We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.

모든 동물의 작업은 샌디에고 주립 대학의 실험실 동물 관리 사무소의 승인을 받아 수의학 기준에 따라 실시 하였다. 암컷 마우스 연령 8-16주이 방법의 개발에 사용 하였다. β-에스트라 디올의 1. 준비 및 복강 내 주사 <ol><li> 적절한 개인 보호 장비 (PPE)를 착용하고있는 동안 종이의 무게에 β-에스트라 디올 (0.5 밀리그램 / 마우스)를 밖으로 측정한다. 주의 :-β 에스트라 디올은 피부 및 점막 표면을 통해 흡수 될 수있다. </li><li> 모든 덩어리를 제거하고, β-에스트라 디올이 미세 분말 될 때까지 15 ML 원뿔 튜브와 소용돌이에 β-에스트라 디올을 전송합니다. 10 ML의 주사기에 참기름 (100 μL / 마우스)를 그립니다. 0.45 μm의 필터를 사용하여 β-에스트라 디올을 함유하는 15 ml의 원추형 튜브에 주사기 필터 참기름. β-에스트라 디올은 참기름에 균일 한 현탁액이 될 때까지 15 ML 원뿔 튜브를 소용돌이. </li><li> β-ES를 그리기새로운 10 ML의 주사기에 tradiol 서스펜션. 18 G, 1 인으로. 바늘, 나누어지는 1 ㎖의 투베르쿨린 주사기로 현탁액을 100 ㎕. 각 마우스에 대해 하나의 주사기를 준비합니다. 새로운 멸균 26 G, ½ 인을 배치합니다. 각 투베르쿨린 주사기 바늘. </li><li> 이전 세균 접종에 각 마우스 24 시간에 참기름 (5 ㎎ / ㎖) 100 ㎕에 현탁 β-에스트라 디올의 0.5 밀리그램을 관리 할 수 ​​있습니다. 바로 오른쪽에 하복부 사분면에서는 복강 내의 각 마우스를 주입하거나 이전 28 바와 같이, 중간 선 왼쪽. 주 : 주사 부위의 어떠한 청소 또는 클리핑이 필요하지 않습니다. </li></ol> GBS 2. 질 접종 <ol><li> 어느 날 이전에 접종을, 37 ° C에서 토드 휴이트 국물 (THB)에서, 같은 A909 (혈청 형 IA)와 같은 관심의 GBS 균주의 5 ml의 하룻밤 액체 문화를 성장. </li><li> 신선한 THB로 1:10 볼륨에서 GBS 하룻밤 문화를 배양하고 37 ° C에서 품어. 성장미드 로그 상에 박테리아 (= 0.4-0.5 OD 600). 참고 : - GBS의 변형에 따라, 3 시간이 보통이 소요됩니다. </li><li> 5 분 동안 3,000 × g에서 멸균 15 ML 원뿔 튜브와 펠렛 박테리아에 하위 문화를 전송합니다. 뜨는을 대기음. 멸균 인산 완충 식염수 (PBS) 200 μL의 세균 펠렛을 재현 탁. </li><li> 새로운 5 ㎖의 배양 관에서 PBS 5 ㎖ (10 마우스 당 1 mL) 중 정확히 OD 600 = 0.4 - 재현 탁 된 펠릿을 이용하여, 3을 가져온다. 이것은 ~ 1 × 10 8 콜로니 형성 단위 (CFU) / ml의 농도 될 것입니다. 새로운 15 ML 원뿔 튜브로 전송 5 분 동안 3,000 × g에서 박테리아를 재 - 펠렛. 뜨는을 대기음. </li><li> 1/10 원래 볼륨에서 PBS의 펠렛을 재현 탁. 예를 들어, OD = 0.4 (600)의 3 ml의 펠릿 되었다면, PBS 300 μL 그것을 재현 탁. 