Name: quantitative 3d in silico modeling (q3dism) of cerebral amyloid-beta phagocytosis in rodent models of alzheimer's disease
Uploaded: 2016-12-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative 3D In Silico Modeling q3DISM of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease at JoVE.com

M-V.G-S. is supported by a BrightFocus Foundation Alzheimer's Disease Research Fellowship Award (A2015309F) and an Alzheimer's Association, California Southland Chapter Young Investigator Award. T.M.W. is supported by an ARCS Foundation and John Douglas French Alzheimer's Foundation Maggie McKnight Russell-JDFAF Memorial Postdoctoral Fellowship. This work was supported by the National Institute on Neurologic Disorders and Stroke (1R01NS076794-01, to T.T.), an Alzheimer's Association Zenith Fellows Award (ZEN-10-174633, to T.T.), and an American Federation of Aging Research/Ellison Medical Foundation Julie Martin Mid-Career Award in Aging Research (M11472, to T.T.). We are grateful for startup funds from the Zilkha Neurogenetic Institute, which helped to make this work possible. &#8195;

연구 윤리의 진술 : 여기에 설명 된 동물을 포함한 모든 실험은 남부 캘리포니아 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 대학에 의해 승인 및 연구소의 평가 및 인증을위한 협회 국민 건강 지침의 연구소 및 권장 사항을 엄격히 준수 수행 하였다 동물 관리 국제. 1. 쥐의 뇌 분리 및 면역 염색을위한 준비 DAY 1 : <ol><li> 세 TgF344-AD 쥐를 놓습니다 (14 개월) 또는 연속 깊은 이소 플루 란 마취 (4 %)에서 APP / PS1 마우스 (12 개월). 발가락 핀치에 의해 마취의 깊이와 철수 반사의 부재를 평가합니다. </li><li> 흉곽의 양쪽을 잘라 마음을 노출 올립니다. 심장의 좌심실로 23 G 바늘을 삽입하고 우심방에 작은 절개를합니다. 얼음처럼 차가운 인산 완충 식염수로 transcardial 관류하여 방혈로 진행연동 펌프 (마우스 30 mL를 150 - 쥐에 대한 200 ㎖)을 사용하여 (PBS). </li><li> 피부로 꼬리 정중선 절개를 확인하고 옆으로 피부와 근육을 이동합니다. 정중선을 따라 두개골 상부를 통해 상기 눈 사이 잘라. 뼈 플레이트를 제거하고 두개골에서 뇌 전체를 격리. </li><li> 코로나 쥐 뇌 매트릭스로 뇌를 놓고는 분기에 슬라이스. 4 ℃에서 파라 포름 알데히드 정착액 (PBS에서 4 % PFA)의 후방 분기 O / N (16 시간)을 품어. PBS에 세척 배 한 다음 70 % 에탄올로 전송할 수 있습니다. 주의 : PFA는 독성 및 적절한 개인 보호 장비와 화학 후드에서 처리되어야합니다. </li></ol> DAY 2 : <ol start="5"><li> 연속적으로 더 집중을 1 시간 에탄올 화장실에서 (70 %, 80 %, 95 %, 100 %의 X3를) 조직을 탈수 점진적으로 삽입 카세트에 뇌 분기를 놓고. </li><li> 3 개의 연속 100 % 크실렌 화장실 (1 시간마다)을 가진 조직에서 삭제 에탄올. 주의 : 크실렌은 독성 쉬입니다적절한 개인 보호 장비와 화학 후드 처리 할 울드. </li><li> (- 58 ° C, 90 분 각 56)이 용융 된 파라핀 왁스 목욕 후 파라핀 블록 조직을 포함. </li></ol> DAY 3 : <ol start="8"><li> 마이크로톰을 이용하여 파라핀 포함 된 두뇌의 10 μm의 두께 부분을 잘라. 수조 (1 분 50 ° C) 및에 딥 섹션은 슬라이드를 현미경에 적용됩니다. 슬라이드에 조직 유착을 보장, O / N을 건조 슬라이드를 둡니다. </li></ol> 2. 면역 염색 주 : 항체의 상이한 조합은 이하의 염색 과정에 이용 될 수있다. 쥐에서 뇌 조직과 호환 항체 칵테일은 표 1에 나열되어 있습니다. DAY 4 : <ol><li> 배 100 % 크실렌 화장실을 사용 Deparaffinize 뇌 섹션 (12 분 각각). </li><li> 연속 에탄올 욕 뇌 부분을 재수 - 100 % 10 분, 5 분 95 % 10 분 80 % 15 분 동안 마지막 70 % - followe배 PBS 세척 [빛 교반하면서 실온에서 5 분]에 의해 라. 한편, 95 열 항원 검색 솔루션 - 자기 바 교반 핫 플레이트에 97 ° C. </li><li> 30 분 동안 97 °의 C - 95에서 항원 검색 솔루션의 뇌 부분을 품어. 그런 다음, PBS의 배 세척 (빛 교반 RT에서 5 분). </li><li> 조직의 건조를 방지하고, 소수성 장벽 펜 조직 주변 소수성 장벽을 그리는 섬세한 작업이 와이퍼를 이용하여 신속하게 건조 슬라이드. 그리고 가습 챔버 내에서 1 시간 동안 RT에서 배양한다 [PBS 0.3 % 트리톤 X-100 및 10 % 정상 당나귀 혈청 (NDS)를 함유하는 완충액으로 차단 둘러싸인 조직 영역을 채운다. </li><li> 가습 챔버에서 4 ° C에서 O / N을 단핵 식세포 라벨 및 부화하기 (차단 버퍼에 희석) Iba1 차 항체와 버퍼를 차단 교체합니다. 항체 호스트와 작업 희석은 표 1 및 재료의 표를 참조하십시오. </li></ol> DAY 5 : <ol start="6"><li> 헹구기배 PBS 욕조와 차 항체 (빛 교반 RT에서 5 분). 배 PBS 화장실 다음에 (어둠 속에서 실온에서 버퍼를 차단에서) 1 시간 동안의 (a 594 nm의 방출 형광 물질과 결합) 형광 차 항체 (빛 교반 RT에서 5 분)에 품어. 이 때, 형광 신호 표백을 피하기 위해 어둠 속에서 섹션을 유지한다. </li></ol> DAY 6-7 : <ol start="7"><li> 반복 2.5 CD68 2.6 (쥐의 뇌) 또는 phagolysosomes 라벨을 램프 1 (마우스 조직) 항체 및 적절한 보조 항체 (488 nm의 방출 형광과 함께) 단계를 반복합니다. </li></ol> DAY 7-8 : <ol start="8"><li> 반복 Aβ 예금에 레이블 (A 647 나노 형광 결합) OC (쥐의 조직) 또는 4G8 (마우스 뇌) 항체 및 적절한 보조 항체 2.5 및 2.6 단계를 반복합니다. 참고 : 또는 6E10 항체는 마우스와 쥐 조직에 성공적으로 모두 사용할 수 있습니다. 적절한 항체 조합, 재료의 표를 참조하십시오 </str&gt; 옹. </li><li> 허용 섹션에 완전히 건조 O / 어둠 속에서 실온에서 N. 그런 다음, 커버 DAPI를 포함하는 형광 설치 미디어에 의해 밀봉 된 커버 슬립으로 표본. </li></ol> 대형 Z-스택 공 촛점 데이터 세트 3. 