이 작품은 건강 연구 (CIHR) (교부금 MOP-119503)과 캐나다의 자연 과학 및 공학위원회 (NSERC)의 캐나다 연구소에 의해 투자되었다. NSERC도 YD하는 여름 studentships을 지원 AA YD는 4 년 교제 수상 브리티시 컬럼비아 대학 (UBC)에서 지원, AA는 대학원생의 석사 수상 (CGS-M)와 CIHR에 의해 지원됩니다. 우리는 그림 2의 이미지를 생성하는 데 사용되는 현미경으로 지원 캘빈 Roskelley 감사합니다. 우리는 또한 UBC 동물 및 유동 세포 계측법 시설의 지원을 인정합니다.

마우스는 브리티시 컬럼비아 동물 관리위원회의 대학에 의해 승인 절차에 의한 윤리적 인 동물 연구를위한 동물 관리 지침에 캐나다 문화원에 따라 안락사시켰다. 1. 마우스 대퇴골과 경골에서 단일 세포 골수 서스펜션 취득 <ol><li> 생물 안전 캐비닛 (BSC) 70 % 에탄올로, 다음 청소 / 스프레이 B​​SC 표면을 캐비닛 공기를 제거하고 공기 흐름의 안정화를 허용하는 과정의 시작에 앞서 15 분에 전환합니다. 프로토콜의 전체에 대한 가능한 한 무균 모든 것을 유지. 비 멸균 상태에서 뼈를 절단하지 마십시오. </li><li> 70 % 에탄올에 몸을 담근에 의해 해부 도구를 준비, 5 % 소 태아 혈청 (HBSS-FCS), 멸균 페트리 접시 (100mm X 15mm), 1 행크의 균형 소금 솔루션 (해부 가위, 집게 2 쌍의 1 쌍) BSC에있는 ML의 주사기 26½ 게이지 바늘 원추형 수집 튜브 (15 ml를 50 ml)에 용해시키고, 종이 타월. </li><li> 사용하여 마우스를 안락사기관의 동물 연구 윤리위원회의 승인을 프로토콜. 상기 BSC로 가져와 하나 또는 두 종이 수건 위에 배치하고 70 % 에탄올로 마우스를 스프레이. </li><li> 뚜껑에 2 ml의 - BSC에에서 나누어지는,베이스에 HBSS-FCS 10 ml의 1을 멸균 페트리 접시에 무균를 엽니 다. </li><li> 이 위를 향하도록 뒷면과의 뱃속에 마우스를 놓고 비 지배적 인 손의 손가락으로 가슴 부분 주위의 피부를 들어 올립니다. 피부가 상승 절개를 만들기 위해 가위를 사용합니다. </li><li> 위의 절개 대회의이 끝날 때까지 당겨 계속 위장 뒤쪽에서 마우스 주위의 피부를 떨어져 당겨 조심스럽게 잘라 양쪽 끝, 각각의 손으로 한쪽 끝을 잡아와. </li><li> 이 위를 향하도록 위장에 마우스를 플립, 그리고 한 손으로 아래로 다리쪽으로 피부의 아래쪽을 당겨 다리가 노출 될 때까지 피부를 뒤로 당겨 유지한다. </li><li> 마우스까지의 발을 잡고 발목 관절 위의 아킬레스 힘줄을 잘라근육 접속 인대 위 경골의 하단부에 발한다. 이 다리 뼈에서 발을 느슨하게. </li><li> 발에서 다리를 들고 있지만, 낮은 다리에서 허벅지 근육을 절단하는 대퇴골의 하단부에 모든 무릎 관절 주위에 가위로 근육과 인대를 잘라. 부드럽게 떨어져 비골과 대퇴 표면에서 느슨하게 근육을 당겨 집게를 사용합니다. 무거운 출혈을 방지하기 위해 대퇴 동맥을 절단하지 않도록주의하십시오. </li><li> 한 손으로는 발에 들고, 고관절에서 대퇴골의 상단에서 아래로 눌러 열린 가위, 다리를 회전하고 무료로 마지막 컷을 만들기 위해 가위를 사용하는 동안 고관절에서 대퇴골을 분리 부드럽게 당겨 몸에서 다리. </li><li> 이후이 시점에서, 전용 살균 집게로 조직을 개최합니다. 일단 다리에 잡고 다른 쪽 다리를 잡아 당깁니다. 참고 : 연결하는 인대 단계에서 절단으로이 많은 힘을 필요가 없습니다1.9. 또한, 단지 뼈가 융합 발목 위의 경골을 잘라. </li><li> 한 집게 세트와 서로 경골과 비골의 기단부와 대퇴골의 말단에 의해 다리를 잡고 조심스럽게 대퇴골과 슬개골에서 그들을 분리하는 무릎 관절의 반대 방향으로 경골과 비골을 구부. </li><li> 여전히 낮은 다리 뼈에 부착 남아있는 인대와 근육을 당겨 집게를 사용합니다. 이 골수 세포를위한 플러시 너무 작아 여기, 집게 결합 조직과 함께 제거 비골. 반전 페트리 접시 뚜껑에 청소 경골를 놓습니다. </li><li> 한 집게 세트와 서로 슬개골과 대퇴골의 하단을 잡고 제거를위한 공동의 반대 방향으로 슬개골과 주변 조직을 구부리십시오. 그리고 대퇴골에서 결합 조직을 나머지 닦아; 집게와 함께 그들을 떼어과 반전 페트리 접시 뚜껑에 놓습니다. 슬개골을 폐기하십시오. </li><li> 1.7 반복- 다른 다리와 1.13이 필요합니다. 필요한 경우 교통 1 ml의 멸균 HBSS - FCS를 포함하는 1.6 ml의 마이크로 원심 튜브에 뼈를 전송합니다. </li><li> 1, 반전 페트리 접시 뚜껑에 뼈를 배치 - HBSS-FCS 2 ㎖ 여전히 경골과 대퇴골에 연결된 모든 잔여 조직을 청소 집게를 사용하여 다음 HBSS- 10 ㎖를 포함하는 페트리 접시의 바닥에 뼈를 전송 FCS. 