우리 Ing을 감사합니다. 이 연구에 사용 된 이미지 분석 소프트웨어 (ImageGrabber) 프로그래밍에 대 한 던컨 반 녹색. 이 연구는 제공에 대 한 자금 과학 연구 (grant 016.136.372)를 위한 네덜란드 조직에서 VIDI 그랜트에 의해.

모든 동물 실험 지역 동물 보호 및 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다가지고. 전체 프로토콜 hyperinsulinemic euglycemic 클램프의 끝까지 마우스 마 취의 유도에서 약 2 시간 걸립니다.
1. microsurgical 준비
<ol><li>함께 남성 마우스 14 h 후 20-25 g를 무게에서 무 통 마 취를 유도 또는 펜타닐 (0.31 밀리 그램/kg), Midazolam (6.25 mg/kg) 및 Acepromazine (6.25 mg/kg) (FMA 마 취)의 복 주사와 금식 밤새 고에 직장 온도 제어 homeothermic 난방 패드를 37 ° c.에 온도 유지</li>
	<li>작업 테이블과 여러 번 알코올 기반 솔루션을 사용 하 여 장비를 소독.</li>
	<li>10 cm 긴 폴 리 에틸렌 관 (PE-20)에 27g 바늘을 연결 하 고 4-방법은 커넥터에 튜브를 연결. 꼬리 정 맥에 바늘을 삽입 하 고 조직 접착제 젤을 사용 하 여 그것을 흥분 시키는. 이 정 맥 마 취, 포도 당, 인슐린, microbubbles의 주입에 사용 됩니다. 참고: 추가 헤 파 린 (5 U/mL)는 cannulation 동안 멸 균 식 염 수에 꼬리 정 맥 (약 10 µ L)를 프로세스 막힌된 뉼의 가능성을 줄여줍니다.</li>
	<li>수술 절차 및 실험 프로토콜을 통해 FMA 33.75 µ L/kg/min의 속도로 꼬리 정 맥 캐 뉼 러를 통해 마 취의 지속적인 정 맥 주입 하 여 마 취를 유지 합니다.</li>
	<li>복 부 쪽으로 마우스를 놓고 발 위쪽 허벅지 영역을 노출 하는 내 테이프를 사용 하 여 수정 합니다. 무릎 관절에서 고관절 (hindlimb 발 위로 향하도록)과 40-60 ° 각도의 약간의 exorotation를 사용 하 여 표준화는 허벅지의 내 전근 구획에서 근육의 스트레칭.</li>
	<li>사 타 구니와 위쪽 허벅지 영역 depilatory 크림을 사용 하 여 양측에 머리를 제거 합니다. 습 한 면봉으로 모든 느슨한 머리를 수집 합니다.</li>
	<li>아래는 stereomicroscope 마우스 놓고 10 X 16 X 확대를 사용 하 여 다음 수술 단계를 수행 합니다.</li>
	<li>피부 위 사 타 구니 인 대, 복 곡률 (그림 1) 그냥 옆에 병렬 실행을 사용 하 여 2 cm 절 개를 확인 합니다. Distally 불독 클램프 (그림 1D)를 사용 하 여 절 개의 원심 측에 견인을 적용 합니다. 이것은 필요에 따라 윈도우를 조정 하 여 파라핀 오일 (1.12에서 설명)를 개최 하는 데 도움이 도움이 됩니다.</li>
	<li>복 벽에서 지방 조직 해 부. 출혈을 방지 하려면 부드럽게 패드를 통해 직접 해 부 대신 벽에서 지방 패드를 분리 합니다. 원심 방향에서 지방 패드에 부드러운 견인 과정 (그림 1C)을 촉진 한다.</li>
	<li>대 퇴 동맥을 확인 하 고 첫 번째 주요 지점 (상 복 부 동맥 및 gracilis 동맥) 아래로 따르십시오 (그림 2). Gracilis 동맥 내 전근 매 그 너 스 근육에서 실행 되는 대 퇴 동맥의 첫 번째 주요 지점 이며 다음 gracilis 근육에 깊은 실행 됩니다. IVM gracilis 동맥 사용 될 것입니다.</li>
	<li>투명 한 깊은 근 막 근육 및 혈관을 식별 합니다. 날카로운 집게를 사용 하 여 근 막 위쪽으로 끌어 하 고는 microscissor를 사용 하 여 그것을 잘라.</li>
	<li>약 액체 파라핀의 방울 (200 µ L)로 노출된 근육을 커버 온도, 룸 (37 ° C에 미리 데워) 준비 조직 밖으로 건조 하지 않도록. 기름 방울 떨어져 누설 하지 않는 다는 것을 확인 하십시오. 불독 클램프 혈관 목욕 파라핀 기름을 보유 하는 작은 구멍을 사용 하 여 절 개의 피부 주름을 조정 합니다.</li>
	<li>Gracilis 동맥은 컴퓨터 화면에 수직 하는 방식에서 (16 배 광학 확대) 이전 보정 현미경 마우스를 놓습니다. 카메라와 컴퓨터에 현미경을 첨부 이미지 데이터 집합에서 혈관의 직경을 추출할 수 있는 분석 시스템을 기반으로. 선박의 luminal 양측 사이의 거리입니다. 지속적인 모니터링 및 동맥 직경의 측정 하는 것이 바람직합니다.</li>
	<li>줄이기 위해 빛에서 머리 전도 hindlimb에서 충분 한 거리 (최소 20 cm)에 광원을 배치 합니다.</li>
	<li>Prewarmed 초음파 변환 젤 상단 contralateral hindlimb에 적용 됩니다. 대 퇴 골 뼈의 긴 축에 수직인 초음파 프로브를 놓습니다.</li>
	<li>조심 스럽게 내 전근 근육 그룹의 횡단면 뷰를 초음파 프로브의 방향과 각도 조정 합니다. 마우스를 기준 초음파 프로브 위치 기준 및 hyperinsulinemic 측정 같은 영상 평면을 유지 안정 유지 처리.</li>
	<li>30 분 동안 안정화 마우스를 하자. Gracilis 동맥의 직경 기준 직경을 문서화 하기 전에 10 분 동안 안정 해야한다.</li>
</ol>2. 기준선 및 Hyperinsulinemic 측정
<ol><li>기준선 gracilis 동맥 직경은 IVM에 사용 되는 컴퓨터 프로그램에 의해 저장 되는 것을 확인 하십시오.</li>
	<li>Coulter 2.5 x 실험 직전 109 거품/mL의 농도에 카운터와 설명된35 및 카운트 microbubbles 사전에 준비 합니다.</li>
	<li>
으로 microbubbles 초음파 기계의 대비 모드 에서만 볼 수 있습니다, 이미지에 영향을 미치는 매개 변수를 제어 대비 데이터 수집 (에서 설명된 2.3.1)와 사용 중 지속적으로.
	<ol>
<li>초음파 기계에 다음 설정 사용: 35 데시벨;에 대비 이득 시간 이득 OFF;로 보상 선 밀도 높은; 넓은;에 초점 영역 수 전송 전원 4%; 표준; 빔 폭 송신 SV 게이트 4; 감도 1; OFF로 지 속성입니다. 관심의 영역 중심에 초점 영역의 위치 레벨.</li>
	</ol>
</li>
	<li>짧은 저장 (5 s) 클립. 이 배경 신호를 계산 하기 위해 사용 됩니다.</li>
	<li>균일 한 현 탁 액을 손으로 microbubbles 들어 있는 유리병을 흔들어. 5 µ L/min 속도로 꼬리 정 맥 캐 뉼 러를 사용 하 여 microbubbles를 일으키는 시작 합니다. Microbubbles의 균일 한 현 탁 액을 유지 하기 위해 진동 소용돌이 (분 당 200 x)에 주입 튜브를 놓습니다.</li>
	<li>정상 수준에 도달할 수 있도록 microbubbles의 지속적인 주입의 5 분을 허용 합니다. Microbubbles 주입 (그림 3A)의 시작 후 5 분 및 10 분에서 초음파 기계에 microbubble 폭 기능 (MBD)를 사용 하 여 거품의 시간-강도 곡선을 얻기와 진행. 이 두 측정의 평균 신호 초기 관류 데이터를 가져가 라.</li>
	<li>
취득 후 초기 계획 데이터 설명된34로 hyperinsulinemic euglycemic 클램프를 시작 합니다. (1.3에 배치) 꼬리 정 맥을 사용 하 여 인슐린과 포도 당 (과 마 취).
	<ol>
<li>즉, hyperinsulinemic 국가 20%의 변수 주입 60 분 사용에 대 한 지속적인 인슐린 주입 (7.5 뮤/kg/min)에 의해 따라 200kg 뮤 인슐린 bolus를 도입 하 여 유도 euglycemia 유지 하기 위해 D-포도 당.</li>
		<li>포도 당 모니터링 장치, 5 분 마다 꼬리 정 맥에서 혈액 포도 당을 평가 하 고 5 m m 가변 포도 당 주입 비율을 조정 하 여 유지. 지난 30 분 동안 평균 포도 당 주입 율을 평균 하 여 인슐린 감도 결정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gracilis 동맥의 직경은 컴퓨터 프로그램과 hyperinsulinemic euglycemic 클램프의 시작 (예: 10, 30, 60 분)에 원하는 시간 기간에서 문서화 되어 있는지 확인 합니다.</li>
	<li>25 분 후 또는 인슐린 클램프의 55 분 각각 30 / 60 분 MBV를 두 번째 (hyperinsulinemic) CEUS 측정을 시작 합니다. 2.4와 2.5에 설명 된 동일한 단계를 따릅니다. 분리 하 고 4-방법은 커넥터의 마 취 포트를 사용 하 여는 microbubbles 달 이다. Microbubbles 주입의 끝 후에 마 취 튜브를 다시 연결 합니다.</li>
	<li>IVM와 인슐린 주입의 CEUS 측정 시작 후 60 분 후, 나중에 분석 마음 빵 꾸 절차 사용 마우스에서 혈액을 철회. 이 마우스를 안락사 또한 것 이다. 조심 스럽게 gracilis 및 대 퇴 동맥 해 부 고 추가 원하는 실험에 대 한 그들을 저장 (대 한 예를 들면, 서쪽 오 점, Immunohistochemistry, 비보 전 압력 myography 실험36,37, 38).</li>
</ol>3. 오프 라인 분석