주 :이 동물 접종에 사용되는 최종 세균 현탁액 (~ 1 × 109 CFU / ㎖)이다. </li><li> 아르 자형직렬 희석 현탁액의 50 μl를 eserve과 THB 한천에 도금하는 것은 정확한 접종을 결정합니다. </li><li> 그 1 × 107 CFU 각 마우스에 투여되도록 최종 세균 현탁액의 10 μl를 각 마우스를 접종한다. <ol><li> , 이전에 접종 28 바와 같이, 핸들러의 엄지와 검지 후 꼬리를 고정화 사이 목 목덜미에서 느슨한 피부를 보호하여 수동으로 마우스를 억제. </li><li> 200 ㎕를 겔로드 피펫 팁으로 단계 2.6에서 제조 된 GBS의 10 μL를 그립니다. 팁을 질 루멘에 5 ~ 10 mm를 삽입하고 접종의 10 μl를 분배. 주 : 겔 로딩 팁 특히 어린이나 작은 마우스에서 장기 외상 또는 손상의 위험을 최소화하기 위해 표준 200 μL 팁 위에 바람직하다. </li><li> 즉시 접종을 다음과 같은 꼬리와 w로 마우스를 올려, 목의 목덜미를 해제하고 마우스의 뒷다리 끝을 상승~ 1 분 동안 딱딱한 표면에 전면 발 alking. </li><li> 시각 접종의 역류에 대한 질 입구를 검사합니다. 역류가 관찰되는 경우, 새로운 피펫 팁은 루멘 내로 역류의 흡수를 용이하게 조작하거나 질구를 확대하기 위해 사용될 수있다. 또한, 역류는 피펫을 통해 흡입 될 수 있으며, 재 접종. 참고 : 국소 에이전트, 프로 바이오 틱 미생물, 또는 관심의 단백질을 투여하는 경우에는 생리적 버퍼 20 μl의 최대 볼륨은 질 기관에 제공 될 수있다. </li></ol></li></ol> 3. GBS 부하를 정량화하기 위해 질 루멘을 보라고 <ol><li> PBS 100 ㎕를 첨가하여, 마우스 당 1.5 ㎖의 마이크로 원심 분리 튜브를 준비한다. 그냥 보라고하기 전에, PBS에서 면봉을 사전에 젖은. </li><li> 단계 2.7.1에서 설명한대로 마우스를 억제하고 질 루멘에 면봉을 10mm를 삽입합니다. 부드럽게 4 배를 시계 방향으로 면봉을 회전하고 4 시간은 질 벽에 약간의 압력을 적용, 시계 방향으로 대응.</li><li> PBS 100 ㎕로 1.5 ML의 microcentrifuge 관에 면봉을 전송합니다. 도금에 앞서, 소용돌이 면봉에서 박테리아를 해제하기 15 초 ~에 대한 microcentrifuge 관. 직렬 1시 10분 1을 통해 각 PBS에서 샘플 판 희석 20 μl를 희석 : 10,000 제조업체의 지침에 따라 준비 차동 매체 아가 플레이트에. 24 시간 동안 37 ° C에서 접시를 품어. GBS 식민지 색상에 밝은 분홍색 또는 자주색를 나타납니다. 다른 내생 식물을 억제 할 것, 또는 파란색, 흰색, 회색 식민지로 표시됩니다. </li></ol> 4. 수집 질 세척 유체 <ol><li> 단계 2.7.1에서 설명한대로 마우스를 억제. 200 ㎕를 겔로드 피펫 팁, 피펫 질 루멘에 PBS의 20 μl를 사용. 부드럽게 루멘 내에서 전체 볼륨 위아래로 4 회 피펫, 다음 같은 피펫 팁의 전체 볼륨을 철회. 