취득 참고 :이 프로토콜은 60X 목적 및 405 nm의, 488 nm의, 594 nm의 및 647 nm의 레이저가 장착 된 완전 자동화 된 레이저 스캐닝 공 초점 현미경이 필요합니다. 모든 장치는 영상화 레이저 제어 소프트웨어에 의해 제어되는 시스템이다. 컴퓨터, epifluorescent 램프, 현미경, 레이저와 카메라의 영상 프로토콜, 전원을 시작하기 전에. DAY 9 : <ol><li> 60X 현미경 목표를 선택합니다. 렌즈에 침지 기름을 추가하고 현미경 단계 슬라이드 홀더 상에 샘플을 배치합니다. 오일이 슬라이드에 닿을 때까지 목표를 올립니다. 접안을 통해 epifluorescent 조명을 사용하여 해마 또는 대뇌 피질의 아밀로이드 플라크를 찾는 데 초점면을 조정합니다. </li><li> 공 초점 메신저 획득해마 또는 공 초점 현미경에 의한 설치류의 피질에서 아밀로이드 침착을 둘러싼 활성화 단핵 식세포의 나이 (60X 배율, Z-스택 단계 : 0.25 μm의 &lt;Z &lt;0.40 μm의 단계의 수 (25) &lt;N &lt;35). </li></ol> 4. q3DISM 참고 : 의미있는 결과를 산출하기 위해, 우리는 관심의 동물 / 지역 당 3 이미지의 최소를 분석하는 것이 좋습니다. 각 이미지의 경우, 분석 할 수있는 세포의 풍부한 실험 패러다임에 따라 다를 수 있습니다. (- D 및 2C - D도 1C를 참조 예로부터 멀리 또는 플라크와 관련된 단핵 식세포)가이 보고서에 나타난 대표적인 결과에서, 우리는 3 셀 / 상태를 분석 하였다. DAY 10 : <ol><li> 과학적인 3D 이미지 처리 및 분석 소프트웨어 colocalization을 (coloc) 동시에 모든 Z-면에서 Iba1 / CD68 (쥐의 조직) 또는 Iba1 / 램프 1 (마우스 조직) 염색의 공간적 근접성을위한 모듈과 공 촛점 데이터 세트를 분석합니다.이바 + / CD68 + 또는 활성화 된 단핵 식세포 내에서 phagolysosomes에 해당 이바 + / 램프 1 + colocalization을 채널을 만듭니다. <ol><li> (CD68에 해당하는 또는 488 나노 형광과 함께 램프 1 염색) 채널 B에 대한 (594 나노 형광체와 결합 Iba1 염색에 해당) 채널 A의 TRITC 및 FITC를 선택합니다. &#39;모드 체크,&#39;선택 &#39;임계 값&#39;과 &#39;coloc 강도,&#39;선택 &#39;소스 채널&#39;에 대한 소프트웨어 창의 오른쪽에. </li><li> 소프트웨어 윈도우의 오른쪽에있는 &#39;coloc 색상을&#39;선택 &#39;수정&#39;을 클릭합니다. </li><li> 독립적으로 각 채널에 대해, 특정 염색을 포함하고 배경 / 비 특정 신호를 제외 할 임계 값을 조정합니다. 조정되면, 편견 분석을 위해 이미지 사이의 임계 값을 변경하지 마십시오. colocalized 복셀 (모든 Z-스택의 픽셀)는 모든 Z-스택 SIM의 단계 4.1.2에서 선택한 색상으로 표시됩니다ultaneously. </li><li> &#39;coloc 채널을 구축&#39;을 클릭합니다. 생성 된 colocalization을 채널은 화면 조정 창에 나타납니다. </li><li> 채널 통계를 엽니 다 coloc 채널을 클릭합니다. &#39;colocalized 임계 값 이상의 볼륨 / 재료 A의 %는&#39;램프 1 또는 CD68 신호 (488 나노 형광체에 해당하는 복셀)와 colocalized Iba1 신호합니다 (594 나노 형광체에 해당하는 복셀)의 %를 나타냅니다. 더 간단하게, 이것은 phagolysosomes (도 1C 및도 2C 참조)에 의해 점유 된 단핵구 볼륨이다. 참고 : &#39;colocalized 임계 값 이상의 볼륨 / 소재 B의 %는&#39;Iba1와 colocalized 램프 1 또는 CD68 신호 %에 해당한다. phagolysosomes은 세포 내 구조이기 때문에이 100 %에 가까워 야합니다. 값은 colocalized 임계 값 위의 모든 Z-스택에서 신호의 비율을 기준으로합니다. </li></ol></li><li> coloc 모듈을 사용하면, OC (래트 TI와 공간적 근접성 단계 4.1에서 생성 coloc 채널 분석ssue) 또는 4G8 (마우스 조직) Aβ 신호. 이 phagolysosomes 내에서 캡슐화 Aβ의 정량이 가능합니다. <ol><li> 채널을 (OC 또는 647 나노 형광체와 결합 4G8 염색에 해당) 채널 B 및 Cy5에합니다 (Iba1 / CD68 또는 Iba1 / 램프 1의 coloc 채널 단계 4.1에서 만든에 상당) coloc 데이터 세트를 선택합니다. </li><li> 4.1.5 단계 4.1.2에 설명 된대로 coloc 채널을 구축 할 수 있습니다. </li><li> 채널 통계를 엽니 다 coloc 채널을 클릭합니다. &#39;colocalized 임계 값 이상의 볼륨 / 재료 A의 %는&#39;Iba1 / 램프 1 또는 Iba1 / CD68 (복셀 단계 4.1.5에 내장 된 coloc 채널에 대응.) OC 또는 4G8 신호 (복셀은 647에 대응 colocalized의 %를 차지 나노 형광). 이는 Aβ (도 1D 및 2D 참조)에 의해 점유 된 포식 용해 소체 볼륨이다. 참고 : &#39;colocalized 임계 값 이상의 볼륨 / 소재 B의 %는&#39;phagolysosomes와 colocalized 총 Aβ 신호 %에 해당한다.이것은 phagolysosomes (본 대표적인 결과 미도시) 내에 캡슐화 총 Aβ 침착의 비율을 평가하는 데 사용될 수있다. </li></ol></li><li> 공 촛점 이미지 스택을 재구성 및 단핵구 phagolysosomes 내에서 캡슐화 Aβ의 3D 모델을 생성하기 위해 능가 모듈을 사용합니다. <ol><li> &#39;게재 조정&#39;창에서 (만 Iba1 염색을 표시하기 위해) TRITC을 선택합니다. &#39;볼륨 등록 정보&#39;창에서 &#39;새로운면을 추가&#39;를 클릭합니다. </li><li> 에서 &#39;1/5 알고리즘&#39;단계에서 &#39;설정&#39;, &#39;면&#39;을 선택합니다. 또한,의 &#39;색&#39;(적색도 (1B)와 (b)에 60 %의 투명도로 설정) 팔레트 또는 RGB 컬러 유형을 선택하고 투명도를 조정합니다. 확인란을 선택 &#39;관심 지역을 선택&#39;. 다음을 클릭합니다. </li><li> 단계에서 &#39;관심의 2/5 지역,&#39;x는, y를 조절하여 관심의 세포 주위에 창을 그릴 및 z 좌표는 (도 1a에 흰색 상자를 참조하십시오 </stroNG&gt;와 2A). 다음을 클릭합니다. </li><li> 단계 &#39;3/5 소스 채널&#39;에서 TRITC 소스 채널을 선택합니다. 0.4 μm의 상자 &#39;부드러운&#39;및 설정 표면적 상세 수준을 확인합니다. 내용은 &#39;임계&#39;절대 강도를 선택합니다. 다음을 클릭합니다. </li><li> 생성 된 볼륨이 TRITC 채널 신호와 완벽하게 겹치도록 단계에서 &#39;4/5 임계 값,&#39;임계 값을 조정합니다. 다음을 클릭합니다. </li><li> 단계에서 &#39;5/5는 표면을 분류,&#39;섹션에서 &#39;필터 유형&#39;에 포함 또는 생성 할 볼륨에서 제외 할 자신의 크기에 따라 개체를 선택합니다. 마침을 클릭합니다 모든 창조의 단계를 실행하고 마법사를 종료합니다. </li><li> 반복 FITC 채널 (램프 1 + 또는 CD68 + phagolysosomes)에 대한 3D 표면을 만들 4.3.1 4.3.6 단계를. </li><li> 반복 Cy5에 채널에 대한 (OC + 또는 4G8 + Aβ 예금) 3 차원 표면을 만들 4.3.1 4.3.6 단계를. </li></ol></li></ol>