대안 적으로, 뼈를 세척하고 70 % 에탄올 불린 조직을 사용하여 부착 근육 조직을 제거한다. </li><li> 가위로 반으로 뼈의 각을 잘라. 뼈가 접시에 머물 수 있도록 절단하면서 부분적으로 멸균 뚜껑 페트리 접시를 보호. 대안으로, 다음 단계에서 세척 할 수 있도록 각각의 뼈의 단부를 잘라. </li><li> 1 ML의 주사기에에 26½ G 바늘을 부착하고, 페트리 접시에서 1 ml의 HBSS-FCS를 그립니다. 뼈 조각의 끝 부분에 바늘의 끝을 삽입하고 골수 세포 (뼈 안에 부드러운 빨간색 조직)를 세척하십시오. 머리에 바늘을 삽입뼈와 구단의 모든 적색 골수가 제거 될 때까지. 색 흰색으로 뼈를 관찰합니다. </li><li> 단일 세포 현탁액을 형성하기 위해 주사기를 통해 몇 번 골수의 눈에 보이는 덩어리를 전달합니다. </li><li> 플러시 뼈를 폐기하십시오. 잘 세포 현탁액을 혼합하고 포집 관에 전송하는 데 10 ml를 피펫을 사용합니다. 접시에 잔류 세포를 수집하는 HBSS-FCS의 5 ㎖로 한 번 페트리 접시를 씻어. 얼음에 세포를 놓습니다. 주 :이 저장되면 골수 세포 현탁액은 아직 실행 가능 - 39 ° C에서 3 시간. </li></ol> 골수 세포의 2. 도금 및 배양 (골수) <ol><li> 다음 시약 및 소모품을 준비합니다. <ol><li> 2 mM 트리스 pH를 7.2의 최종 용액에 0.84 %의 염화 암모늄함으로써 적혈구 (RBC) 용해 완충액을 준비하고, 0.2 마이크론 필터를 통해 여과하여 멸균. </li><li> 10 % FCS, 20 mM의 HEPES, 1X 비 필수 아미노산, 55 #를 추가하여 BMC 매체를 준비181; RPMI 배지 1640 M 2- 머 캅토 에탄올, 50 U / ㎖ 페니실린 및 스트렙토 마이신, 1 mM 피루브산 나트륨, 및 2 mM L- 글루타민. </li><li> 시중에서 판매하는 재조합 GM-CSF를 구하거나 GM-CSF 유전자 (20)로 형질 Ag8.653로 융합 시킴으로 수 수득 골수종 세포에서 뜨는을 포함하는 GM-CSF를 사용합니다. ELISA에 의해 상층 액에서 GM-CSF의 농도를 결정하고 BMC 미디어에 20 ng를 / ㎖의 등가를 추가합니다. </li></ol></li><li> 5 분 동안 314 XG에서 골수 세포를 스핀 다운. 펠렛을 적혈구에 의한 적색이다. BSC에에서, 흡입 진공 활용하여 펠렛을 푼 다음 RBC의 용해 버퍼 10 ㎖를 추가 부착 된 멸균 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 뜨는을 대기음. 소용돌이 세포를 재현 탁하고 실온에서 5 분간 RBC 용해 완충액에서 배양. </li><li> HBSS-FCS 후 5 분 동안 314 XG에서 세포를 회전하고 뜨는을 대기음의 10 ML을 추가합니다. 화이트 색상으로 세포 펠렛을 준수하십시오. BMC 미디어의 원하는 볼륨에서 세포를 재현 탁. </li><li> resu를 계산0.4 % 트리 판 블루와 죽은 세포를 염색 후 혈구를 사용하여 spended 세포. 참고 한 다리 (단일 경골 및 대퇴골)에서 골수를 사용하는 경우, BMC 배지 5 ㎖에 재현 탁 세포 현탁액 10 μL를 가지고 블루 0.4 % 트리 판 70 μL로 희석하여 잘 혼합하고 10 μl를 전송할 혈구 챔버 1/8 셀 희석. 사분면 내 생존 세포 수 : 네 사분면 카운트의 평균 희석 계수 × 104 = mL의 세포 수를 X. RBC 용해 후 4 × 10 7 세포 - 대퇴골과 한쪽 다리에서 경골은 일반적으로 약 2를 얻을 것입니다. </li><li> 배양이 끝날 때 실험을 위해 필요한 총 세포 수에 기초하여 하류 실험에 필요한 골수 배양 물 10 ㎖ 접시의 수를 추정한다. 주 : 각 접시는 2 × 10 6 골수 초기 시딩에서 세포와 수익률 5 필요 - 7 일에서 10 × 10 6 세포를. <ol><li> 알리5 분 동안 314 XG에서 스핀 다운 새 튜브에 도금을위한 셀의 총 개수를 quot 상등액을 흡인하고, BMC 배지에서 4 × 106 세포 / ㎖로 세포를 재현 탁. </li></ol></li><li> BMC 매체의 9.5 ml의 GM-CSF (재조합 또는 상층 액을 포함하는 GM-CSF)에서 200 NG를 포함하여 새로운 멸균 100mm X 15mm 페트리 접시를 준비합니다. 10ml에 2 × 105 세포 / ml의 최종 농도 페트리 접시의 중앙에 4 × 106 세포 / ㎖의 골수 세포 500 μl를 추가한다. 주 : 멸균 페트리 접시가 아닌 조직 배양 접시를 사용하는 것이 중요합니다. 세포를 추가 할 때 또한, 세포가 중앙에 집중 남아 보장하고 파종 후 미디어를 변경하는 동안 요리에 방해를 최소화 할 수 있습니다. 37 ° C와 5 % CO 2에서 세포를 품어. 이것은 문화의 날 0입니다. </li><li> 3 일에, 세포의 각 접시에 GM-CSF의 200 NG를 포함하는 신선한 BMC 미디어 10 ㎖를 추가합니다. 