주 : 세척액이 점액 두꺼운 경우 표준 200 μL 피펫 팁최종 세정액을 수집하는데 사용될 수있다. </li><li> 사이토킨 분석 CFU 또는 정량 용 세정액을 저장하는 경우에 0.7 ml의 마이크로 원심 관에 분주. 발정기의 단계를 결정하는 경우, 유리 슬라이드 상에 세정액의 적어도 5 μL를 분배하고 광학 현미경에서 100 배의 배율 하에서 세포를 관찰한다. 참고 : 발정 단계의 예를 들어, 그림 1을 참조하십시오. </li></ol> 5. 조직의 해부 및 균질화 <ol><li> 각 마우스의 경우, 세 개의 2-ML 스크류 캡 튜브 (: 질, 자궁 경부, 자궁 각 조직에 대해 하나)을 준비합니다. 튜브의 원뿔 모양의 바닥을 커버 - (0.5 g 0.4) 1.0 mm 지르코니아 비드 충분한 각 튜브를 입력합니다. </li><li> 세균 부하를 정량화 특히 121 ° C에서 30 분 동안 조직을 수집하기 전에 준비된 튜브 압력솥. 각 튜브에 멸균 PBS 500 μl를 추가합니다. 복구 조직의 무게를 계산하기 위해 나중에 참조 할 수 있도록 고압 증기 멸균 기록 후 각 튜브의 무게. </li><li&gt; 이러한 CO 2 질식 및 경추 탈구으로 승인 기관 방법을 사용하여 마우스를 희생한다. 70 % EtOH로 복부 복부를 스프레이. 멸균 가위,의 복부 캐비티를 열고 다시 피부와 복부 근육을 들어 올린 생식 기관이 노출되도록 내장을 대체. </li><li> 70 % EtOH로 가위를 소독 필요한 경우 깨끗이 닦아, 두 자궁 뿔 자궁 몸과 난소 사이의 중간 길이를 잘라. 가위와 집게, 별도의 내장 지방, 멤브레인, 멀리 생식 기관에서 방광을 사용하여, 꼬리 쪽 이동. </li><li> 단계 5.4에 설명 된대로 가위를 소독. 횡 방향으로 몸에서 생식 기관을 분리 가능한 외음부에 가깝게 질을 잘라. 들어 올려 그대로 생식 기관을 제거하고 멸균 페트리 접시에 넣습니다. </li><li> 새 면도날을 사용하여, 하나의 가로 절단에 자궁 경부에서 자궁을 분리합니다. 70 %로 면도날 소독다음의 EtOH, 그리고 하나의 가로 컷의 질에서 자궁 경부를 구분합니다. 참고 : 아직 자궁 경부에 연결된 자궁 조직의 최소한있을 것이다. 아직 자궁 경부에 부착 된 질 조직의 최소한있을 것이다. </li><li> 무균 핀셋을 사용하여, 각각의 2 ㎖의 튜브를 함유하는 PBS와 구슬 균질화로 각 조직 옮긴다. 각 조직을 처리하는 사이에 70 % EtOH로 집게를 청소합니다. </li><li> 각각 2 ㎖의 스크류 캡 튜브의 무게를 측정하고, 조직의 무게를 결정하기 위해 관의 원래 중량을 뺀다. 100 mg의 - 조직의 무게는 일반적으로 20 사이를 다릅니다. 단단히 스크류 캡 튜브를 밀봉하고 조직 균질 기에서 최대 속도에서 1 분 동안 조직을 균질화. </li><li> 10,000 차동 매체 아가 플레이트에 : 세균 부하를 정량화하기 위해 직렬로 조직 균질 및 플레이트 희석 1시 10분 1을 통해 25 μl를 희석. 단계 3.3에 설명 된대로 번호판을 품어. 에서 조직 균질 동결, 사이토 카인의 정량 샘플을 저장하려면 -20 ° C. </li></ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