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Chem. 285 (47), 36945-36957 (2010).</li><li>Blurton-Jones, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+improve+cognition+via+BDNF+in+a+transgenic+model+of+Alzheimer+disease.">Neural stem cells improve cognition via BDNF in a transgenic model of Alzheimer disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (32), 13594-13599 (2009).</li><li>Stalder, M., Deller, T., Staufenbiel, M., Jucker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D-Reconstruction+of+microglia+and+amyloid+in+APP23+transgenic+mice:+no+evidence+of+intracellular+amyloid.">3D-Reconstruction of microglia and amyloid in APP23 transgenic mice: no evidence of intracellular amyloid.</a> Neurobiol Aging. 22 (3), 427-434 (2001).</li><li>Leinenga, G., G&#246;tz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+ultrasound+removes+amyloid-&#946;+and+restores+memory+in+an+Alzheimer's+disease+mouse+model.">Scanning ultrasound removes amyloid-&#946; and restores memory in an Alzheimer's disease mouse model.</a> Sci Transl Med. 7 (278), 33 (2015).</li><li>Liarski, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+distance+mapping+identifies+functional+T+follicular+helper+cells+in+inflamed+human+renal+tissue.">Cell distance mapping identifies functional T follicular helper cells in inflamed human renal tissue.</a> Sci Transl Med. 6 (230), 46 (2014).</li><li>Nichols, L., Pike, V. W., Cai, L., Innis, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+in+vivo+quantitation+of+beta-amyloid:+an+exemplary+biomarker+for+Alzheimer's+disease.">Imaging and in vivo quantitation of beta-amyloid: an exemplary biomarker for Alzheimer's disease.</a> Biol Psychiatry. 59 (10), 940-947 (2006).</li><li>Skovronsky, D. M., Zhang, B., Kung, M. P., Kung, H. F., Trojanowski, J. Q., Lee, V. 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L., Zheng, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-Microglia+Cross+Talk+through+Complement+Activation+Modulates+Amyloid+Pathology+in+Mouse+Models+of+Alzheimer's+Disease.">Astrocyte-Microglia Cross Talk through Complement Activation Modulates Amyloid Pathology in Mouse Models of Alzheimer's Disease.</a> J Neurosci. 36 (2), 577-589 (2016).</li><li>Novotny, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conversion+of+Synthetic+A&#946;+to+In+Vivo+Active+Seeds+and+Amyloid+Plaque+Formation+in+a+Hippocampal+Slice+Culture+Model.">Conversion of Synthetic A&#946; to In Vivo Active Seeds and Amyloid Plaque Formation in a Hippocampal Slice Culture Model.</a> J Neurosci. 36 (18), 5084-5093 (2016).</li><li>Tartaro, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+fluorescence-based+in+vivo+phagocytosis+assay+to+measure+mononuclear+phagocyte+system+function+in+the+rat.">Development of a fluorescence-based in vivo phagocytosis assay to measure mononuclear phagocyte system function in the rat.</a> J Immunotoxicol. 12 (3), 239-246 (2015).</li></ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