방해 O를 최소화하기 위해주의서스펜션에 집중 세포 F. 세포 배양의 총 부피는 이제 20 ㎖이다. </li><li> 100X 배율의 광학 현미경 하에서 세포를 관찰한다. 다수의 비 부착 세포 (원형)과 몇 부착 세포 (평면)를 관찰한다. 꽃의 서너 닮은 꽃잎 군에서 세포 증식을 나타내는 볼 수있다. </li><li> 하루 6 일 반 용지 변경을 수행합니다. 조심스럽게 5 분, 흡인에 대한 314 XG에 스핀 다운, 멸균 50 ML 원뿔 튜브에 미디어 10 ㎖를 제거하고 상층 액을 버린다. </li><li> GM-CSF, 부드럽게 선회 및 20 ㎖ 총 부피의 원래 세포 배양 접시에 20 ng를 추가 / ㎖을 함유하는 신선한 BMC 배지 10 ㎖에서 세포 펠렛을 재현 탁. 현미경으로 세포를 관찰한다. 참고 : 7 일 문화는 70 %에 있거나 부착 평면 셀 라운드 비 부착 세포의 밀도 구름 포화 상태에 더해야한다. </li></ol> 3. 수집 및 유동 세포 계측법에 대한 BMDC와 BMDMs 준비 <ol> &lt;리&gt; 4 ° C에서 모든 버퍼를 유지합니다. </li><li> 셀, 50 ML 원뿔 포집 관에 배양 상등액의 제 1 이송 10ml를 수확하기 위해 하루 10으로 7 일에서 세포를 수확 후 약 30도에 의해 수직으로 접시를 기울이고 나머지 10 ml를 피펫 팅하여 요리를 씻어 요리의 상단에서 문화. 이 세척 5 회, 1/3 접시를 회전 할 때마다 반복합니다. </li><li> 동일 수집 튜브에 세포의 나머지 10 ml의 이동 플레이트 및 부착 세포를 버린다. 주 : 세척 비 부착 느슨하게 부착 세포를 제거합니다; 평탄 부착 세포의 세척에 저항. 일반적으로, 5 사이 - 10 × 10 (6) 비 부착 세포는 하루 7과 2에 하나의 플레이트에서 예상 -, 10 일에 5 × 10 6 셀 루츠 외 있지만. 하루에 10에서보고 된 10 × 10 6 세포를 부착 세포는 정상적으로 수행되지 않습니다. 그러나, 이들 세포는 필요하다면 비 - 부착 세포와 비교 될다음, 그들은 제거 될 수있다. 1X PBS, 비 부착 세포를 제거한 후 접시 pH 7.4의 0.7 mM의 EDTA 5 mL를 추가 분리 튜브에 부착 세포를 제거하고 수집하도록 상하로 5 분, 피펫, 37 ° C에서 배양한다. </li><li> 5 분 314 XG에서 수집 된 세포를 스핀 다운 및 뜨는을 대기음. 4 ° C에서 5 ml의 멸균 BMC 매체에 재현 탁은, 소용돌이 부드럽게 혼합하고, 트리 판 블루와 혈구를 사용하여 계산합니다. 참고 : 5 얻을 것입니다 각 접시 - 하루 7 문화 10 × 10 (6) 비 부착 세포를. 지금부터, 4 ° C에서 모든 단계를 수행합니다. </li><li> 유세포 분석, 5 ㎖ 폴리스틸렌 둥근 바닥 튜브에 2 × 105 세포를 각각의 샘플에 대한 전달은 각 4 ° C (1X 인산 완충 식염수, 2 mM의 EDTA, 2 % 소 혈청 알부민)로 FACS 완충액 300 μL를 추가 견본. </li><li> 5 분 314 XG에서 세포를 스핀 다운 및 뜨는을 대기음. 상기 보이는 흰색, 불투명 한 펠렛을 관찰튜브의 바닥. </li><li> 표지 된 Ab의 Fc 수용체 100 ㎕에 재현 탁 된 세포 (골수종 세포주의 제조에서 사용 2.4G2 1/10 뜨는) Fc 수용체 결합을 차단하고 4 ℃에서 20 분 동안 배양. 그런 다음 5 분 동안 314 XG에서 세포를 스핀 다운, 각 샘플 부드럽게 소용돌이에 FACS 버퍼의 300 μl를 추가하고 뜨는을 대기음. </li><li> 0.2 ㎍ / ㎖의에서의 CD11c-PeCy7 100 ㎕에 재현 탁 세포, 0.25 ㎍ / ㎖의에서 GR1 - 퍼시픽 블루, 0.05 ㎍ / ㎖의에서 MHCII-APC 및 FL-HA는 약 / ㎖ 2 μg의는 대 식세포와 수지상 세포를 식별합니다. 주 : FL-HA는 형광 및 닭 빗 히알루 론산 나트륨을 사용하여 집으로 준비는 이전에 설명 21. </li><li> 세포 표면에 결합 할 수 있도록 39 ° C에서 20 분 동안 인큐베이션. 각 샘플에 FACS 버퍼의 300 μl를 추가, 부드럽게 소용돌이 후 4 ° C에서 5 분 동안 314 XG에 세포를 스핀 다운 및 뜨는을 대기음 참고 :. 바이오 경우형광 스트렙 타비 딘과 9 - tinylated 항체 3.8에 사용되는 3.8를 반복합니다. </li><li> 혼합 5 분 동안 314 XG에서 세포를 스핀 다운 FACS 버퍼의 또 다른 300 μl를 부드럽게 소용돌이와 세포를 씻으십시오. 뜨는을 대기음 0.1 포함 FACS 버퍼 200 μL의 세포를 재현 탁 - 생존 할 셀 라벨을 프로피 디움 아이오다 이드 또는 DAPI 1 ㎖ 당 0.2 μg의합니다. 셀은 유세포 분석 (22)에 대한 준비가되어 있습니다. 결과를 참조하고, 인구의 자세한 내용은 그림 3과 세포를 어떻게 게이트했다 : 주. </li></ol>