호스트의 컨텍스트 내의 호스트 및 다른 미생물 모두 GBS 상호 작용의 이해의 발전을 촉진하기 위해 동물 모델이 요구된다. 이 작품은 생쥐에서 GBS 질 식민지를 확립의 기술적 측면에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 박테리아를 접종하거나 접종을 두껍게, 질 미리 세척, 또는 첨가제 식민지 수 있도록 면봉 샘플, 면역 억제제를 수집하기 위해 마취제를 사용하지 않고 마우스의&gt; 90 % 식민지를 달?...

연쇄상 구균 agalactiae, B 군 연쇄상 구균 (GBS)는 자주 장과 건강한 성인의 비뇨 기관에서 분리 된 캡슐, 그람 양성 세균이다. 1970 년대에, GBS는 매년 신생아 질환의 7,000의 경우 1, 감염성 신생아 사망의 주요 에이전트로 나타났다. 조기 발병 GBS 질환 (EOD)는 폐렴이나 호흡 곤란으로 발생하는 첫 번째 시간, 삶의 일에 발생하고, 종종 후기 발병 질환 (LOD) 반면, 패혈증으로 발전 몇 달 후에 계속된다 자주 균혈증과 선물 2 뇌막염으로 진행한다. 2002 년 질병 통제 예방 센터 (CDC)는 GBS 양성 산모 1 늦은 임신과 분만 예방 적 항생제 (IAP)에서 GBS 질 식민지에 대한 보편적 인 검사를 권장합니다. 매년 IAP로 인해 미국에서 약 1,000가지 경우에 조기 발병 질환의 감소에도 불구하고,GBS는 조기 발병 신생아 패혈증의 주요 원인 남아 있고, 후기 발병 발생 1 영향을받지 남아있다. 자궁의 여부, 노동 동안, 또는 후기 발병의 경우, GBS에 신생아 노출 수막염, 높은 규제 혈액 -의 교차의 경우, 호스트 환경과 장벽, 면역 회피의 숫자를 통해 생존, 횡단이 필요하며, 뇌 장벽이. 신생아 내에서 이러한 악성 상호 작용의 상류는 산모의 질 기관의 초기 식민지입니다. GBS 질 식민지 비율이 12.7 %, 4의 추정 평균 속도, 선진국과 개발 도상국에서 8-18% 범위 임산부. 임신 중 질 기관의 GBS의 식민지 개별 여성 5 중 자연, 상수 간헐적 또는 일시적 일 수있다. 흥미롭게도, 모성 연령&gt; 삼십육년은 지속적 식민지 (6)와 연결되어 있습니다. GBS 질 식민지에 대한 다양한 생물학적 및 사회 경제적 위험 요인확인되었습니다. 생물학적 요인 위장 GBS의 식민지와 장 내 유산균의 부재를 포함한다. 그러나, 인종, 비만, 위생, 성적 활동은 GBS 질 캐리지 (7)과 관련되어있다. 신생아 감염을 일으키는 악명이 있지만, GBS는 산모의 감염 모두 주 산기 및 산후의 다양한됩니다. GBS 캐리지도 질병 엔티티 9 일 수 있고, 어떤 경우에는 질염 8 제시 여성에서 증가된다. 또한, 임신 중 생식 기관의 GBS 적경은 내 양수 감염이나 융 모양 막염 (10)가 발생할 수 있습니다. 또한, 임신의 3.5 %까지로, GBS는 요로 감염이나 무증상 세균 (11)을 유발하는 방광에 배포한다. 임신 중 GBS의 세균이 분만 발열, 융 모양 막염, 조산 및 prematur의 위험 증가와 관련이막 (12)의 전자 파열. 함께 찍은, 질 기관 내에서 GBS의 존재는 여러 호스트 조직의 감염에 연결하고,이 틈새 시장에서 GBS를 제거 할 수있는 기능을 모두 산모와 신생아의 건강을 위해 필수적이다. 최근까지 자궁 경부 기관과 상호 작용 GBS 검사 작업의 대부분은 체외 세포 모델 13-15로 한정 하였다. 이러한 시험 관내 실험은 표면 단백질을 포함한 부착에 중요한 요인 세균을 밝혀냈다 같은 필리 세린 풍부 반복 (17, 18),뿐만 아니라 이성 조절 시스템 (15, 19)과의 질 상피 글로벌 전사 반응 GBS 19. 그러나, 완전히 질 관 내의 호스트 미생물 작용을 해명하기 위해 강력한 동물 모델이 필요하다. 초기 작품은 GBS가 접종 된 마우스 (20, 21)와 쥐의 질 기관에서 복구 할 수 있다는 것을 보여 &lt;SUP&gt; 모두 임신과 비 임신 상태에서 22. 2005 년 단기 GBS 질 집락은 24 시간 기간에 걸쳐 23 질 GBS 치료에 파지 용균 효소의 효능을 조사 생쥐에서 만들어졌다. 몇 년 후, 장기 GBS 질 식민지 마우스 모델은 GBS 지속성을 관리하는 호스트와 세균 요인을 연구하기 위해 개발되었다. 이 모델은 표면 부속 (17, 18)과 GBS 두 구성 요소 시스템 19,24 포함 정착에 기여 수많은 GBS 요인을 확인했다. 이 모델은 호스트 응답 메커니즘 19,25의 식별에 기여하고 면역 펩티드 26, 프로바이오틱스 (27) 등 여러 가지 치료 전략을 시험하기 위해 사용되었다. 이 프로토콜은 마우스 질 관 GBS로 접종하고이어서 정착을 추적하고 추가적인 분석을 위해 샘플을 수집하기 위해 필요한 지침을 제공한다.