참고: IVM 및 CEUS 측정 분석 멀게 탐정에 의해 오프 라인으로 수행 되어야 한다. CEUS는 microbubbles MBD 함수를 사용 하 여 강도 높은 초음파 파도 의해 일시적으로 파괴에 의해 큰 혈관에서 미세 혈관을 구별 하는 가능성을 제공 합니다. (임의의 단위 (호주산) 측정) 더 큰 혈관에 신호 때문에 해당 선박에 microbubbles 속도 미세 혈관에 비해 빨리 복원 됩니다.
<ol><li>분석을 할 초음파 기계에는 오프 라인 워크스테이션 또는 소프트웨어를 사용 합니다.</li>
	<li>이익 (ROI)는 미세를 포함 하도록 영역을 그립니다. 더 큰 대 퇴 혈관 (그림 3A)를 포함 하는 별도 투자 수익을 그립니다.</li>
	<li>소프트웨어에 내장 된 ROI 복사 기능을 사용 하 여 배경, 기준선 및 hyperinsulinemic 측정에 대 한 큰 혈관 및 미세 혈관의 ROIs를 중복.</li>
	<li>기준선에서 배경 측정과 hyperinsulinemic 측정의 강도 신호를 뺍니다.</li>
	<li>대 퇴 혈관의 강도 신호에 의해 microcirculation의 강도 신호를 나눕니다. 기준선과 hyperinsulinemic MBVs 이제 비교할 수 있습니다.</li>
</ol>

반면 구조와 기사의 내용이 남아 작가의 전적인 책임 비주얼 Sonics Inc. 오픈 액세스 요금 적용.