우리는 단핵 식세포에 의해 생체 내에서 Aβ의 식세포 작용의 진정한 3D 정량이 보고서에서 설명하는 프로토콜은 특정 세포와 세포 내 구획의 표시뿐만 아니라 Aβ 예금에 의존한다. 특히, 우리는 Iba1 (이온화 된 칼슘이 어댑터 분자 1 바인딩), 세포 활성화 (18, 19)에 막 파동 운동과 식균 작용에 관여하는 단백질이 뇌 단핵 식세포를 염색하는 데 사용. Iba1 + 세포...

알츠하이머 병 (AD), 가장 일반적으로 노인성 치매 1 &quot;치매&quot;β 아밀로이드 플라크 만성 낮은 수준의 신경 염증, 타우 병증, 신경 세포의 상실,인지 장애이 대뇌 아밀로이드 β (Aβ)의 축적을 특징으로 . AD 환자의 뇌에서 신경 염증이 성상 세포와 단핵 식세포 반응에 의해 책정되어 주변 Aβ 예금 3 (자신의 주변 기원은 불분명 대 중앙 있지만, 미세 아교 세포로 함). 중추 신경계의 선천성 면역 파수꾼으로, 미세 아교 세포는 중앙 뇌 Aβ을 취소 위치한다. 그러나, Aβ 플라크에 소교 모집이있는 경우, 약간의 Aβ의 식세포 작용 4,5 동반한다. 하나의 가설은 미세 아교 세포가 Aβ의 작은 어셈블리를 phagocytozing에 의해 초기에 신경 있다는 것입니다. 그러나 결국 이러한 세포는 압도적 인 Aβ 부담 및 / 또는 연령 관련 기능 D와 같은 신경 독성이 될ecline, 신경 독성과인지 기능 저하 (6)에 기여, 기능 장애 염증성 표현형에 미세 아교 세포를 불러 일으킨다. 최근 게놈 넓은 협회 연구 (GWAS)는 식균 작용 8-11을 조절하는 핵심 선천성 면역 경로 (7)에 속하는 AD 위험 대립 유전자의 클러스터를 확인했다. 따라서, 대뇌 아밀로이드 침착에 대한 면역 반응은 AD의 원인을 이해의 관점에서 새로운 치료 방법 개발 12-14 모두에 관심있는 주요 영역이되었다. 그러나, 생체 내에서 Aβ 식균 작용을 평가하는 방법에 대한 중요한 필요가있다. 이 충족되지 않은 요구를 충족하기 위해, 우리는 알츠하이머와 같은 질병의 쥐 모델에서 단핵 식세포에 의해 대뇌 Aβ의 식세포 작용의 진정한 3D 정량을 가능하게 실리 모델링 (q3DISM)의 양적 차원을 개발했다. 그들은 동물 모델 질병을 요점을 되풀이하는 정도에 의해서만 제한AD의 pathoetiology을 이해하고 실험적인 치료법을 평가하는 귀중한 입증. 프레 (PS) 및 아밀로이드 전구체 단백질 (APP) 유전자의 돌연변이는 상 염색체 우성 독립적 AD의 원인이된다는 사실로 인해, 이러한 돌연변이 유전자는 광범위하게 형질 전환 설치류 모델을 생성하는 데 사용되어왔다. 형질 전환 APP / PS1 마우스는 동시에 &quot;스웨덴어&quot;돌연변이 인간 APP (APP의 SWE) 및 가속 뇌 아밀로이드증과 신경 염증 (15, 16)에 존재 Δ 엑손 9 돌연변이 인간의 프레 1 (PS1ΔE9)를 coexpressing. 또한, 우리는 (피셔 (344) 배경에 라인 TgF344-AD) APP의 SWE와 PS1ΔE9 구조와 coinjected 이중 형질 전환 쥐를 생성했습니다. 뇌 아밀로이드증의 형질 전환 마우스 모델과 달리, TgF344-AD 쥐 타우 병증, 신경 세포의 사멸 손실 및 행동 장애 (17) 앞에 대뇌 아밀로이드을 개발한다. 이 보고서에서 우리는 IMM위한 프로토콜을 설명APP / PS1 마우스 및 TgF344-AD 쥐, 큰 Z 차원 공 촛점 이미지의 취득에서 뇌 부분에서 미세 아교 세포, phagolysosomes 및 Aβ 예금을 unostaining. 실리 생성 및 소교 phagolysosomes에 Aβ 흡수의 정량을 허용 공 초점 데이터 세트에서 진정한 3D 복원의 분석에서 우리는 세부 사항. 더 광범위하게, 여기에 자세히 우리 방법론은 생체 내에서 식균 사실상 어떠한 형태를 정량화하는데 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott</td><td>NDC 0044-5260-05</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting scissors</td><td>VWR</td><td>82027-582</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting scissors Blunt tip</td><td>VWR</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Tweezers</td><td>VWR</td><td>94024-408</td><td></td></tr><tr><td>23 G needle</td><td>VWR</td><td>BD305145</td><td></td></tr><tr><td>peristaltic pump FH10</td><td>Thermo Scientific</td><td>72-310-010</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>Bioland Scientific</td><td>PBS01-02</td><td>Phosphate-buffered Saline; Working concentration 1x</td></tr><tr><td>Adult Mouse Brain Matrix, Coronal slices, Stainless Steel 1 mm&amp;nbsp;</td><td>Kent Scientific</td><td>RBMS-200C</td><td></td></tr><tr><td>Adult Rat Brain Matrix, Coronal slices, Stainless Steel 1 mm&amp;nbsp;</td><td>Kent Scientific</td><td>RBMS-305C&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>32% Paraformaldehyde aqueous solution (PFA)</td><td>EMS</td><td>15714-S</td><td>Caution: Toxic. Working concentration: 4% in PBS</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>VWR</td><td>89125-188</td><td>Various concentrations, see protocol</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Uni-cassettes Sakura</td><td>VWR</td><td>25608-774</td><td></td></tr><tr><td>Embedding and Infiltration Paraffin</td><td>VWR</td><td>15147-839</td><td></td></tr><tr><td>Microtome Leica RM2125</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Disposable Microtome Blades&amp;nbsp;</td><td>VWR</td><td>25608-964</td><td></td></tr><tr><td>Water bath Leica HI 1210</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro slide Superfrost plus</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>534056-4X4L</td><td>Caution: Toxic&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Target Retrieval Solution 10x</td><td>DAKO</td><td>S1699</td><td>Working concentration 