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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cells+solicit+their+own+help+from+T+cells.">cells solicit their own help from T cells.</a> J. Exp. Med. 183 (3), 891-899 (1996).</li><li>de Belder, A. N., Wik, K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+properties+of+fluorescein-labelled+hyaluronate.">Preparation and properties of fluorescein-labelled hyaluronate.</a> Carbohydr Res. 44 (2), 251-257 (1975).</li><li>Stewart, C. C., Stewart, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunophenotyping.">Immunophenotyping.</a> Current Protocols in Cytometry. , (2001).</li><li>Dearman, R. J., Cumberbatch, M., Maxwell, G., Basketter, D. A., Kimber, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+ligand+activation+of+murine+bone+marrow-derived+dendritic+cells.">Toll-like receptor ligand activation of murine bone marrow-derived dendritic cells.</a> Immunology. 126 (4), 475-484 (2009).</li><li>Abdi, K., Singh, N. J., Matzinger, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide-Activated+Dendritic+Cells:+'Exhausted'+or+Alert+and+Waiting.">Lipopolysaccharide-Activated Dendritic Cells: 'Exhausted' or Alert and Waiting.</a> J Immunol. 188 (12), 5981-5989 (2012).</li><li>Contreras, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Leishmania+mexicana+Infection+on+Dendritic+Cell+Signaling+and+Functions.">Impact of Leishmania mexicana Infection on Dendritic Cell Signaling and Functions.</a> PLoS Negl Trop Dis. 8 (9), (2014).</li><li>Feng, T., Cong, Y. Z., Qin, H. W., Benveniste, E. N., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Mucosal+Dendritic+Cells+from+Bone+Marrow+Reveals+a+Critical+Role+of+Retinoic+Acid.">Generation of Mucosal Dendritic Cells from Bone Marrow Reveals a Critical Role of Retinoic Acid.</a> J Immunol. 185 (10), 5915-5925 (2010).</li><li>Grauer, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+maturation+states+of+rat+bone+marrow-derived+dendritic+cells+using+an+improved+culture+technique.">Analysis of maturation states of rat bone marrow-derived dendritic cells using an improved culture technique.</a> Histochem Cell Biol. 117 (4), 351-362 (2002).</li><li>Suzuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+macrophage+transplantation+therapy.">Pulmonary macrophage transplantation therapy.</a> Nature. 514 (7523), 450-454 (2014).</li><li>Happle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+transplantation+of+macrophage+progenitors+as+effective+and+long-lasting+therapy+for+hereditary+pulmonary+alveolar+proteinosis.">Pulmonary transplantation of macrophage progenitors as effective and long-lasting therapy for hereditary pulmonary alveolar proteinosis.</a> Sci Transl Med. 6 (250), (2014).</li></ol>