우리는 동시에 인슐린의 혈관 작업 (IVM 사용) 하는 큰 동맥에 골격 근육 미세 (CEUS 사용)를 추정 하는 기법을 개발 했습니다. 성공 하 고 안정적인 측정을 위한 중요 한 단계는: 1) 올바르게 gracilis 동맥 출혈; 없이 노출 2) 동맥; 입욕 파라핀 오일의 누설 방지 3) 데 vasoactive 화합물 (인슐린) 및 대비 에이전트 (microbubbles)의 주입에 대 한 특허 정 맥 접근 (꼬리 정 맥 정 맥).
근육에 microvascular 역 기능 연구 비만 인슐린 저항14,25,,3940의 맥락에서 관심을 얻고 있다. 비만 인슐린 저항 혈관 기능에 부정적인 영향을 포함 혈관 나무의 다른 수준에 명시 됩니다. 이제부터, 다른 접근 이러한 변화를 평가 하기 위해 필요 합니다. IVM 및 CEUS 같은 마우스 기술 사용 하는 맥 관 구조의 서로 다른 수준에서 인슐린의 효과 계량 강력한 도구를 제공 합니다. IVM 직접 시각화 및 저항 동맥의 정량 분석을 허용 하 고 CEUS 근육 관류의 인슐린 유도 된 변화에 대 한 평가 대 한 있습니다.
내 전근 근육 격실을 공부 하 고 몇 가지 장점이 있습니다. 동맥 쉽게 접근할 수 있으며 절 개의 표면 특성 실험 완료 후 5.0 흡수 멸 균 봉합 사를 피부 절 개를 닫으려면 가능 하 게. 동물 주사 피하 buprenorphine 실험 후 0.1 mg/kg의 복용량에 진통제로 되었고 따뜻한 환경에서 복구할 수 있습니다. 쥐 절차를 아주 잘 용납 하 고 우리는 동물의 손실 없이 35 개 이상의 동물 공부 hindlimb의 감염을 경험. 이 후속을 가능 하 게 하거나 경도 패션에 동물을 공부 합니다. 그러나이 실험에 사용 된 동물, 1.8% 흡입 isoflurane 마 취 마스크 하지만 0.4 L/min에서 흐르는 산소와 균형을 사용 하 여 취 했다. 달리 isoflurane 마 취41,42, FMA 마 취는 주변 인슐린 감도 방해 하지 않습니다. 미래의 계획은 쥐 FMA 마 취에서 회복 하는 얼마나 잘 공부 이다.
내 전근 근육 구획 또한 유용한 다양 한 vasoactive 화합물 로컬 중재 이후 이며 다운스트림 혈관 효과 평가할 수 있다. 예를 들어 대상 조직에 이러한 화합물의 국 소 응용 프로그램은 가능한 superfusion 기법28 또는 수술 조작 및 약물 방출 수 갑을 둘러싼 혈관43의 주입을 사용 하 여. 또한, gracilis 동맥 격리 하 고 압력 myograph에서 공부 될 수 있습니다. 우리의 그룹 및 다른 압력 myograph를 사용 하 여이 동맥 비보 전36,,3738. 에 인슐린과 다른 vasoactive 화합물의 효과 문서화 하는 실질적인 실험 증거 수집
IVM 기술의 사용에 제한 근육의 수술 박람회 및 혈관을 안정화 하기 위해 파라핀 오일의 응용 프로그램입니다. 그것은 이러한 작업 동맥의 네이티브 환경 영향 여부를 명확 하지입니다. 그러나, 그림 3A gracilis 동맥 파라핀 기름에서 목욕의 초기 직경 상당히 변경 되지 않습니다 보여 줍니다. 그것은 또한 보였다 미네랄 오일 hyperoxic 조건44에서 조직을 보호 하는 산소의 확산을 성공적으로 억제 한다. 또한, 기름 동맥의 초기 직경에서 변화를 줄일 수 있습니다. 이 때문에 우리는 파라핀 오일을 사용 하 여 적어도 30 분 동안 준비 나머지 옹호. 노트의 오일-또는 석유 대신 버퍼링 된 염 분의 사용-결과 높은 변수 지름과 선박 (데이터 표시 되지 않음)의 수축. 또한, 실험의 끝에, 우리 절연 gracilis 동맥-파라핀 오일-목욕 그리고 압력 myograph에 그들의 반응성을 테스트 비보 전. 파라핀 오일 목욕 동맥 동맥 때 인슐린과 아 세 틸 콜린 (vasodilator) 자극을 제어 마찬가지로 반응 (데이터 표시 되지 않음). 일관 된 인슐린 유도 된 혈관은 명확 하 게이 연구에서 설명 IVM 프로토콜 신뢰할 수 있는 결과 생성 보여줍니다.
같은 마우스 기술을 모두 적용의 장점은 다른 하나의 기술의 본질적인 제한 중 일부를 극복: CEUS에 그대로 근육 vivo에서, MBV 추정 하지만 개별 혈관을 볼 수 없습니다; IVM 수 있습니다 개별 선박 볼 이라도 MBV를 예측할 수 없습니다. 미래의 계획은 CEUS contralateral 편이 내 전근 근육의와 조합에 cremaster 근육의 IVM 현미경 검사 법을 활용 하는 것 이다. 이 수정 (CEUS 사용) MBV (IVM 사용) 하는 모세 혈관에 직접 광 액세스의 견적을 제공할 수 있습니다. 프로토콜 추가 수정할 수 있습니다; 4-방법은 커넥터 꼬리 정 맥에 사용 되는 5-방법은 커넥터를 전환할 수 있습니다. 이것, 우리는 두 번째 CEUS 측정 (포인트 2.9에서에서 설명)을 수행 하는 동안 마 취 튜브를 분리 피할 수 있다. 우리의 경험에서 쥐 잘 현재 프로토콜을 용납. 이 프로토콜을 만들 수 있는 또 다른 수정 사용 인슐린 클램프 속도입니다. 우리는 위에 생리 여겨지는 7.5 뮤/kg/min 클램프 속도 사용 합니다. 연구에 따라 더 낮은 인슐린 클램프 비율 (예를 들어 3 무/kg/min)를 사용할 수 있습니다.
발견 설명된 프로토콜 신뢰할 수 있는 하는 동안 주의 필요로 하는 특정 제한이 있습니다. 동맥 직경의 측정은 최적의 상황이 있습니다. 준비 단계를 실행 모델과 함께 몇 가지 경험을 요구 한다. 그것은 중요 한 선박을 교란 하 고 동맥 나머지 다른 30 분 동안 하는 데 필요한 만들기 지름을 변경할 것 이다 새로운 오일으로 보충 파라핀 오일 선박 환경에서 누설 하지 않습니다. 또한, 파라핀 오일의 표면에 (1.14 프로토콜의 단계에서 설명) 빛의 반사 너무 밝고, 동맥을 볼 수 어렵습니다 가끔 했다. 이 광원 빛 파라핀 오일 표면과 동맥에 평행 하 게 각도에서 폭포를 지시에 의해 counteracted 수 있습니다.
결론적으로,이 연구에서 설명 IVM 및 CEUS 기술 조합은 맥 관 구조의 서로 다른 수준에서 인슐린의 다양 한 효과 계량 수 있습니다. IVM gracilis 동맥의 다운스트림 microvascular 관류 CEUS를 사용 하 여 측정에 기여 업스트림 혈관 변화에 대 한 통찰력을 제공 합니다. 우리는 혈관 기능을 평가 하는 더 나은 동일한 마우스에서 여러 실험적인 기술의 조합을 옹호.