1x</td></tr><tr><td>KimWipes</td><td>VWR</td><td>21905-026</td><td></td></tr><tr><td>Hydrophobic PAP pen</td><td>VWR</td><td>95025-252</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>97062-208</td><td></td></tr><tr><td>Normal Donkey Serum (NDS)</td><td>Jackson Immuno</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Coverslips</td><td>VWR</td><td>48393081</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold antifade reagent with DAPI</td><td>Life Technologies</td><td>P36935</td><td></td></tr><tr><td>Glass Slide Rack</td><td>VWR</td><td>100492-942</td><td></td></tr><tr><td>Iba1 antibody (polyclonal, rabbit)</td><td>Wako</td><td>019-19741&amp;nbsp;</td><td>Working concentration 1:200</td></tr><tr><td>Iba1 antibody (polyclonal, goat)</td><td>LifeSpan Bioscience</td><td>LS-B2645</td><td>Working concentration 1:200</td></tr><tr><td>rat CD68 [KP1] antibody (monoclonal, mouse)</td><td>Abcam</td><td>ab955</td><td>Working concentration 1:200</td></tr><tr><td>mouse CD68 [FA-11] antibody (monoclonal, rat)</td><td>Abcam</td><td>ab53444</td><td>Working concentration 1:200</td></tr><tr><td>mouse CD107a (LAMP1) antibody (monoclonal, rat)</td><td>Affymetrix</td><td>14-1071</td><td>Working concentration 1:100</td></tr><tr><td>Beta-Amyloid, 17 - 24 (4G8) antibody (monoclonal, mouse)</td><td>Covance</td><td>SIG-39220</td><td>Working concentration 1:200</td></tr><tr><td>Beta-Amyloid, 1 - 16 (6E10) antibody (monoclonal, mouse)</td><td>Covance</td><td>SIG-39320</td><td>Working concentration 1:200</td></tr><tr><td>OC antibody (polyclonal, rabbit)</td><td>Gifted by D. H. Cribbs and C. G. Glabe (UC Irvine)</td><td>Working concentration 1:200</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 mouse secondary antibody</td><td>Invitrogen</td><td>A-11001</td><td>Working concentration 1:1,000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 rat secondary antibody</td><td>Invitrogen</td><td>A-11006</td><td>Working concentration 1:1,000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 rabbit secondary antibody</td><td>Invitrogen</td><td>A-11037</td><td>Working concentration 1:1,000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 goat secondary antibody</td><td>Invitrogen</td><td>A-11080</td><td>Working concentration 1:1,000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 mouse secondary antibody</td><td>Invitrogen</td><td>A-21235</td><td>Working concentration 1:1,000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 rabbit secondary antibody</td><td>Invitrogen</td><td>A-21443</td><td>Working concentration 1:1,000</td></tr><tr><td>Immersion oil</td><td>Nikon&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>A1 Confocal microscope</td><td>Nikon&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS Elements Advanced Research software</td><td>Nikon&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imaris:Bitplane software version 7.6</td><td>Bitplane</td><td></td><td>&quot;coloc&quot; and &quot;supass&quot; modules are used.&amp;nbsp;Alternatively, the open-source freeware&amp;nbsp;ImageJ can be used for colocalization&amp;nbsp;analysis of confocal z-stacks datasets.</td></tr></tbody></table>

quantitative 3d in silico modeling (q3dism) of cerebral amyloid-beta phagocytosis in rodent models of alzheimer's disease

신경 염증은 이제 신경 퇴행성 질환의 주요 병인 요소로 인식되고 있습니다. 단핵 식세포는 식균 작용 및 파편과 이물질의 통관에 대한 책임 선천성 면역 세포이다. 이 세포들은 주변에서 침투 미세 아교 세포로 알려진 CNS 상주 식세포 및 단핵 식세포를 포함한다. 광학 현미경은 일반적으로 쥐 또는 인간의 두뇌 표본 식세포를 시각화하는데 사용되었다. 그러나 질적 방법은 생체 내 식균 작용의 결정적인 증거를 제공하지 않았습니다. 여기, 우리는 실리 모델링 (q3DISM), 설치류 알츠하이머 병 (AD) 모델에서 단핵 식세포에 의해 아밀로이드 β (Aβ) 식균 작용의 진정한 3D 정량을 가능하게하는 강력한 방법 양적 차원을 설명합니다. 이 방법은 형광 Aβ는 쥐의 뇌 섹션 phagolysosomes 내에서 캡슐화 시각화하는 것을 포함한다. 대형 Z 차원 공 촛점 데이터 세트는 3D는 A &amp; 정량을 위해 재구성# 946; 공간적으로 phagolysosome 내에서 colocalized. 우리는 마우스 및 래트의 뇌에 q3DISM의 성공적인 적용을 설명하지만,이 방법은 모든 조직에서의 거의 모든 식세포 이벤트에 확장 될 수있다.