The authors have no financial conflicts of interest.

이 논문에서는 루츠 외. (6)로부터 구성되는 단일 마우스 골수 배양 물에서 GM-CSF 유도 된 대 식세포 및 수지상 세포를 생성하는 방법을 제공한다. 이 문화의 미성숙 수지상 세포와 대 식세포을 구별 결합 MHCII 표현과 FL-HA 이전에 곤란 하였다 (그림 3C 참조). 이것은, 함께 Helft 등. (19)에 의해 다른 보고서로, 이전에는 수지상 것으로 생각되었다 GM-CSF 유도 BMDC...

몇몇 시험 관내 배양 방법은 골수 유래 대 식세포 (BMDMs) 및 하나 이상의 성장 인자의 조합을 사용하여 골수 - 유래 수지상 세포 (BMDCs)를 생성하기 위해 설명되었다. BMDMs는 대 식세포 콜로니 자극 인자 (M-CSF) 또는 GM-CSF, 2를 사용하여 골수 세포를 배양하여 생성 될 수있다. BMDCs를 들어, 골수 문화 FLT3 리간드의 추가 (B220 + 각각의 CD11c 높은 / MHCII 높이의 CD11c 보라)을 문화 3,4 9 일 후 비 부착 클래식 형질 수지상을 발생시킨다. 대조적으로, 비 - 부착 세포는 GM-CSF 단독 5,6- 함께 배양 7 내지 10 일 후에 생성, GM-CSF 및 IL-4 7 또는 GM-CSF 및 FLT3 리간드 8,9 BMDCs 더 자세히 염증성 수지상 닮은 생성 (중 CD11c 높은, MHCII 높은 CD11b를 +) 10. 이러한 시험 관내 배양 물 식세포를 생성하는데 사용되는 동안 또는각각의 문화는 순수한 인구를 초래하는 경우 DC가, 그것은 명확하지 않다. 예를 들면, GM-CSF에 부착 배양 세포가 동질 및 관찰 가변성 인 추정 식세포 5 수지상 6,11-13로 사용되는 것과 동일한 배양에서 비 부착 세포 인 것으로 설명되었지만 때문에 개발 14, 15의 다른 단계에. 또한, 연구는 생체 16,17 폐포 대 식세포 현상에 필수적인 성장 인자로 GM-CSF를 발견하고, 폐포 대 식세포 16,17,18 형상을 생성하는 시험 관내에서 사용될 수있다. 접착 이외에, GM-CSF 치료 골수 배양에서 대 식세포 및 수지상 세포를 생성하기위한 절차는 GM-CSF 골수 배양 물 내에 존재하는 이질성 제안 매우 유사하다. 이것은 참으로이 논문은 BMDC 문화의 비 접착 부분에 BMDMs의 존재를보고 같은 경우 것으로 보인다. 한 논문에서, 그들은 identifiED 가장 밀접 폐포 대 식세포를 닮은 및 T 세포 (19)를 활성화하기 위해 환원 능력을 가진 유전자 발현 특성을 발현하는 CD11c +를,는 CD11b +, MHCII 미드, MerTK + 및 CD115 +와 같은 세포 집단. MHCII 및 FL-HA 사용되는 두 번째 종이는 폐포 대 식세포와 같은 인구를 식별하는 (중 CD11c +를, MHCII 중간 / 낮음, FL-HA 고) 미숙 구별했다 (중 CD11c +를, MHCII 중반, FL-HA 낮음) 성숙 DC가 (중 CD11c +를, MHCII 고), 모두 표현형 및 기능 18. 이 논문 모두는 대 식세포와 BMDC 문화에서 데이터를 해석 할 때주의해야 그 치료를 나타내는 DC 인구를 모두 포함, GM-CSF BMDC 문화가 이질적인 것을 보여줍니다. 이 프로토콜은 골수, GM-CSF에서 배양 골수 세포를 분리하고, 폐포 대 식세포 등을 식별하는 방법을 설명바인딩 및 MHCII 식 FL-HA를 사용하여 유동 세포 계측법에 의해 골수 문화의 미성숙과 성숙 수지상에서 인구. .이 절차는 루츠 등 (6)의 설정 순서에 기초하여, 5 생성 할 수있다 - 10 ㎖의 배양 7 일째에 10 × 106 비 - 부착 세포. 문화는 일에서 7 ~ 10에 사용할 수 하루 7이 성장하고 대량으로 체외 폐포와 같은 식세포를 분리하는 간단한 방법을 제공에서 대 식세포, 미성숙과 성숙 수지상뿐만 아니라 일부 전구 세포의 이종 인구를 산출한다.

<table><tbody><tr><td>Flow Cytometer</td><td>BD&amp;nbsp;</td><td>LSR-II</td><td></td></tr><tr><td>Automated Inverted Microscope&amp;nbsp;</td><td>Leica&amp;nbsp;</td><td>DMI4000 B</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge&amp;nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>ST-40R</td><td></td></tr><tr><td>Biosafety Cabinet</td><td>Nuaire</td><td>NU-425-600</td><td></td></tr><tr><td>Syringe 1 ml</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>26 1/2 Gauge Needle</td><td>BD</td><td>305111</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Conical Tube&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>357070</td><td>*Falcon brand</td></tr><tr><td>Eppendorf tubes (1.5 ml)</td><td>Corning</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>5 ml polystyrene round bottomed tubes</td><td>Corning</td><td>352052</td><td></td></tr><tr><td>Dissection Tools</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>*Various&amp;nbsp;</td><td>*Dissection scissors, dumont forcep and standard forcep&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Hemocytometer&amp;nbsp;</td><td>Reichert</td><td>1490</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 100 mm x 15 mm Petri Dish</td><td>Corning</td><td>351029</td><td>*Falcon brand</td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Thermo Fisher</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium Chloride</td><td>BDH</td><td>BDH0208-500G</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP1600-1</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin A</td><td>Sigma</td><td>B7651-5MG</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>E5134-1KG</td><td>Ethylenediaminetetraacetic acid</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo Fisher</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Hank&#039;s Balanced Salt Solution</td><td>Thermo Fisher</td><td>14175-095&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Thermo Fisher</td><td>15630-080</td><td>4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid</td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Sigma</td><td>G8540-100G</td><td></td></tr><tr><td>LPS Ultrapure</td><td>Invivogen</td><td>tlrl-3pelps</td><td></td></tr><tr><td>MEM Non-Essential Amino Acids Solution&amp;nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin 100x</td><td>Thermo Fisher</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Phosphate Monobasic</td><td>BDH</td><td>BDH0268-500G</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Chloride</td><td>BDH</td><td>BDH9258-500G</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant GM-CSF</td><td>Peprotech</td><td>315-03-A</td><td></td></tr><tr><td>Rooster Comb Sodium Hyaluronate&amp;nbsp;</td><td>Sigma</td><td>H5388-1G</td><td>*Used to make fluoresceinated hyaluronan</td></tr><tr><td>RPMI-1640&amp;nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>21870-076</td><td>No sodium pyruvate no glutamine. Warm media to 37&amp;nbsp;&amp;#176;C before using.</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Fisher&amp;nbsp;</td><td>5271-10&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Phosphate Dibasic</td><td>Sigma</td><td>50876-1Kg</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate</td><td>Sigma</td><td>P5290-100G</td><td></td></tr><tr><td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP152-5</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fc Receptor (unlabeled), Tissue Culture Supernatant</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Clone: 2.4G2</td></tr><tr><td>Anti-CD11c PeCy7</td><td>eBioscience</td><td>25-0114-82</td><td>Clone: N418</td></tr><tr><td>Anti-Gr-1 efluor450</td><td>eBioscience</td><td>48-5931-82</td><td>Clone: RB6-8C5</td></tr><tr><td>Anti-MHCII APC</td><td>eBioscience</td><td>17-5321-82</td><td>Clone: M5/114.15.2</td></tr><tr><td>Biotinylated Anti-MerTK</td><td>Abcam</td><td>BAF591</td><td>Goat polyclonal IgG</td></tr><tr><td>Streptavidin PE</td><td>eBioscience</td><td>12-4317-87</td><td></td></tr><tr><td>Propidium Iodide</td><td>Sigma</td><td>P4170-25MG</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4&#039;,6-diamidino-2-phenylindole)</td><td>Sigma</td><td>D9542-5MG</td><td></td></tr></tbody></table>

generation and identification of gm-csf derived alveolar-like macrophages and dendritic cells from mouse bone marrow