혈액 포도 당 수준에 있는 상승에 대응, 췌 어디 그것은 신속 하 게 저항 동맥과 모세 혈관을 통해 골격 근 등의 대상 조직에 배포 하는 혈 류로 인슐린을 은닉 한다. 골격 근육은 식 후 포도 당 통풍 관1~ 80%에 대 한 책임. 골격 근육 interstitium에 인슐린의 배달 될 단계 인슐린의 포도 당 처리2,,34홍보 대사 행동에 대 한 제한 속도를 보였다. 10-15 분 이내 인슐린 모 세관 혈액 볼륨 (microvascular 모집) 총 혈액 흐름 증가5,6하기 전에 발생 하는 효과 증가 시킵니다. Microvascular 모집 영양분 (과 인슐린)의 교환7,8에 사용할 수 있는 내 피 표면 영역을 확장합니다. Microvascular 모집 인슐린 중재 앞 이며 변화 골격 근육의 포도 당 통풍 관8,9에 독립적으로 연결 됩니다. 맥 관 구조에 인슐린의 효과 '혈관 인슐린 감도' 되 나 되었습니다.
그것은 인슐린 중재 microvascular 모집 및 인슐린 유도 혈관 비만 주 커 쥐10,11손상 표시 되었습니다. 또한, 감소 모 세관 밀도와 마른 쥐 근육 인슐린 저항12표시합니다. 그들의 영향력 있는 작품에서 구보타 외. 장애인된 인슐린 내 피 세포에서 신호 인슐린 유도 microvascular 채용, 약 4013골격 근육에서 포도 당 통풍 관을 감소 감소 발생 보여주었다. Microvascular 기능에서이 이상이 발생 하지 않습니다만 다른 여러 조직 및 심장 등 장기에도 근육에서 망막 및 신장14,,1516. 이 예제와 다른 연구17,18,,1920 건의 인슐린의 혈관 효과 인슐린 저항 (patho) 생리학에서 중요 한 메커니즘의 합병증입니다.
인슐린 microvascular 혈액 볼륨 (MBV) 골격 근육5,6에 증가 하는 실질적인 증거는는 이런 메커니즘은 완전히 이해9하지. 피-종속 혈관 혈관 인슐린 감도21,,2223 는 맥 관 구조의 서로 다른 수준에서의 여러 측면에서 필수적 이다. 혈관 인슐린 감도 수 매니 페스트 자체 저항 동맥의 인슐린 유도 된 이완 및 사전 모 세관 arterioles 끼얹는다 microvascular 교환 표면적7,24, 증가 휴식 25.
Intravital 현미경 검사 법 (IVM) 조직 준비 마우스28 햄스터 뺨 파우치 마우스 등26,27마우스와 쥐 mesentery, 사지 허 혈의 모델의 피부 집계로 챔버 등의 다양 한 사용 되었습니다. 29. 대비 향상 된 초음파 (CEUS)은 심장30 골격 근육31에 미세 혈관의 평가 허용 하는 또 다른 이미징 기술. Rheologically 붉은 혈액 세포로 작동 하 고 혈관 루멘 내에서 유지 하는 불활성 가스 가득 microbubbles를 사용 합니다. 이러한 microbubbles 안정적인 상태를 달성 하기 위해 일정 한 속도로 정 맥 주입 됩니다. 높은 에너지 초음파 파도 다음, 파괴는 microbubbles를 사용할 수 있습니다. 관심 (ROI)의 지역에서 microbubbles' 보급 속도 흐름 속도를 (MFV)를 나타냅니다. 대비 이미지의 총 신호 강도 MBV를 나타냅니다. CEUS (인간)에 반복 해 서 수행할 수 있습니다 그리고 그것은 (바 렛 외. 에서 설명 하는 인슐린 저항 상태에서 발생 하는 혈관 장애의 이해를 전진 했다 32)입니다.
현재 연구에서 우리는 IVM와 CEUS의 동시 사용을 통해 근육 관류의 공부에 대 한 새로운 기술을 설명 합니다. 여기 우리는 마우스 hindlimb의 내 전근 구획에서 인슐린의 혈관 작업에 초점. 이 구획 지역 포도 당 통풍 관 대표 근육에서의 연구 활성화 마우스, 큰 골격 근육 그룹 중 하나입니다. 이 구획은 IVM 준비 및 동맥의 시각화는 표준화 된 수술28에 의해 쉽게 액세스할 수 합니다. 또한, 우리 자신의 그룹과 다른 나타났습니다 CEUS이 구획33,34에서 사용할 수 있습니다.
결합된 IVM CEUS 기술 하는 장점은 큰 arterioles (피드 또는 저항 동맥)와 같은 근육 그룹에 미세 (모 세관 침대)의 수준에서 인슐린의 효과 평가 하는 가능성. 또한, 두 가지 방법 동시 적용 인슐린 저항 동맥 미세 혈관의 수준에서의 임시 작업에 대 한 통찰력을 제공합니다. 와이 결합 IVM CEUS 기술은 다른 혈관 생물학 분야에서 구현할 수도 있습니다. 예를 들어 다양 한 단백질 및 endothelium에 영향을 미치는 특정 병 태 생리 조건 역할 녹아웃 모델을 사용 하 여 공부 될 수 있다. 또한, 두 기법 연구의 비용과 시간을 줄이고 여러 시간 점에서 한 마우스에서 사용할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1304">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">C57BL/6 Mice</td>
			<td style="width:251px;">Charles river</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:583px;">Mice used were bred in-house</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vevo 2100 high-resolution ultrasound system</td>
			<td>VisualSonics inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MS250 non-linear transducer</td>
			<td>VisualSonics inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vevo 2100 software</td>
			<td>VisualSonics inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ultrasound gel (Aquasonic 100, colourless)</td>
			<td>CSP Medical</td>
			<td>133-1009</td>
			<td>Ultrasound gel used to transmit the ultrasound waves</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vortex</td>
			<td>VWR international</td>
			<td>58815-234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Heating pad&#160;</td>
			<td>Pantlab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Freestyle Precision Xceed&#160;</td>
			<td>Abbott</td>
			<td></td>
			<td>To measure blood glucose level during the hyperinsulinemic-euglycemic clamp</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Insulin Novorapid</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glucose monohydrate&#160;</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1083421000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Buffered saline solution</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>152118062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PE-20 medical tubing</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>427405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Needle, 27 Gauge&#160;</td>
			<td>Becton-Dickinson &#38; Co</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Medical tape</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ultrasound probe holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Built In-house</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cotton swabs</td>
			<td style="width:251px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Multiple Equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Creme depilator</td>
			<td style="width:251px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Multiple Equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Gel tissue adhesive</td>
			<td style="width:251px;">Derma+flex</td>
			<td style="width:136px;">GA30005-2222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Infusion pump</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td colspan="2">Harvard Apparatus PHD 2000</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Small fine straight scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Needle holder</td>
			<td style="width:251px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:136px;">12500-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Straight forceps with fine tip</td>
			<td style="width:251px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:136px;">11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Camera</td>
			<td style="width:251px;">Basler</td>
			<td style="width:136px;">scA1390-17gc</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Image Grabber program</td>
			<td style="width:251px;">Built in-house</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Image acquisition system</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Timer</td>
			<td style="width:251px;">VWR</td>
			<td style="width:136px;">33501-418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Syringes, 1 ml</td>
			<td style="width:251px;">Fisher</td>
			<td style="width:136px;">14-817-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Light source, fiber-optic</td>
			<td style="width:251px;">Schott</td>
			<td style="width:136px;">KL1500</td>
			<td style="width:583px;">Ideally has adjustable arms</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Paraffin oil</td>
			<td style="width:251px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Multiple Equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Microbubbles</td>
			<td style="width:251px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine&#160;</td>
			<td style="width:251px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td style="width:136px;">850365C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">polyoxyethylene stearate&#160;</td>
			<td style="width:251px;">&#160;Sigma</td>
			<td style="width:136px;">p3440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">perfluorobutane gas&#160;</td>
			<td style="width:251px;">F2 Chemicals</td>
			<td style="width:136px;">C4F10(g)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Decon FS200 ultrasonic bath&#160;</td>
			<td style="width:251px;">Decon Ultrasonics Ltd</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:335px;">Vialmix&#160;</td>
			<td style="width:251px;">Lantheus Medical Imaging</td>
			<td style="width:136px;">515370-0810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Multisizer Coulter Counter</td>
			<td>Beckman Coulter Inc</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