<table><tbody><tr><td>Sesame oil&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S3547-250ML</td><td></td></tr><tr><td>&amp;beta;-Estradiol&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E8875-1G</td><td>CAUTION: Wear appropriate PPE. &amp;beta;-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>200 &amp;mu;l gel loading pipette tips&amp;nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td>1252-0610</td><td></td></tr><tr><td>Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs</td><td>Puritan</td><td>25-801 A 50</td><td></td></tr><tr><td>CHROMagar StrepB</td><td>DRG International</td><td>SB282</td><td></td></tr><tr><td>Todd Hewitt Broth</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>7161C</td><td></td></tr><tr><td>18 G, 1.5 inch needles</td><td>BD</td><td>305199</td><td></td></tr><tr><td>26 G, 0.5 inch needles</td><td>BD</td><td>305111</td><td></td></tr><tr><td>10 ml syringes</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringes</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &amp;mu;m PVDF syringe filters</td><td>Whatman</td><td>6900-2504</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1x</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr></tbody></table>

a murine model of group b streptococcus vaginal colonization

성인의 30 % - 연쇄상 구균 agalactiae (그룹 B 연쇄상 구균, GBS)는 인간의 위장관 10의 질 기관의 그람 양성, 증상이 식민지 개척자이다. 면역 손상 개인을 포함한 신생아, 임산부, 노인에서는 GBS 패혈증, 관절염, 폐렴과 뇌막염을 일으키는 원인이 침입 병원체로 전환 할 수 있습니다. GBS가 신생아의 선도적 인 세균성 병원체이기 때문에, 현재의 예방은 GBS 질 식민지와 GBS 양성 어머니의 후속 산기 항생제 치료를 위해 임신 후기 검사로 구성되어 있습니다. 무거운 GBS 질 부담은 신생아 질환과 식민지 모두의 위험 요인이다. 불행하게도, 거의 호스트 및 홍보 또는 질 식민지 GBS을 허용 박테리아 요인에 대한 알려져있다. 이 프로토콜은 세균 LOA를 결정하는 하나의 β-에스트라 전처리 매일 샘플링을 이용한 영구 GBS 질 집락을 설정하기위한 기술을 설명디. 그것은 더 자세한 방법은 추가 치료 또는 관심의 시약을 관리하고 질 세척 유체 및 생식 기관의 조직을 수집 할 수 있습니다. 이 마우스 모델 임신 중 모체의 질 집락을 제어하고 취약한 신생아로의 전송을 방지하기 위해 잠재적 인 치료 표적으로 이어질 질 환경 내 GBS 호스트 상호 작용의 이해를 촉진한다. 또한 여성의 질 기관에서 일반 세균 - 호스트 상호 작용에 대한 우리의 이해를 높이기 위해 관심이 될 것입니다.

이 모델의 개발 과정에서 여러 관찰 GBS 질 정착 기간에 영향을주는 요인에 관한 하였다. 접종에 미치는 영향 GBS 세균의 지속성에 얼마나 발정 단계를 결정하려면, 마우스는 질 세척 유체를 통해 접종의 날에 개최되었다. 도 1에 의해 결정된대로 마우스 발정주기의 네 단계를 도시 습식 마운트 질 세정액, 잘 확립 된 방법 (29). 마우스는 초기 단계에 기?...

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A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

이 프로토콜의 목적은 쥐 모델에서 인간의 B 군 연쇄상 구균 (GBS) 질 식민지를 모방하는 것입니다. 이 방법은 숙주의 면역 반응 및 GBS 질 지속성에 기여 박테리아 인자를 조사 할뿐 아니라 치료 전략을 시험하기 위해 사용될 수있다.

그룹 B의 쥐 모델<em&gt; 연쇄상 구균</em&gt; 질 식민

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

a-murine-model-of-group-b-streptococcus-vaginal-colonization

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

14.2K 조회수.  University of California San Diego School of Medicine.  이 프로토콜의 목적은 쥐 모델에서 인간의 B 군 연쇄상 구균 (GBS) 질 식민지를 모방하는 것입니다. 이 방법은 숙주의 면역 반응 및 GBS 질 지속성에 기여 박테리아 인자를 조사 할뿐 아니라 치료 전략을 시험하기 위해 사용될 수있다. 