대 식세포와 수지상 세포 (DC가)는 병원균에 대한 방어에 중요한 역할을 담당 조직과 림프 기관에서 발견되는 선천성 면역 세포이다. 그러나 따라서, 시험 관내 모델이 개발되었으며, 자세하게 공부 충분한 수의 분리하기가 어렵다. 골수 유래 대 식세포 및 수상 세포의 체외 배양 면역 연구 노포 가치있는 방법이다. 여기서, 배양 및 사이토킨 과립구 대 식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF)를 사용하여 기본 마우스 골수 세포의 단일 배양액으로부터 수지상 세포 및 대식 세포를 모두 식별하기위한 방법이 설명된다. 이 프로토콜은 제 루츠 동부 등에 의해 개발 된 기존의 방법에 기초한다. 골수 유래 수지상에 대한 1천9백99인치 문화는 이질적이며, MHCII 및 형광 표지 히알루 론산 (FL-HA)의 미성숙과 성숙 수지상 세포에서 대 식세포를 구분하는 데 사용됩니다. 이러한 GM-CSF는 유래 대 식세포 프로밀접하게 표현형과 기능 모두에서 폐포 대 식세포 유사 체외 파생 된 대 식세포의 편리한 소스를 제공해 줄.

이 방법의 주요 단계를 요약하는 흐름도가도 1에 도시되어있다. 배양 여러 번 골수 배양의 밀도 및 형태가도 2에 도시되어있다. 제 1 일에, 세포가 작은 저밀도이지만 날 (3)이다 거기에 더 많은 세포는 몇 가지 큰하고 몇 준수하기 시작했다. 6 일 일정한 부착 성 및 비 - 부착 부분 (도 2A)가 존재한다. 배양은 7 일부터 수확 될 수있는 - 일...

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Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

Bone marrow cells cultured with granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) generate a heterogeneous culture containing macrophages and dendritic cells (DCs). This method highlights using MHCII and hyaluronan (HA) binding to differentiate macrophages from the DCs in the GM-CSF culture. Macrophages in this culture have many similarities to alveolar macrophages.

마우스 골수에서 생성 및 GM-CSF의 식별 파생 폐포와 같은 대 식세포와 수지상 세포

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

generation-identification-gm-csf-derived-alveolar-like-macrophages

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

17.9K 조회수.  University of British Columbia. Bone marrow cells cultured with granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) generate a heterogeneous culture containing macrophages and dendritic cells (DCs). This method highlights using MHCII and hyaluronan (HA) binding to differentiate macrophages from the DCs in the GM-CSF culture. Macrophages in this culture have many similarities to alveolar macrophages. 

비디오: Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors

Myeloid dendritic cells (DCs) are frequently used to study the interactions between innate and adaptive immune mechanisms and the early response to infection. Because these are the most potent antigen presenting cells, DCs are being increasingly used as a vaccine vector to study the induction of antigen-specific immune responses. In this video, we demonstrate the procedure for harvesting tibias and femurs from a donor mouse, processing the bone marrow and differentiating DCs in vitro. The properties of DCs change following stimulation: immature dendritic cells are potent phagocytes, whereas mature DCs are capable of antigen presentation and interaction with CD4+ and CD8+ T cells. This change in functional activity corresponds with the upregulation of cell surface markers and cytokine production. Many agents can be used to mature DCs, including cytokines and toll-like receptor ligands. In this video, we demonstrate flow cytometric comparisons of expression of two co-stimulatory molecules, CD86 and CD40, and the cytokine, IL-12, following overnight stimulation with CpG or mock treatment. After differentiation, DCs can be further manipulated for use as a vaccine vector or to generate antigen-specific immune responses by in vitro pulsing using peptides or proteins, or transduced using recombinant viral vectors. 

This video demonstrates the procedure for differentiating myeloid dendritic cells from mouse bone marrow. Isolation of mouse tibia and femur, and processing of bone marrow are demonstrated. Pictures demonstrating cell morphology before and after differentiation, and figures depicting cell phenotype and IL-12 production following maturation using CpG are shown.

골수 엽 성의 전구 물질에서 골수양 돌기 세포의 문화

Myeloid dendritic cells (DCs) are frequently used to study the interactions between innate and adaptive immune mechanisms and the early response to ...

연구

생물학

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic stem/progenitor cells from the bone marrow are directed into monocytic differentiation, followed by M1 or M2 stimulation. The activation status can be tracked by changes in cell surface antigens, gene expression and cell signaling pathways.

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic stem/progenitor cells from the bone marrow are directed into monocytic differentiation, followed by M1 or M2 stimulation. The activation status can be tracked by changes in cell surface antigens, gene expression and cell signaling pathways.