combined intravital microscopy and contrast-enhanced ultrasonography of the mouse hindlimb to study insulin-induced vasodilation and muscle perfusion

그것은 인슐린의 혈관 작업 인슐린 감도 기여할 증명 되었습니다. 근육 관류에 인슐린의 효과 조절 인슐린에 민감한 조직에 영양분과 호르몬의 식 후 배달 합니다. 우리는 여기 intravital 현미경 검사 법 (IVM) 및 대비 향상 된 초음파 (CEUS) 마우스 hindlimb 동시에 시각화 근육 저항 동맥의 내 전근 구획 및 관류의의 결합에 대 한 기술을 설명 합니다 미세 vivo에서. 동시에 혈관 트리의 여러 수준에서 인슐린의 효과 평가 하는 것은 인슐린의 여러 vasoactive 효과 근육 관류 사이 관계를 공부 하는 것이 중요. 이 연구에서는 실험 쥐에서 수행 했다. 첫째, 꼬리 정 맥 정 맥 마 취, vasoactive 화합물 및 초음파 대비 에이전트 (지질 캡슐화 microbubbles)의 주입에 삽입 됩니다. 둘째, 작은 절 개를 내 전근 근육 격실의 동맥 트리를 노출 하는 사 타 구니 지역에서 이루어집니다. 초음파 프로브 횡단면에서 근육을 보려면 contralateral 상단 hindlimb에 배치 됩니다. 동맥 직경 평가 기준 매개 변수를 평가 하 고 microbubbles 근육 혈액 흐름 및 microvascular 혈액 볼륨 (MBV) 추정을 일정 한 비율로 연속적으로 들어갈 수 있습니다. 적용 전과 hyperinsulinemic euglycemic 클램프 중, 결합 IVM 및 CEUS 간선 직경, microvascular 근육 관류 및 전신 인슐린 감도의 인슐린 유도 된 변화에 대 한 평가 허용 한다. 또한, 일시적인 관계는 미세 혈관의 반응 및 인슐린 저항 동맥 측정할 수 있습니다. 그것은 또한 후속 수 쥐 경도 시간, 혈관과 전신 인슐린 감도 있는 변화를 공부 하는 귀중 한 도구를 만드는.