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Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of otherwise healthy women during their reproductive years18,32-34. Predisposing factors include antibiotic usage, uncontrolled diabetes and disturbance in reproductive hormone levels due to pregnancy, oral contraceptives or hormone replacement therapies33,34. Recurrent VVC (RVVC), defined as three or more episodes per year, affects a separate 5 to 8% of women with no predisposing factors33.
An experimental mouse model of VVC has been established and used to study the pathogenesis and mucosal host response to Candida3,4,11,16,17,19,21,25,37. This model has also been employed to test potential antifungal therapies in vivo13,24. The model requires that the animals be maintained in a state of pseudoestrus for optimal Candida colonization/infection6,14,23. Under such conditions, inoculated animals will have detectable vaginal fungal burden for weeks to months. Past studies show an extremely high parallel between the animal model and human infection relative to immunological and physiological properties3,16,21. Differences, however, include a lack of Candida as normal vaginal flora and a neutral vaginal pH in the mice.
Here, we demonstrate a series of key methods in the mouse vaginitis model that include vaginal inoculation, rapid collection of vaginal specimens, assessment of vaginal fungal burden, and tissue preparations for cellular extraction/isolation. This is followed by representative results for constituents of vaginal lavage fluid, fungal burden, and draining lymph node leukocyte yields. With the use of anesthetics, lavage samples can be collected at multiple time points on the same mice for longitudinal evaluation of infection/colonization. Furthermore, this model requires no immunosuppressive agents to initiate infection, allowing immunological studies under defined host conditions. Finally, the model and each technique introduced here could potentially give rise to use of the methodologies to examine other infectious diseases of the lower female genital tract (bacterial, parasitic, viral) and respective local or systemic host defenses.

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Key techniques to be used in the evaluation of Candida vaginitis in an experimental animal model are described. The methods will allow rapid collection of vaginal specimens and lymphocytes from draining lumbar lymph nodes. These techniques could give rise to mouse models of other diseases in the female lower genital tract.

의 실험 마우스 모델에서 질 접종 및 샘플 수집을위한 프로토콜 칸디다 질염

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

연구

면역학 및 감염병학

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing the mucosal surface of the nasopharynx, where it can reside, multiply and eventually overcome host defences to invade to other tissues of the host. Establishment of an infection in the normally lower respiratory tract results in pneumonia. Alternatively, the bacteria can disseminate into the bloodstream causing bacteraemia, which is associated with high mortality rates2, or else lead directly to the development of pneumococcal meningitis. Understanding the kinetics of, and immune responses to, nasopharyngeal colonization is an important aspect of S. pneumoniae infection models.
Our mouse model of intranasal colonization is adapted from human models3 and has been used by multiple research groups in the study of host-pathogen responses in the nasopharynx4-7. In the first part of the model, we use a clinical isolate of S. pneumoniae to establish a self-limiting bacterial colonization that is similar to carriage events in human adults. The procedure detailed herein involves preparation of a bacterial inoculum, followed by the establishment of a colonization event through delivery of the inoculum via an intranasal route of administration. Resident macrophages are the predominant cell type in the nasopharynx during the steady state. Typically, there are few lymphocytes present in uninfected mice8, however mucosal colonization will lead to low- to high-grade inflammation (depending on the virulence of the bacterial species and strain) that will result in an immune response and the subsequent recruitment of host immune cells. These cells can be isolated by a lavage of the tracheal contents through the nares, and correlated to the density of colonization bacteria to better understand the kinetics of the infection.

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Colonization of the murine nasopharynx with Streptococcus pneumoniae and the subsequent extraction of adherent or recruited cells is described. This technique involves flushing the nasopharynx and collection of the fluid through the nares and is adaptable for various readouts, including differential cell quantification and analysis of mRNA expression in situ.

연쇄상 구균 폐렴으로 비강 내 식민지 화 중 염증 반응의 특성화

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood vessels resulting in vascular leak, the development of purpuric rashes and eventual tissue necrosis. Studying the pathogenesis of this infection was previously limited by the human specificity of the bacteria, which makes in vivo models difficult. In this protocol, we describe a humanized model for this infection in which human skin, containing dermal microvessels, is grafted onto immunocompromised mice. These vessels anastomose with the mouse circulation while maintaining their human characteristics. Once introduced into this model, N. meningitidis adhere exclusively to the human vessels, resulting in extensive vascular damage, inflammation and in some cases the development of purpuric rash. This protocol describes the grafting, infection and evaluation steps of this model in the context of N. meningitidis infection. The technique may be applied to numerous human specific pathogens that infect the blood stream.

Neisseria meningitidis is a human specific pathogen that infects blood vessels. In this protocol human microvessels are introduced into a mouse by grafting human skin onto immunocompromised mice. Bacteria adhere extensively to the human vessels, leading to vascular damage and development of the purpuric rash typically observed in human cases.