q3DISM 위에서 상세히위한 다단계 방법을 사용하여, 우리는 APP / PS1 마우스 (도 1) 및 TgF344-AD 래트 (도 2)의 뇌에서 단핵 phagolysosomes으로 Aβ 흡수를 정량화 할 수있다. 따라서, q3DISM 방법론은 AD의 마우스 및 쥐 모델에서 단핵 식세포의 분석을 사용할 수있다. 흥미롭게도, CD68 + phagolysosomes가 차지하는 체적은 크게 두 APP / PS1 마우스 (도 1b, C...

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Quantitative 3D In Silico Modeling q3DISM of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease

우리는 알츠하이머 병의 쥐 모델에서 단핵 식세포에 의해 대뇌 아밀로이드 β (Aβ) 식균 작용의 실리코 모델링 (q3DISM)의 양적 3D에 대한 방법론을 개발했다. 이 방법은 생체 내에서 거의 모든 식세포 이벤트의 정량화를 위해 일반화 될 수있다.

양적 3D<em&gt; 인 실리코</em알츠하이머 병의 쥐 모델에서 뇌 아밀로이드 - 베타 탐식&gt; 모델링 (q3DISM)

Neuroinflammation is now recognized as a major etiological factor in neurodegenerative disease. Mononuclear phagocytes are innate immune cells responsible ...

quantitative-3d-silico-modeling-q3dism-cerebral-amyloid-beta

Research

JoVE Journal

Medicine

Quantitative 3D In Silico Modeling (q3DISM) of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease

7.9K 조회수.  University of Southern California (USC).  우리는 알츠하이머 병의 쥐 모델에서 단핵 식세포에 의해 대뇌 아밀로이드 β (Aβ) 식균 작용의 실리코 모델링 (q3DISM)의 양적 3D에 대한 방법론을 개발했다. 이 방법은 생체 내에서 거의 모든 식세포 이벤트의 정량화를 위해 일반화 될 수있다. 

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Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks of Alzheimer's disease. The central component of neuritic plaques is a small filamentous protein called amyloid &beta; protein (A&beta;)1, which is derived from sequential proteolytic cleavage of the beta-amyloid precursor protein (APP) by &beta;-secretase and &gamma;-secretase. The amyloid hypothesis entails that A&gamma;-containing plaques as the underlying toxic mechanism in AD pathology2. The postmortem analysis of the presence of neuritic plaque confirms the diagnosis of AD. To further our understanding of A&gamma; neurobiology in AD pathogenesis, various mouse strains expressing AD-related mutations in the human APP genes were generated. Depending on the severity of the disease, these mice will develop neuritic plaques at different ages. These mice serve as invaluable tools for studying the pathogenesis and drug development that could affect the APP processing pathway and neuritic plaque formation. In this protocol, we employ an immunohistochemical method for specific detection of neuritic plaques in AD model mice. We will specifically discuss the preparation from extracting the half brain, paraformaldehyde fixation, cryosectioning, and two methods to detect neurotic plaques in AD transgenic mice: immunohistochemical detection using the ABC and DAB method and fluorescent detection using thiofalvin S staining method.

One of the pathological characteristics of AD is the formation of Amyloid &#x03B2; protein positive neuritic plaques. In this protocol we describe two methods to detect neuritic plaques in transgenic AD model mice: immunohistochemical detection using the ABC and DAB method and fluorescent detection using thioflavin S staining method.

알츠하이머 질병 마우스 모델에서 Neuritic Plaques의 감지

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks ...

연구

신경과학

Establishment of a Valuable Mimic of Alzheimer's Disease in Rat Animal Model by Intracerebroventricular Injection of Composited Amyloid Beta Protein

Alzheimer&#39;s disease (AD) is an irreversible, progressive brain disease that slowly destroys memory and is accompanied by neuron loss and structure change. With the increase of AD patients worldwide, the pathology and treatment of the disease has become a focus in the International Pharmaceutical Industry. Thus, the establishment of the animal model to mimic AD in the laboratory is of great importance.
Here, we describe a detailed protocol for establishing a mimic of AD in a rat animal model though intracerebroventricular injection of amyloid beta protein 25-35 (A&#946;25-35) combined with aluminum trichloride (AlCl3) and anterodorsal thalamic nucleus injection of recombinant human transforming growth factor-&#946;1 (RHTGF-&#946;1) to rats. The related markers of AD were measured, including: spatial memory, neuronal structure and substructure, neuronal A&#946;, and neurofibrillary tangles (NFT) production. This rat model demonstrates spatial memory impairment, neuronal structure and substructure pathological changes, neuron intracellular A&#946; burden, and NFT aggregation, and provides a close mimic of the neuronal structure and function disorder to that of clinical AD patients. Thus, the presented AD rat modelprovides a valuable in vivo tool for exploring neuronal function, neuronal pathology, and drug screening of AD.

This is a protocol to mimic Alzheimer&#39;s Disease in rats by evaluation of spatial memory impairment, neuronal pathological changes, neuronal amyloid beta protein (A&#946;) burden, and neurofibrillary tangles aggregation, induced by the injection of A&#946;25-35 combined with aluminum trichloride and recombinant human transforming growth factor-&#946;1.

합성 아 밀 로이드 베타 단백질의 Intracerebroventricular 주입에 의해 쥐 동물 모델에서 Alzheimer의 질병의 귀중 한 모방의 설립

Alzheimer&#39;s disease (AD) is an irreversible, progressive brain disease that slowly destroys memory and is accompanied by neuron loss and structure ...