포도 당 주입 율 hyperinsulinemic euglycemic 클램프 (인슐린 감도) 동안은 180.21 ± 19.81 µ / k g/분 배를 안정 시키기 위해 내 전근 근육 격실에 파라핀 오일의 로컬 응용 프로그램 평균 기준 직경을 변경 하지 않은 동맥 (73.6 29.0 ± µ m 68.8 ± 17.9 µ m; 대의 p = 0.58) 하지만 변화를 줄이기 위해 도움이 동물 테스트 (그림 4A). 인슐린 일관 gracilis 동맥 직경 (14.58 ± 6.2% 증가 60 분; N = 9)는 크게 달랐다 (p < 0.0001) 식 염 수 주입으로 인 한 직경 변화에서 (-6.3 ± 4.9%; N = 6). 10 분 (10.09 ± 5.1%; 후 인슐린 유도 된 혈관은 감지할 수 p = 0.002) 30 분 후 최대 완만 용량의 약 95%를 도달 했다.
CEUS에 사용 하 여, 인슐린 일관 되 게 증가 근육 MBV (그림 5A) 33.5% (± 31.04%, N = 7; p = 0.0009) 식 염 수 주입에 비교 될 때 (-10.63 ± 27.87%, N = 6) (그림 5B). 제공 된 데이터는 근육 대 퇴 혈관을 나눈 MBV의 신호 강도. 다른 쥐 (데이터 표시 되지 않음) 그리고 다른 측정 사이 실험 변형을 줄어듭니다. 대 퇴 혈관에서 신호 강도 선형 microbubbles 순환 (그림 3C)의 농도와 일치합니다. 이론적으로 대 퇴 혈관 신호에 대 한 수정 microbubbles 사용 (그림 3D)의 농도 차이 해결 합니다. 데이터는 ± 표준 편차를 의미 하기 때문에이 섹션에 표시 됩니다.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig1.jpg"> 그림 1: 는 Hindlimb의 내 전근 구획의 외과 박람회. (A) 절 개는에서 만든 사 타 구니, 사 타 구니 인 대의 방향에 평행 하 게. (B) 부드러운 견인 원심 방향 (검은 화살표)에서 지방 패드에서 지방 패드와 복 벽 사이의 결합 조직 (*)를 발표할 예정 이다. (C)는 피부 주름 절 개의 혈관 목욕 파라핀 기름을 보유 하는 작은 구멍을 만들 불독 클램프를 사용 하 여 조정할 수 있습니다. (D) 초음파 프로브 보정된 현미경을 사용 하 여 준비 gracilis 동맥을 본 이후 contralateral 위 hindlimb에 배치 됩니다. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig2.jpg"> 그림 2: 마우스 Hindlimb intravital 현미경. 대 퇴 동맥 (A) (B) 상 복 부 동맥 및 내 전근 근육 그룹 (D) 실행 gracilis 동맥 (C) 상승을 제공 합니다. Gracilis 동맥 IVM 보정된 현미경을 사용 하 여 사용 됩니다. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig3.jpg"> 그림 3: 대비 향상 된 근육 Microvascular 혈액 볼륨 및 대 퇴 혈관 초음파의 강도 신호. (A) 비선형 대비 남성 마우스 상단 hindlimb에 microbubbles 지속적인 주입 하는 동안 디지털 이미징 플랫폼의 모드 영상 보기 오른쪽 패널: 두 ROIs MBV 근육과 대 퇴 혈관을 나타내기 위해 그려집니다. 내 전근 근육 구획의 표면 부분은 포함만 신호도 투자 수익에 깊이와 강도 감소. 왼쪽된 패널: 근육 MBV 투자 수익에서에서 시간-강도 곡선. 세로줄 높은 에너지 파 microbubbles (MBD)의 파괴를 나타냅니다. MBD, 직후 아무 대비 에이전트는 microbubbles 점차적으로 채우기 위해 시작 영상 평면에 존재. 10-15 s 후 대비 향상의 피크에 도달 했습니다. (B-D) 2.5 x 109 거품/mL의 주입 속도 두 배로 후 정상 상태 신호 도달 되었다, (5, 10, 20 µ L/min). 신호 강도에서 근육 MBV (B)와 (C) 대 퇴 혈관 paralleled 순환에서 microbubble 농도의 2 배. (D) 수정 근육 MBV 대 퇴 혈관 신호 제거 다양성 다른 microbubble 농도 의해 발생 하는 신호 강도에 대 한 (N = 9; 표준 편차 나타내는 오류 막대). <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig4.jpg"> 그림 4: Gracilis 동맥의 intravital 현미경 측정. (A) 파라핀 오일 평균 기준 직경 안정 (73.6 µ m 68.8 µ m; 대를 유지 하면서 (이 석유를 적용 한 후 파라핀 vs 17.9 µ m 없이 29.0 µ m) 다른 동물의 gracilis 동맥의 변화를 감소 p = 0.58). (B) 간선 직경 인슐린 또는 염 분 약 60 분 전후 기준에서. 인슐린 후 60 분 주입 지속적으로 열려진 gracilis 동맥 (p < 0.0001) 식 염 수 주입에 비교 될 때. (C) 인슐린 유도 된 혈관 주입 시작 후 10 분에 발생 (p = 0.002) 30 분 오류 바 대표 표준 편차;에서 최대의 95%에 도달 짝이 없는 학생의 T-검정 통계에 사용 됩니다. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/54912/54912fig5.jpg"> 그림 5: 대비 향상 된 마우스 Hindlimb의 내 전근 근육 구획의 초음파를 사용 하 여 microvascular 혈액 볼륨 측정. (A) 인슐린 인슐린 주입 시작 후 MBV 30 분에 일관 된 증가 있는 결과. (B)는 hyperinsulinemic 및 기준선 측정 (MBV 변경)의 차이 인슐린 중재 microvascular 모집으로 표시 됩니다. 인슐린 유도 33.5% (± 31.04%, p = 0.016; N = 7) 식 염 수 주입에 비해 microvascular 모집 (-10.63 ± 27.87%, N = 6). 오차 막대를 나타내는 표준 편차; 짝이 없는 학생의 T-검정 통계에 사용 됩니다. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54912/54912fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion at JoVE.

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

인슐린 유도 혈관 근육 관류를 조절 하 고 증가 microvascular 표면적 (microvascular 모집) 용 질 exchange에 사용할 수 있는 혈액과 조직 interstitium 사이. 결합된 intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 동시에 큰 배와는 미세 혈관에서 인슐린의 활동을 평가 하 여 vivo에서.

Intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 마우스 Hindlimb의 인슐린 유도 된 혈관과 근육 관류 결합

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

combined-intravital-microscopy-contrast-enhanced-ultrasonography

Research

JoVE Journal

Medicine

8.6K 조회수.  VU University Medical Center. 인슐린 유도 혈관 근육 관류를 조절 하 고 증가 microvascular 표면적 (microvascular 모집) 용 질 exchange에 사용할 수 있는 혈액과 조직 interstitium 사이. 결합된 intravital 현미경 검사 법 및 대비 향상 된 초음파 동시에 큰 배와는 미세 혈관에서 인슐린의 활동을 평가 하 여 vivo에서.