인간 답게 된 마우스 모델은 미세 혈관을 대상으로 세균 감염을 연구하는

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including neoplastic, autoimmune, and chronic inflammatory diseases. Emerging evidence implicates pathogen-induced chronic inflammation in the development and progression of chronic diseases with a wide variety of clinical manifestations. Due to the complex and multifactorial etiology of chronic disease, designing experiments for proof of causality and the establishment of mechanistic links is nearly impossible in humans. An advantage of using animal models is that both genetic and environmental factors that may influence the course of a particular disease can be controlled. Thus, designing relevant animal models of infection represents a key step in identifying host and pathogen specific mechanisms that contribute to chronic inflammation.
Here we describe a mouse model of pathogen-induced chronic inflammation at local and systemic sites following infection with the oral pathogen Porphyromonas gingivalis, a bacterium closely associated with human periodontal disease. Oral infection of specific-pathogen free mice induces a local inflammatory response resulting in destruction of tooth supporting alveolar bone, a hallmark of periodontal disease. In an established mouse model of atherosclerosis, infection with P. gingivalis accelerates inflammatory plaque deposition within the aortic sinus and innominate artery, accompanied by activation of the vascular endothelium, an increased immune cell infiltrate, and elevated expression of inflammatory mediators within lesions. We detail methodologies for the assessment of inflammation at local and systemic sites. The use of transgenic mice and defined bacterial mutants makes this model particularly suitable for identifying both host and microbial factors involved in the initiation, progression, and outcome of disease. Additionally, the model can be used to screen for novel therapeutic strategies, including vaccination and pharmacological intervention.

Animal models have proven to be invaluable tools in defining host and pathogen specific mechanisms that contribute to the development of chronic inflammation. Here we describe a mouse model of oral infection with the human pathogen Porphyromonas gingivalis and detail methodologies to assess the progression of inflammation at local and systemic sites.

로컬 및 전신 사이트에서 병원체에 의한 만성 염증을위한 마우스 모델

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal features of the natural infection. This protocol describes procedures for the establishment and evaluation of systemic infection due to neuropathogenic Escherichia coli K1 in the neonatal rat. Colonization of the gastrointestinal tract leads to dissemination of the pathogen along the gut-lymph-blood-brain course of infection and the model displays strong age dependency. A strain of E. coli O18:K1 with enhanced virulence for the neonatal rat produces exceptionally high rates of colonization, translocation to the blood compartment and invasion of the meninges following transit through the choroid plexus. As in the human host, penetration of the central nervous system is accompanied by local inflammation and an invariably lethal outcome. The model is of proven utility for studies of the mechanism of pathogenesis, for evaluation of therapeutic interventions and for assessment of bacterial virulence.

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Here, a procedure is described for the establishment of systemic infection in the neonatal rat with cultures of Escherichia coli K1. This non-invasive procedure permits colonization of the gastrointestinal tract, translocation of the pathogen to the systemic circulation, and invasion of the central nervous system at the choroid plexus.

Neuropathogenic의 비 침습 모델<em&gt; 대장균</em&gt; 신생아 쥐에 감염

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of UTI in male and female mice have illustrated the procedures for bacterial inoculation and enumeration in urine and tissues. During an initial bladder infection in C57BL/6 mice, UPEC establish latent reservoirs inside bladder epithelial cells that persist following clearance of UPEC bacteriuria. This model builds on these studies to examine rUTI caused by the emergence of UPEC from within latent bladder reservoirs. The urogenital bacterium Gardnerella vaginalis is used as the trigger of rUTI in this model because it is frequently present in the urogenital tracts of women, especially in the context of vaginal dysbiosis that has been associated with UTI. In addition, a method for in situ bladder fixation followed by scanning electron microscopy (SEM) analysis of bladder tissue is also described, with potential application to other studies involving the bladder.

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

A mouse model of uropathogenic E. coli (UPEC) transurethral inoculation to establish latent intracellular bladder reservoirs and subsequent bladder exposure to G. vaginalis to induce recurrent UPEC UTI is demonstrated. Also demonstrated are the enumeration of bacteria, urine cytology, and in situ bladder fixation and processing for scanning electron microscopy.