행동분석학

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the over-production of amyloid-beta and the deposition of amyloid-beta plaques in brain regions of the afflicted individuals. Throughout the years scientists have generated numerous Alzheimer&#8217;s disease mouse models that attempt to replicate the amyloid-beta pathology. Unfortunately, the mouse models only selectively mimic the disease features. Neuronal death, a prominent effect in the brains of Alzheimer&#8217;s disease patients, is noticeably lacking in these mice. Hence, we and others have employed a method of directly infusing soluble oligomeric species of amyloid-beta - forms of amyloid-beta that have been proven to be most toxic to neurons - stereotaxically into the brain. In this report we utilize male C57BL/6J mice to document this surgical technique of increasing amyloid-beta levels in a select brain region. The infusion target is the dentate gyrus of the hippocampus because this brain structure, along with the basal forebrain that is connected by the cholinergic circuit, represents one of the areas of degeneration in the disease. The results of elevating amyloid-beta in the dentate gyrus via stereotaxic infusion reveal increases in neuron loss in the dentate gyrus within 1 week, while there is a concomitant increase in cell death and cholinergic neuron loss in the vertical limb of the diagonal band of Broca of the basal forebrain. These effects are observed up to 2 weeks. Our data suggests that the current amyloid-beta infusion model provides an alternative mouse model to address region specific neuron death in a short-term basis. The advantage of this model is that amyloid-beta can be elevated in a spatial and temporal manner.

Here, we present a protocol for direct stereotaxic brain infusion of amyloid-beta. This methodology provides an alternative in vivo mouse model to address the short-term effects of amyloid-beta on brain neurons.

마우스 해마에 올리고머 아밀로이드 - 베타의 정위 주입

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Intracerebroventricular Injection of Amyloid-&#946; Peptides in Normal Mice to Acutely Induce Alzheimer-like Cognitive Deficits

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, progressive accumulation of A&#946; oligomers and plaques is observed. Such A&#946; abnormalities are believed to block long-term potentiation, impair synaptic function, and induce cognitive deficits. Clinical and experimental evidences have revealed that the acute increase of A&#946; levels in the brain allows development of Alzheimer-like phenotypes. Hence, a detailed protocol describing how to acutely generate an AD mouse model via the intracerebroventricular (ICV) injection of A&#946; is necessary in many cases. In this protocol, the steps of the experiment with an A&#946;-injected mouse are included, from the preparation of peptides to the testing of behavioral abnormalities. The process of preparing the tools and animal subjects before the injection, of injecting the A&#946; into the mouse brain via ICV injection, and of assessing the degree of cognitive impairment are easily explained throughout the protocol, with an emphasis on tips for effective ICV injection of A&#946;. By mimicking certain aspects of AD with a designated injection of A&#946;, researchers can bypass the aging process and focus on the downstream pathology of A&#946; abnormalities.

The amyloid-&#946; (A&#946;)-injected animal model enables the administration of a defined quantity and species of A&#946; fragments and reduces individual differences within each study group. This protocol describes the intracerebroventricular (ICV) injection of A&#946; without stereotactic instruments, enabling the production of Alzheimer-like behavioral abnormalities in normal mice.

일반 마우스의 아밀로이드-β의 펩티드의 뇌 실내 주사는 급성 치매와 같은인지 적자를 유도합니다

Amyloid-&#946; (A&#946;) is a major pathological mediator of both familial and sporadic Alzheimer's disease (AD). In the brains of AD patients, ...

Assessment of Spontaneous Alternation, Novel Object Recognition and Limb Clasping in Transgenic Mouse Models of Amyloid-&#946; and Tau Neuropathology

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. The paradigm includes tests for spontaneous alternation in a Y-maze, novel object recognition, and limb clasping. These tests were selected because they: 1) interrogate function of cognitive or motor domains and the correlate neural circuitry relevant to the human disease state, 2) have clearly defined endpoints, 3) have easily implementable quality control checks, 4) can be run in a moderate throughput format, and 5) require little intervention by the investigator. These methods are designed for investigators looking to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks, or functional motor behaviors associated with Alzheimer's disease mouse models. The methods described here use behavioral tests that engage a number of different brain regions including hippocampus and various cortical areas. Investigators that desire cognitive tests that specifically assess cognition mediated by a single brain region could use these techniques to supplement other behavioral tests.

Described here is a staged, behavioral screening approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional motor behaviors in transgenic mouse models of &#946;-amyloidosis and tauopathy. These methods are optimized to screen compounds for activity in short-term and working memory tasks.

아밀로이드 -β 및 타우 신경 병증의 유전자 변형 마우스 모델에서 자발적 교대, 새로운 대상 인식 및 사지 걸림의 평가

Here we describe a staged, behavioral testing approach that can be used to screen for compounds that exhibit in vivo efficacy on cognitive and functional ...

의학

Detecting Amyloid-&#946; Accumulation via Immunofluorescent Staining in a Mouse Model of Alzheimer's Disease

Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disease that contributes to 60-70% dementia around the world. One of the hallmarks of AD undoubtedly lies on accumulation of amyloid-&#946; (A&#946;) in the brain. A&#946; is produced from the proteolytic cleavage of the beta-amyloid precursor protein (APP) by &#946;-secretase and &#947;-secretase. In pathological circumstances, the increased &#946;-cleavage of APP leads to overproduction of A&#946;, which aggregates into A&#946; plaques. Since A&#946; plaques are a characteristic of AD pathology, detecting the amount of A&#946; is very important in AD research. In this protocol, we introduce the immunofluorescent staining method to visualize A&#946; deposition. The mouse model used in our experiments is 5&#215;FAD, which carries five mutations found in human familial AD. The neuropathological and behavioral deficits of 5xFAD mice are well-documented, which makes it a good animal model to study A&#946; pathology. We will introduce the procedure including transcardial perfusion, cryosectioning, immunofluorescent staining and quantification to detect A&#946; accumulation in 5&#215;FAD mice. With this protocol, researchers can investigate A&#946; pathology in an AD mouse model.