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Contrast Enhanced Vessel Imaging using MicroCT

Microscopic computed tomography (microCT) offers high-resolution volumetric imaging of the anatomy of living small animals. However, the contrast between different soft tissues and body fluids is inherently poor in micro-CT images 1. Under these circumstances, visualization of blood vessels becomes a nearly impossible task. To overcome this and to improve the visualization of blood vessels exogenous contrast agents can be used. Herein, we present a methodology for visualizing the vascular network in a rodent model. By using a long-acting aqueous colloidal polydisperse iodinated blood-pool contrast agent, eXIA 160XL, we optimized image acquisition parameters and volume-rendering techniques for finding blood vessels in live animals. Our findings suggest that, to achieve a superior contrast between bone and soft tissue from vessel, multiple-frames (at least 5-8/ frames per view), and 360-720 views (for a full 360&deg; rotation) acquisitions were mandatory. We have also demonstrated the use of a two-dimensional transfer function (where voxel color and opacity was assigned in proportion to CT value and gradient magnitude), in visualizing the anatomy and highlighting the structure of interest, the blood vessel network. This promising work lays a foundation for the qualitative and quantitative assessment of anti-angiogenesis preclinical studies using transgenic or xenograft tumor-bearing mice.

Contrast enhanced small animal vessel imaging by microCT is a rapid, cost-effective and high-throughput technique for serial in situ examination for tumor development, for analyzing the network of blood vessels that nourish them, and for following the response of tumors to preclinical therapeutic intervention(s).

MicroCT를 사용하여 대비 향상된 베셀 영상

Microscopic computed tomography (microCT) offers high-resolution volumetric imaging of the anatomy of living small animals. However, the contrast between ...

연구

의학

Noninvasive Intratracheal Intubation to Study the Pathology and Physiology of Mouse Lung

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular disease and for developing therapeutic intervention. With the increasing availability of knockout and transgenic derivatives, together with a vast amount of genetic information, mice provide one of the best models to study the molecular mechanisms underlying the pathology and physiology of lung diseases. Inhalation, intranasal instillation, intratracheal instillation, and intratracheal intubation are the most widely used techniques by a number of investigators to administer materials of interest to mouse lungs. There are pros and cons for each technique depending on the goals of a study. Here a noninvasive intratracheal intubation method that can directly deliver exogenous materials to mouse lungs is presented. This technique was applied to administer bleomycin to mouse lungs as a model to study pulmonary fibrosis.

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular disease and for developing therapeutic intervention. Here a noninvasive intratracheal intubation method that can directly deliver exogenous materials to mouse lungs is presented.

비 침습적 기관 내 삽관 마우스 폐의 병리학 및 생리학을 연구하는

The use of a model that mimics the condition of lung diseases in humans is critical for studying the pathophysiology and/or etiology of a particular ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases in children and adults. These antibodies have been used to guide diagnosis and treatment. Cell-based assays have improved the detection of antibodies in patient serum. They are based on the surface expression of brain antigens on eukaryotic cells, which are then incubated with diluted patient sera followed by fluorochrome-conjugated secondary antibodies. After washing, secondary antibody binding is then analyzed by flow cytometry. Our group has developed a high-throughput flow cytometry live cell-based assay to reliably detect antibodies against specific neurotransmitter receptors. This flow cytometry method is straight forward, quantitative, efficient, and the use of a high-throughput sampler system allows for large patient cohorts to be easily assayed in a short space of time. Additionally, this cell-based assay can be easily adapted to detect antibodies to many different antigenic targets, both from the central nervous system and periphery. Discovering additional novel antibody biomarkers will enable prompt and accurate diagnosis and improve treatment of immune-mediated disorders.

Over the recent years, live cell-based assays have been used successfully to detect antibodies against surface and conformational antigens. Here, we describe a method using high-throughput flow cytometry enabling the analysis of large cohorts of patients. Detection of novel antibodies will improve diagnosis and treatment of immune-mediated disorders.

인간 혈청에있는 N-메틸-D-아스파 라진 산염 수용체 또는 도파민 2 수용체에 대한 항체를 검출하는 높은 처리량 유동 세포 계측법 세포 기반 분석

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology rely on the injection of a suspension of glioma cells into the brain parenchyma following incision of the dura-mater. Whereas the cells have to be injected superficially to be accessible to intravital two-photon microscopy, superficial injections fail to recapitulate the physiopathological conditions. Indeed, escaping through the injection tract most tumor cells reach the extra-dural space where they expand abnormally fast in absence of mechanical constraints from the parenchyma.
Our improvements consist not only in focally implanting a glioma spheroid rather than injecting a suspension of glioma cells in the superficial layers of the cerebral cortex but also in clogging the injection site by a cross-linked dextran gel hemi-bead that is glued to the surrounding parenchyma and sealed to dura-mater with cyanoacrylate. Altogether these measures enforce the physiological expansion and infiltration of the tumor cells inside the brain parenchyma. Craniotomy was finally closed with a glass window cemented to the skull to allow chronic imaging over weeks in absence of scar tissue development.
Taking advantage of fluorescent transgenic animals grafted with fluorescent tumor cells we have shown that the dynamics of interactions occurring between glioma cells, neurons (e.g. Thy1-CFP mice) and vasculature (highlighted by an intravenous injection of a fluorescent dye) can be visualized by intravital two-photon microscopy during the progression of the disease.
The possibility to image a tumor at microscopic resolution in a minimally compromised cerebral environment represents an improvement of current GBM animal models which should benefit the field of neuro-oncology and drug testing.

We have established a cortical orthotopic glioblastoma model in mice for intravital two-photon microscopy that recapitulates the biophysical constraints normally at play during the growth of the tumor. A chronic glass window replacing the skull above the tumor enables the follow-up of the tumor progression over time by two-photon microscopy.

소성을 Glioblastoma의 마우스 모델은 뇌 실질 물리적 제약 조건을 유지하고의 intravital 두 광자 현미경에 적합

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe respiratory motion artifact in the abdominal area. Orthotopic tumor models offer advantages over subcutaneous ones, because those can reflect the primary tumor microenvironment affecting blood supply, neovascularization, and tumor cell invasion. We have recently established a protocol of DCE-MRI of orthotopic pancreatic tumor xenografts in mouse models by securing tumors with an orthogonally bent plastic board to prevent motion transfer from the chest region during imaging. The pressure by this board was localized on the abdominal area, and has not resulted in respiratory difficulty of the animals. This article demonstrates the detailed procedure of orthotopic pancreatic tumor modeling using small animals and DCE-MRI of the tumor xenografts. Quantification method of pharmacokinetic parameters in DCE-MRI is also introduced. The procedure described in this article will assist investigators to apply DCE-MRI for orthotopic gastrointestinal cancer mouse models.