골수 유래 대 식세포를 사용하여 대식 세포 분극 조사

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

면역학 및 감염병학

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because of their powerful microbicidal activities. Macrophages are widely distributed throughout the body and are present in the lymphoid organs, liver, lungs, gastrointestinal tract, central nervous system, bone, and skin. Because of their repartition, they participate in a wide range of physiological and pathological processes. Macrophages are highly versatile cells that are able to recognize microenvironmental alterations and to maintain tissue homeostasis. Numerous pathogens have evolved mechanisms to use macrophages as Trojan horses to survive, replicate in, and infect both humans and animals and to propagate throughout the body. The recent explosion of interest in evolutionary, genetic, and biochemical aspects of host-pathogen interactions has renewed scientific attention regarding macrophages. Here, we describe a procedure to isolate and cultivate macrophages from murine bone marrow that will provide large numbers of macrophages for studying host-pathogen interactions as well as other processes.

Macrophages have long been recognized as a critical component of the innate and adaptive immune responses. The recent explosion of knowledge pertaining to evolutionary, genetic, and biochemical aspects of the interaction between macrophages and microbes has renewed scientific attention to macrophages. This article describes a method to differentiate macrophages from mouse bone marrow.

뼈 대식 세포 생산에게 골수 유래

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Metabolic Characterization of Polarized M1 and M2 Bone Marrow-derived Macrophages Using Real-time Extracellular Flux Analysis

Specific metabolic pathways are increasingly being recognized as critical hallmarks of macrophage subsets. While LPS-induced classically activated M1 or M(LPS) macrophages are pro-inflammatory, IL-4 induces alternative macrophage activation and these so-called M2 or M(IL-4) support resolution of inflammation and wound healing. Recent evidence shows the crucial role of metabolic reprogramming in the regulation of M1 and M2 macrophage polarization. 
In this manuscript, an extracellular flux analyzer is applied to assess the metabolic characteristics of naive, M1 and M2 polarized mouse bone marrow-derived macrophages. This instrument uses pH and oxygen sensors to measure the extracellular acidification rate (ECAR) and oxygen consumption rate (OCR), which can be related to glycolytic and mitochondrial oxidative metabolism. As such, both glycolysis and mitochondrial oxidative metabolism can be measured in real-time in one single assay.
Using this technique, we demonstrate here that inflammatory M1 macrophages display enhanced glycolytic metabolism and reduced mitochondrial activity. Conversely, anti-inflammatory M2 macrophages show high mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) and are characterized by an enhanced spare respiratory capacity (SRC). 
The presented functional assay serves as a framework to investigate how particular cytokines, pharmacological compounds, gene knock outs or other interventions affect the macrophage&#8217;s metabolic phenotype and inflammatory status.

Metabolic reprogramming is a characteristic and prerequisite for M1 and M2 macrophage polarization. This manuscript describes an assay for the measurement of fundamental parameters of glycolysis and mitochondrial function in mouse bone marrow-derived macrophages. This tool can be applied to investigate how particular factors affect the macrophage&#8217;s metabolism and phenotype.

실시간 세포 외 유출 분석을 사용하여 편광 M1과 M2 골수 유래 대 식세포의 대사 특성

Specific metabolic pathways are increasingly being recognized as critical hallmarks of macrophage subsets. While LPS-induced classically activated M1 or ...

Generation of Large Numbers of Myeloid Progenitors and Dendritic Cell Precursors from Murine Bone Marrow Using a Novel Cell Sorting Strategy

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have recently been recognized to be more heterogeneous than previously appreciated. These cultures routinely contain moDC as well monocyte-derived macrophages (moMac), and even some less developed cells such as monocytes. The goal of this protocol is to provide a consistent method for identification and separation of the many cell types present in these cultures as they develop, so that their specific functions may be further investigated. The sorting strategy presented here separates cells first into four populations based on expression of Ly6C and CD115, both of which are expressed transiently by cells as they develop in GM-CSF-driven culture. These four populations include Common myeloid progenitors or CMP (Ly6C-, CD115-), granulocyte/macrophage progenitors or GMP (Ly6C+, CD115-), monocytes (Ly6C+, CD115+), and monocyte-derived macrophages or moMac (Ly6C-, CD115+). CD11c is also added to the sorting strategy to distinguish two populations within the Ly6C-, CD115- population: CMP (CD11c-) and moDC (CD11c+). Finally, two populations may be further distinguished within the Ly6C-, CD115+ population based on the level of MHC class II expression. MoMacs express lower levels of MHC class II, while a monocyte-derived DC precursor (moDP) expresses higher MHC class II. This method allows for the reliable isolation of several developmentally distinct populations in numbers sufficient for a variety of functional and developmental analyses. We highlight one such functional readout, the differential responses of these cell types to stimulation with Pathogen-Associated Molecular Patterns (PAMPs).

Here we provide a method for identifying and isolating large numbers of GM-CSF driven myeloid cells using high speed cell sorting. Five distinct populations (Common myeloid progenitors, granulocyte/macrophage progenitors, monocytes, monocyte-derived macrophages, and monocyte-derived DCs) can be identified based on Ly6C and CD115 expression.

골수성 창시자 및 정렬 전략 소설 셀을 사용 하 여 Murine 골에서 수지상 세포 선구자의 큰 숫자의 생성

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have ...