재발 성 에스케리치아 콜라 이 요로 감염 Gardnerella 질 방광 노출에 의해 유발 마우스에서

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus (GBS)

Group B Streptococcus (GBS) is one of the most common bacteria isolated during human pregnancy. It is a leading cause of placental infection/inflammation, termed chorioamnionitis. Chorioamnionitis exposes the developing fetus to a high risk of organ injuries, perinatal morbidity, and mortality, as well as life-long neurobehavioral impairments and other non-neurological developmental issues. The two most frequent subtypes of GBS isolates from maternal and fetal tissues are serotypes Ia (13%-23%) and III (25%-53%). Our lab has developed and characterized a rat model of GBS-induced chorioamnionitis to study subsequent impacts on the central nervous system of the developing fetus and to understand underlying mechanistic aspects. This article presents the design as well as uses of the preclinical rat model, which closely reproduces the hallmark of GBS-induced chorioamnionitis in humans. This article aims to help scientists reproduce the experimental design as well as to provide support through examples of troubleshooting. The present model may also contribute to potential discoveries through uncovering causes, mechanisms, and novel therapeutic avenues, which remain unsettled in many developmental impairments arising from chorioamnionitis. Furthermore, the use of this model may be extended to the studies of perinatal non-neurological common and severe morbidities affecting, for instance, the retina, bowel, lung, and kidney. The main interest of this research is in the field of GBS-induced fetal neurodevelopmental impairments such as cerebral palsy (CP), attention deficit hyperactivity disorder (ADHD), and autism spectrum disorder (ASD). The rationale supporting this model is presented in this article, followed by procedures and results.

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus GBS

The goal of this protocol is to describe a preclinical animal model of Group B Streptococcus (GBS)-induced chorioamnionitis. The study is designed to investigate mechanistic processes, potential causal links with developmental impairments, and finally to develop translational anti-inflammatory placento- and neuro-protective treatments.

Group B Streptococcus (GBS) is one of the most common bacteria isolated during human pregnancy. It is a leading cause of placental infection/inflammation, ...

질 마이크로바이옴(Vaginal Microbiome)을 연구하기 위한 Microfluidic Vagina Chip

Modeling Healthy and Dysbiotic Vaginal Microenvironments in a Human Vagina-on-a-Chip

Women's health, and particularly diseases of the female reproductive tract (FRT), have not received the attention they deserve, even though an unhealthy reproductive system may lead to life-threatening diseases, infertility, or adverse outcomes during pregnancy. One barrier in the field is that there has been a dearth of preclinical, experimental models that faithfully mimic the physiology and pathophysiology of the FRT. Current in vitro and animal models do not fully recapitulate the hormonal changes, microaerobic conditions, and interactions with the vaginal microbiome. The advent of Organ-on-a-Chip (Organ Chip) microfluidic culture technology that can mimic tissue-tissue interfaces, vascular perfusion, interstitial fluid flows, and the physical microenvironment of a major subunit of human organs can potentially serve as a solution to this problem. Recently, a human Vagina Chip that supports co-culture of human vaginal microbial consortia with primary human vaginal epithelium that is also interfaced with vaginal stroma and experiences dynamic fluid flow has been developed. This chip replicates the physiological responses of the human vagina to healthy and dysbiotic microbiomes. A detailed protocol for creating human Vagina Chips has been described in this article.

저자 스포트라이트: 질 칩을 사용한 질 마이크로바이옴 상호 작용에 대한 연구의 혁명

This article describes a protocol for creating a microfluidic vagina-on-a-chip (Vagina Chip) culture device that enables the study of human host interactions with a living vaginal microbiome under microaerophilic conditions. This chip can be used as a tool to investigate vaginal diseases as well as to develop and test potential therapeutic countermeasures.

인간 Vagina-on-a-Chip에서 건강하고 dysbiotic 질 미세환경 모델링

Women's health, and particularly diseases of the female reproductive tract (FRT), have not received the attention they deserve, even though an unhealthy ...

그룹 B의 쥐 모델

요약

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이 비디오의 챕터

의 실험 마우스 모델에서 질 접종 및 샘플 수집을위한 프로토콜 칸디다 질염

연쇄상 구균 폐렴으로 비강 내 식민지 화 중 염증 반응의 특성화

인간 답게 된 마우스 모델은 미세 혈관을 대상으로 세균 감염을 연구하는

로컬 및 전신 사이트에서 병원체에 의한 만성 염증을위한 마우스 모델

Neuropathogenic의 비 침습 모델

재발 성 에스케리치아 콜라 이 요로 감염 Gardnerella 질 방광 노출에 의해 유발 마우스에서

C-section of Preclinical Animal Model of Chorioamnionitis Triggered by Group B Streptococcus (GBS)

인간 Vagina-on-a-Chip에서 건강하고 dysbiotic 질 미세환경 모델링

인간 Vagina-on-a-Chip에서 건강하고 dysbiotic 질 미세환경 모델링

인간 Vagina-on-a-Chip에서 건강하고 dysbiotic 질 미세환경 모델링