In the neuropathology of Alzheimer's disease, one of the most crucial characteristics is the deposition of amyloid-&#946;. In this protocol, we describe the method of immunofluorescent staining in 5&#215;FAD transgenic mouse to detect amyloid-&#946; accumulation in plaques. The process of perfusion, cryosectioning, staining and quantification will be described in detail.

Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disease that contributes to 60-70% dementia around the world. One of the hallmarks of AD undoubtedly lies ...

Full- versus Sub-Regional Quantification of Amyloid-Beta Load on Mouse Brain Sections

Extracellular accumulation of amyloid-beta (A&#946;) plaques is one of the major pathological hallmarks of Alzheimer's disease (AD), and is the target of the only FDA-approved disease-modifying treatment for AD. Accordingly, the use of transgenic mouse models that overexpress the amyloid precursor protein and thereby accumulate cerebral A&#946; plaques are widely used to model human AD in mice. Therefore, immunoassays, including enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunostaining, commonly measure the A&#946; load in brain tissues derived from AD transgenic mice. Though the methods for A&#946; detection and quantification have been well established and documented, the impact of the size of the region of interest selected in the brain tissue on A&#946; load measurements following immunostaining has not been reported. Therefore, the current protocol aimed to compare the A&#946; load measurements across the full- and sub-regions of interest using an image analysis software. The steps involved in brain tissue preparation, free-floating brain section immunostaining, imaging, and quantification of A&#946; load in full- versus sub-regions of interest are described using brain sections derived from 13-month-old APP/PS1 double transgenic male mice. The current protocol and the results provide valuable information about the impact of the size of the region of interest on A&#946;-positive area quantification, and show a strong correlation between the A&#946;-positive area obtained using the full- and sub-regions of interest analyses for brain sections derived from 13-month-old male APP/PS1 mice that show widespread A&#946; deposition.

The present protocol describes and compares the procedure to perform a full-region or sub-region of interest analysis of sagittal mouse brain sections to quantify amyloid-beta load in the APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer's disease.

마우스 뇌 절편에 대한 아밀로이드-베타 부하의 전체 대 하위 지역 정량화

Extracellular accumulation of amyloid-beta (A&#946;) plaques is one of the major pathological hallmarks of Alzheimer's disease (AD), and is the target of ...

Fabrication of Amyloid-&#946;-Secreting Alginate Microbeads for Use in Modelling Alzheimer's Disease

According to the amyloid cascade hypothesis, the earliest trigger in the development of Alzheimer&#8217;s disease (AD) is the accumulation of toxic amyloid-&#946; (A&#946;) fragments, eventually leading to the classical features of the disease: amyloid plaques, neurofibrillary tangles and synaptic and neuronal loss. The lack of relevant non-transgenic preclinical models reflective of disease progression is one of the main factors hindering the discovery of effective drug treatments. To this end, we have developed a protocol for the fabrication of alginate microbeads containing amyloid-secreting cells useful for the study of the effects of chronic A&#946; production.
Chinese hamster ovary cells previously transfected with a human APP gene, secreting A&#946; (i.e., 7PA2 cells), were used in this study. A three-dimensional (3D) in vitro model for the sustained release of A&#946; was fabricated by encapsulation of 7PA2 cells in alginate. The process was optimized to target a bead diameter of 500-600 &#956;m for further in vivo studies. Optimization of 7PA2 cell encapsulation in alginate was performed altering fabrication parameters, e.g., alginate concentration, gel flow rate, electrostatic potential, head vibration frequency, gelling solution. Levels of secreted A&#946; were analyzed over time and compared between alginate beads and standard cell culture methods (up to 96 h).
A concentration of 1.5 x 106 7PA2 cells/mL and an alginate concentration of 2% (w/v) buffered with HEPES and subsequent gelation in 0.5 M calcium chloride for 5 min were found to fabricate the most stable microbeads. Fabricated microbeads were 1) of uniform size, 2) with an average diameter of 550 &#956;m, 3) containing about 100-150 cells per microbead and 4) able to secrete A&#946;.
In conclusion, our optimized method for the production of stable alginate microbeads containing amyloid-producing 7PA2 cells might enable the modeling of important aspects of AD both in vitro and in vivo.

This protocol illustrates a cell encapsulation method by rapid physical gelation of alginate to immobilize cells. Obtained microbeads allow controlled and sustained secretion of amyloid-&#946; over time and can be used to study the effects of secreted amyloid-&#946; in in vitro and in vivo models.

알츠하이머 병 모델링에 사용하기 위한 아밀로이드-β-분비 알긴산 마이크로비드 의 제조

According to the amyloid cascade hypothesis, the earliest trigger in the development of Alzheimer&#8217;s disease (AD) is the accumulation of toxic ...

생물학

Establishing an Alzheimer's Disease Rat Model Through an Amyloid-Beta Peptide Injection

Source: Xiaoguang, W., et al. <a href="https://app.jove.com/v/56157">Establishment of a Valuable Mimic of Alzheimer&#39;s Disease in Rat Animal Model by Intracerebroventricular Injection of Composited Amyloid Beta Protein.</a> J. Vis. Exp. (2018).
This video demonstrates the procedure for injecting amyloid-beta peptides, aluminum chloride, and a neuroinflammatory growth factor, which collectively aids in toxic amyloid plaque formation in the hippocampus region. This causes memory impairment in the rat, characteristic of Alzheimer&#39;s disease.

아밀로이드-베타 펩타이드 주입을 통한 알츠하이머병 쥐 모델 구축

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

Neuropathology

Neurodegenerative Diseases

Direct Stereotaxic Brain Infusion of Amyloid-Beta Proteins for an Alzheimer's Disease Model

Source: Jean, Y. Y. et al., <a href="https://app.jove.com/v/52805">Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus.</a> J. Vis. Exp. (2015)
This video demonstrates the precise stereotaxic infusion of amyloid beta into the dentate gyrus to establish a mouse model of Alzheimer&#39;s disease. Accurate coordinate determination and controlled delivery of amyloid beta proteins result in neuronal degradation, disrupting memory processing and contributing to Alzheimer&#39;s disease development.

양적 3D

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