Identification and Isolation of Oligopotent and Lineage-committed Myeloid Progenitors from Mouse Bone Marrow

Myeloid progenitors that yield neutrophils, monocytes and dendritic cells (DCs) can be identified in and isolated from the bone marrow of mice for hematological and immunological analyses. For example, studies of the cellular and molecular properties of myeloid progenitor populations can reveal mechanisms underlying leukemic transformation, or demonstrate how the immune system responds to pathogen exposure. Previously described flow cytometry strategies for myeloid progenitor identification have enabled significant advances in many fields, but the fractions they identify are very heterogeneous. The most commonly used gating strategies define bone marrow fractions that are enriched for the desired populations, but also contain large numbers of &#34;contaminating&#34; progenitors. Our recent studies have resolved much of this heterogeneity, and the protocol we present here permits the isolation of 6 subpopulations of oligopotent and lineage-committed myeloid progenitors from 2 previously described bone marrow fractions. The protocol describes 3 stages: 1) isolation of bone marrow cells, 2) enrichment for hematopoietic progenitors by magnetic-activated cell sorting (lineage depletion by MACS), and 3) identification of myeloid progenitor subsets by flow cytometry (including fluorescence-activated cell sorting, FACS, if desired). This approach permits progenitor quantification and isolation for a variety of in vitro and in vivo applications, and has already yielded novel insight into pathways and mechanisms of neutrophil, monocyte, and DC differentiation.

We demonstrate how to identify and isolate 6 subsets of myeloid progenitors from murine bone marrow using a combination of magnetic and fluorescence sorting (MACS and FACS). This protocol can be used for in vitro culture assays (methylcellulose or liquid cultures), in vivo adoptive transfer experiments, and RNA/protein analyses.

식별 및 Oligopotent 및 계보 커밋된 골수성 창시자 마우스 골 수에서 격리

Myeloid progenitors that yield neutrophils, monocytes and dendritic cells (DCs) can be identified in and isolated from the bone marrow of mice for ...

Economical and Efficient Protocol for Isolating and Culturing Bone Marrow-derived Dendritic Cells from Mice

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method for isolating DCs primarily involves inducing bone marrow (BM) differentiation into DCs by injecting large doses (&#62;10 ng/mL) of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor/interleukin-4 (GM-CSF/IL-4), making the procedure complex and expensive. In this protocol, using all BM cells cultured in 10 ng/mL GM-CSF/IL-4 medium, after 3-4 half-culture exchanges, up to 2.7 x 107 CD11c+ cells&#160;(DCs) per mouse (two femurs) were harvested with a purity of 80%-95%. After 10 days in culture, the expression of CD11c, CD80, and MHC II increased, whereas the number of cells decreased. The number of cells peaked after 7 days of culture. Moreover, this method only took 10 min to harvest all bone marrow cells, and a high number of DCs were obtained after 1 week of culture.

Here, we present an economical and efficient method to isolate and generate high-purity bone marrow-derived dendritic cells from mice after 7 days of culture with 10 ng/mL GM-CSF/IL-4.

마우스로부터 골수 유래 수지상 세포를 분리하고 배양하기 위한 경제적이고 효율적인 프로토콜

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method ...

Isolation and Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages from Mice

Macrophages have important effector functions in homeostasis and inflammation. These cells are present in every tissue in the body and have the important ability to change their profile according to the stimuli present in the microenvironment. Cytokines can profoundly affect macrophage physiology, especially IFN-&#947; and interleukin 4, generating M1 and M2 types respectively. Because of the versatility of these cells, the production of a population of bone marrow-derived macrophages can be a basic step in many experimental models of cell biology. The aim of this protocol is to help researchers in the isolation and culture of macrophages derived from bone marrow progenitors. Bone marrow progenitors from pathogen-free C57BL/6 mice are transformed into macrophages upon exposure to macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) that, in this protocol, is obtained from the supernatant of the murine fibroblast lineage L-929. After incubation, mature macrophages are available for use from the 7th to the 10th day. A single animal can be the source of approximately 2 x 107 macrophages. Therefore, it is an ideal protocol for obtaining large amounts of primary macrophages using basic methods of cell culture.

The present protocol describes the isolation and culture of bone marrow-derived macrophages from mice.

Macrophages have important effector functions in homeostasis and inflammation. These cells are present in every tissue in the body and have the important ...

신생아 골수 유래 대식세포의 식세포 분석 평가 

Neonatal Mouse Bone Marrow Isolation and Preparation of Bone Marrow-Derived Macrophages

Various techniques for isolating bone marrow from adult mice have been well established. However, isolating bone marrow from neonatal mice is challenging and time-consuming, yet for some models, it is translationally relevant and necessary. This protocol describes an efficient and straightforward method for preparing bone marrow cells from 7-9-day-old pups. These cells can then be further isolated or differentiated into specific cell types of interest. Macrophages are crucial immune cells that play a major role in inflammation and infection. During development, neonatal macrophages contribute significantly to tissue remodeling. Moreover, the phenotype and functions of neonatal macrophages differ from those of their adult counterparts. This protocol also outlines the differentiation of neonatal macrophages from the isolated bone marrow cells in the presence of L929-conditioned medium. Surface markers for differentiated neonatal macrophages were assessed using flow cytometric analysis. To demonstrate functionality, the phagocytic efficiency was also tested using pH-sensitive dye-conjugated Escherichia coli.

저자 스포트라이트: Developing a Reproducible Method for Isolating Bone Marrow-Derived macrophages from Neonatal Mice to Advance Early Life Immune Response(신생아 마우스에서 골수 유래 대식세포를 분리하여 조기 면역 반응을 촉진하기 위한 재현성 있는 방

This protocol describes a non-enzymatic and straightforward method for isolating 7-9-day-old neonatal mouse bone marrow cells and generating differentiated macrophages using a supernatant of L929 cells as a source of granulocyte colony-stimulating factor (M-CSF). The bone marrow-derived macrophages were further analyzed for surface antigens F4/80, CD206, CD11b, and functional competency.

신생아 마우스 골수 분리 및 골수 유래 대식세포의 준비

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마우스 골수에서 생성 및 GM-CSF의 식별 파생 폐포와 같은 대 식세포와 수지상 세포

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Isolation and Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages from Mice

신생아 마우스 골수 분리 및 골수 유래 대식세포의 준비

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