전 색 전성 폐 고혈압과 돼지에서 마우스 오른쪽 심실 기능의 평가

An original piglet model of Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension (CTEPH) associated with chronic Right Ventricular (RV) dysfunction is described. ...

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and progress in this site. The model presented in the current report utilizes human primary bone marrow stromal cells and osteoblasts as two representative cell types from the marrow niche that influence tumor cell phenotype. The in vitro co-culture conditions described for human leukemic cells with these primary niche components support the generation of a chemoresistant subpopulation of tumor cells that can be efficiently recovered from culture for analysis by diverse techniques. A strict feeding schedule to prevent nutrient fluxes followed by gel type 10 cross-linked dextran (G10) particles recovery of the population of tumor cells that have migrated beneath the adherent bone marrow stromal cells (BMSC) or osteoblasts (OB) generating a "phase dim" (PD) population of tumor cells, provides a consistent source of purified therapy resistant leukemic cells. This clinically relevant population of tumor cells can be evaluated by standard methods to investigate apoptotic, metabolic, and cell cycle regulatory pathways as well as providing a more rigorous target in which to test novel therapeutic strategies prior to pre-clinical investigations targeted at minimal residual disease.

Modeling Chemotherapy Resistant Leukemia In Vitro

The current report summarizes a protocol that can be utilized to model the influence of the bone marrow microenvironment niche on leukemic cells with emphasis placed on enrichment of the most chemoresistant subpopulation.

모델링 화학 요법 내성 백혈병<em&gt; 체외</em

It is well established that the bone marrow microenvironment provides a unique site of sanctuary for hematopoietic diseases that both initiate and ...

A Protocol to Acquire the Degenerative Tenocyte from Humans

Tendinopathy, a painful condition that develops in response to tendon degeneration, is on the rise in the developed world due to increasing physical activity and longer life expectancy. Despite its increasing prevalence, the underlying pathogenesis still remains unclear, and treatment is generally symptomatic. Recently, numerous therapeutic options, including growth factors, stem cells, and gene therapy, were investigated in hopes of enhancing the healing potency of the degenerative tendon. However, the majority of these research studies were conducted only on animal models or healthy human tenocytes. Despite some studies using pathological tenocytes, to the best of our knowledge there is currently no protocol describing how to obtain human degenerative tenocytes. The aim of this study is to describe a standard protocol for acquiring human degenerative tenocytes. Initially, the tendon tissue was harvested from a patient with lateral epicondylitis during surgery. Then biopsy samples were taken from the extensor carpi radialis brevis tendon corresponding to structural changes observed at the time of surgery. All of the harvested tendons appeared to be dull, gray, friable, and edematous, which made them visually distinct from the healthy ones. Tenocytes were cultured and used for experiments. Meanwhile, half of the harvested tissues were analyzed histologically, and it was shown that they shared the same key features of tendinopathy (angiofibroblastic dysplasia or hyperplasia). A secondary analysis by immunocytochemistry confirmed that the cultured cells were tenocytes with the majority of the cells having positive stains for mohawk and tenomodulin proteins. The qualities of the degenerative nature of tenocytes were then determined by comparing the cells with the healthy control using a proliferation assay or qRT-PCR. The degenerative tenocyte displayed a higher proliferation rate and similar gene expression patterns of tendinopathy that matched previous reports. Overall, this new protocol might provide a useful tool for future studies of tendinopathy.

In vitro use of degenerative tenocytes is essential when investigating the efficacy of novel treatment on tendinopathy. However, most research studies use only the animal model or a healthy tenocyte. We propose the following protocol to isolate human degenerative tenocytes during surgery.

인간에서 퇴행 성 Tenocyte를 취득 하는 프로토콜

Tendinopathy, a painful condition that develops in response to tendon degeneration, is on the rise in the developed world due to increasing physical ...

Protocol to Create Chronic Wounds in Diabetic Mice

Chronic wounds develop as a result of defective regulation in one or more complex cellular and molecular processes involved in proper healing. They impact ~6.5M people and cost ~$40B/year in the US alone. Although a significant effort has been invested in understanding how chronic wounds develop in humans, fundamental questions remain unanswered. Recently, we developed a novel mouse model for diabetic chronic wounds that have many characteristics of human chronic wounds. Using db/db-/- mice, we can generate chronic wounds by inducing high levels of oxidative stress (OS) in the wound tissue immediately after wounding, using a one-time treatment with inhibitors specific to the antioxidant enzymes catalase and glutathione peroxidase. These wounds have high levels of OS, develop biofilm naturally, become fully chronic within 20 days after treatment and can remain open more for more than 60 days. This novel model has many features of diabetic chronic wounds in humans and therefore can contribute significantly to advancing fundamental understanding of how wounds become chronic. This is a major breakthrough because chronic wounds in humans cause significant pain and distress to patients and result in amputation if unresolved. Moreover, these wounds are very expensive and time-consuming to treat, and lead to significant loss of personal income to patients. Advancements in this field of study through the use of our chronic wound model can significantly improve health care for millions who suffer under this debilitating condition. In this protocol, we describe in great detail the procedure to cause acute wounds to become chronic, which has not been done before.

Chronic wounds are developed from acute wounds on a diabetic mouse model by inducing high levels of oxidative stress after a full-thickness cutaneous wound. The wound is treated with inhibitors for catalase and glutathione peroxidase, resulting in impaired healing and biofilm development by bacteria present in the skin microbiome.

당뇨병 마우스에서 만성 상처를 만드는 프로토콜

Chronic wounds develop as a result of defective regulation in one or more complex cellular and molecular processes involved in proper healing. They impact ...