The goal of this protocol is to apply dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) for orthotopic pancreatic tumor xenografts in mice. DCE-MRI is a non-invasive method to analyze microvasculature in a target tissue, and useful to assess vascular response in a tumor following a novel therapy.

동소 이식 췌장 암 마우스 모델의 동적 대비 강화 된 자기 공명 영상

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions between cellular and non-cellular blood components during thrombus formation, reliable studies of the physiology and pathophysiology of thrombosis can only be performed in vivo. Therefore, this article presents an ear model in hairless mice and focuses on the in vivo analysis of microcirculation, thrombus formation, and thrombus evolution. By using intravital fluorescence microscopy and the intravenous (iv) application of the respective fluorescent dyes, a repetitive analysis of microcirculation in the auricle can easily be performed, without the need for surgical preparation. Furthermore, this model can be adapted for in vivo studies of different issues, including wound healing, reperfusion injury, or angiogenesis. In summary, the ear of hairless mice is an ideal model for the in vivo study of skin microcirculation in physiological or pathophysiological conditions and for the evaluation of its reaction to different systemic or topical treatments.

The ear model of the hairless SKH1-Hrhr mouse enables intravital fluorescence microscopy of microcirculation and phototoxic thrombus induction without prior surgical preparation in the examined microvascular bed. Therefore, the ear of the hairless mouse is an excellent in vivo model to study the complex interactions during microvascular thrombus formation, thrombus evolution, and thrombolysis.

털이 마우스의 귓불에서 생체 내에 현미경 및 혈전 유도

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include supporting mastication and deglutition, as well as taste-sensing and phonetics. Accordingly, the strength and volume of the tongue can impact the ability of vertebrates to accomplish basic activities such as feeding, communicating, and breathing. Human patients with sleep apnea have enlarged tongues, characterized by reduced muscle tone and increased intramuscular fat that can be visualized and quantified by magnetic resonance imaging (MRI). The abilities to measure force generation and viscoelastic properties of the tongue constitute important tools for obtaining functional information to correlate with imaging data. Here, we present techniques for measuring tongue force production in anesthetized Zucker rats via electrical stimulation of the hypoglossal nerves and for determining the viscoelastic properties of the tongue by applying passive Lissajous force/deformation curves.

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

We describe a surgical procedure in an anesthetized rat model for determining the muscle tone and viscoelastic properties of the tongue. The procedure involves specific stimulation of the hypoglossal nerves and application of passive Lissajous force/deformation curves to the muscle.

혀의 기계적 및 점탄성 특성에 대한 생체 내 평가

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include ...

Ultrasonography in Experimental Reproductive Investigations on Rats

With the development of assisted reproductive technology and the ethical limitations of research on humans, rat animal models have been widely used in reproductive medicine. In the past, the study of reproductive system development in rodents has been based on one-time histological examination of excised tissues. Recently, with the development of high-resolution transabdominal ultrasound, high-quality sonography can now be performed to evaluate the reproductive organs of rats, allowing a new method for studying the reproductive system. Images were obtained using a high-resolution ultrasonographic system. Gynecological ultrasonography was performed on 28 eight-week-old non-pregnant rats and 5 pregnant Sprague-Dawley rats. We describe how to recognize organs of the reproductive system and associated structures in typical views during different phases of the estrus cycle. Color flow Doppler was used to measure uterine artery blood flow and evaluate uterine blood flow pattern changes during different stages of pregnancy. We have demonstrated that ultrasound exploration is a useful method for evaluating changes in internal reproductive organs. Its use raises the possibility of conducting additional experiments, including medical or surgical procedures, and provides the ability to monitor sonographic changes to internal organs without sacrificing animals.

This manuscript describes the utility of ultrasound performed on female rats to design experimental models for reproductive and gynecological investigation. A step-by-step explanation of how to perform ultrasonographic evaluation is shown.

초음파에 쥐 실험 생식 조사에

With the development of assisted reproductive technology and the ethical limitations of research on humans, rat animal models have been widely used in ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Observational Study Protocol for Repeated Clinical Examination and Critical Care Ultrasonography Within the Simple Intensive Care Studies

Longitudinal evaluations of critically ill patients by combinations of clinical examination, biochemical analysis and critical care ultrasonography (CCUS) may detect adverse events of interventions such as fluid overload at an early stage. The Simple Intensive Care Studies (SICS) is a research line that focuses on the prognostic and diagnostic value of combinations of clinical variables.
The SICS-I specifically focused on the use of clinical variables obtained within 24 h of acute admission for prediction of cardiac output (CO) and mortality. Its sequel, SICS-II, focuses on repeated evaluations during ICU admission. The first clinical examination by trained researchers is performed within 3 h after admission consisting of physical examination and educated guessing. The second clinical examination is performed within 24 h after admission and includes physical examination and educated guessing, biochemical analysis and CCUS assessments of heart, lungs, inferior vena cava (IVC) and kidney. This evaluation is repeated at days 3 and 5 after admission. CCUS images are validated by an independent expert, and all data is registered in an online secured database. Follow-up at 90 days includes registration of complications and survival status according to patient&#39;s medical charts and the municipal person registry. The primary focus of SICS-II is the association between venous congestion and organ dysfunction.
The purpose of publishing this protocol is to provide details on the structure and methods of this on-going prospective observational cohort study allowing answering multiple research questions. The design of the data collection of combined clinical examination and CCUS assessments in critically ill patients are explicated. The SICS-II is open for other centers to participate and is open for other research questions that can be answered with our data.

<meta charset="utf8"></head><body>단순 집중 치료 연구 내에서 반복 임상 검사 및 중환자 치료 초음파 검사를 위한 관찰 연구 프로토콜

Structured protocols are necessary to provide answers on research questions in critically ill patients. The Simple Intensive Care Studies (SICS) provides an infrastructure for repeated measurements in critically ill patients including clinical examination, biochemical analysis and ultrasonography. SICS projects have specific focus but the structure is flexible to other investigations.

단순 집중 치료 연구 내에서 반복 임상 검사 및 중환자 치료 초음파 검사를 위한 관찰 연구 프로토콜

Longitudinal evaluations of critically ill patients by combinations of clinical examination, biochemical analysis and critical care ultrasonography (CCUS) ...