저자는 어떤 승인이 없습니다.

내피 전구 세포의 분리를위한 혈액은 지역 윤리위원회에 따라 동의 후 건강한 자원자로부터 얻은 것입니다. 마이그레이션 분석에 사용 된 혈청 샘플 심폐 (CPB)를 이용하여 종래의 심장 수술을받은 환자로부터 얻었다. 제외 기준은 비상 운영, 알려진 또는 의심되는 임신했다 18 년 이상 이하 연령, 동의를 얻기 위해 실패를 patient`s. 혈청 샘플은 임상 측정 루틴 (즉시 수술 전 즉시 심근 재관류 / 대동맥의 개시 후) 후속 최종 분석까지 -80 ℃에서 보관 이외에 그려졌다. 제도적 검토위원회 (윤리위원회, RWTH 아헨 대학)이 연구를 승인했다. 환자는 68.6 년의 평균 연령 81.7 kg의 평균 중량을 나타내었다. 기존 질환 포함 고혈압 (65 %), 만성 폐 질환 (19 %), 추가 심장 arteriopathy (16 %), 뇌 기능 장애 (6 %), 불안 정형 협심증 (3 %), 최근 심근 경색 (90 (D) 내에 28 %), 만성 신장 질환 (14 %), 간 질환 (2 %), 당뇨병 (34 %). T75 플라스크 1. 코팅 : <ol><li> 5 ㎖의 피브로넥틴 용액을 T75 플라스크 당 (15ml의 초순수로 희석하여 1 mg의 인간 피브로넥틴)을 준비한다. </li><li> T75 플라스크에 솔루션을 추가하고 물이 증발 될 때까지 기다립니다. 증발에 의한 분리 공정 동안 불필요한 중단을 방지하기 위해, 사전에이 프로세스를 수행하는 (예를 들면 밤새) 실온에서. 이 솔루션은 4.44 μg의 피브로넥틴 / ㎠를 제공합니다. </li><li> 제조자의 성장 인자로 보충 기저 MV2 매체를 보충하여 내피 세포 성장 배지 MV2를 준비한다. </li></ol> 60 mL의 혈액에서 내피 전구 세포 (내피 전구 세포) 2. 절연 : 참고 : CD34 양성 선택 칵테일 A와ND 자성 비드는 제조자가 제공되는 농도가없는, 선택지의 선택 세트에서 상업적으로 이용 가능하다. 그러나, 항체는 약 100 μL를 5 × 108 개의 셀을 처리하기에 충분하다. 자기 구슬이 물에 희석, 덱스 트란이 코팅 된 약 5,000 배 더 작은 다른 시중에서 판매하는 구슬에 비교했다. 자세한 내용은 제조자의 지침을 참조하십시오. <ol><li> 칼슘 -mg 2 + - 무료 PBS로 1 : (또는 항응고제 제외) 혈액 1 섞는다. </li><li> 50 ㎖ 튜브 당 밀도 구배 용액 15 mL를 넣고. 자세한 내용은 제조자의 지침을 참조하십시오. </li><li> 천천히 밀도 구배 용액의 상부에 희석 된 혈액 층을 포함한다. </li><li> 원심 분리기 샘플 속도가 느린 가속 및 제동없이 30 분 동안 2,500 XG에. </li><li> 조심스럽게 멸균 플라스틱 피펫을 사용하여 모든 관 (그림 1)의 버피 코트 층을 수집하고 다른 튜브에 넣어.밀도 구배 솔루션의 컬렉션을 피하십시오. 예상 PBMC 수율은 약 3-4 × 10 6 세포 / mL의 혈액이다. </li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55192/55192fig1.jpg" /> 그림 1 : 피콜 솔루션에 Bbuffy 코트의 밀도 구배 원심 분리. 밀도 구배 용액에 30 분 동안 2,500 XG에서 밀도 구배 원심 분리의 결과가 도시되어있다. 적혈구 및 과립구 (적색), 단핵 세포 분획 (백색 층) 플라즈마 (옐로우), 및 밀도 구배 용액 (백탁)이다 묘사했다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55192/55192fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol start="6"><li> PBS 중 적어도 3 볼륨으로 말초 혈액 단핵 세포 분획을 희석하고 혼합한다. 200 x g에서 15 분 동안 실온에서 원심 분리한다. </li><li> 두 번 단계를 반복 2.6. &lt;/ 리&gt; <li> 5 ㎖ MV2 배지 상등액과 세포 펠렛 재현 탁 대기음. </li><li> 사용 버피 코트 당 (5 × 10 8 셀을 처리하기위한 충분한) 인간 CD34 항체의 100 μL를 추가하고 5 % CO 2와 37 ° C에서 15 분 동안 회전합니다. </li><li> 사용 버피 코트 당 덱스 트란 코팅 자기 구슬 50 μL를 추가하고 5 % CO 2와 37 ° C에서 10 분 동안 회전합니다. </li><li> 부화 후, 각각의 튜브에 3 mL를 최대 FACS 튜브에 정지를 전송합니다. 더 많은 양의 자석으로 허용되지 않습니다. </li><li> 자석 (들)에 FACS 튜브 (들)을 넣고 5 분 동안 기다립니다. </li><li> 자석 밖으로 FACS 튜브를 당기없이 상층 액을 버린다. </li><li> 자석의 외부에 3 ㎖ MV2 매체 각각 FACS 튜브에 세포를 재현 탁. </li><li> 반복 두 번 2.12-2.14 단계를 반복합니다. </li><li> 자석 밖으로 FACS 튜브를 당겨 3 ㎖ MV2 배지에서 세포를 재현 탁. </li><li> 프레 코트 T75의 F에 세포 현탁액을 전송lasks 및 플라스크 당 17 mL의 MV2 매체를 추가 할 수 있습니다. 주 : 매체 3 일 후 변경해야합니다. 일주 후, 세포는 스핀들 같은 구조 (그림 2)를 표시하고 사용할 준비가 된 것입니다. 분리의 간과를 들어 그림 3을 참조하십시오. </li></ol><img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/55192/55192fig2.jpg" /> 그림 2 : 격리 된 내피 전구 세포의 현미경 이미지. 분리에 앞서 T75 플라스크에서 격리 된 초기 내피 전구 세포의 대표 이미지가 보여진다. 겉보기은 내피 전구 세포의 스핀들 형 구조이다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55192/55192fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/55192/55192fig3.jpg" /> 그림 3 : 흐름도는 EPC 격리 절차를 표시합니다. 도시는 방식 쇼EPC를 분리 프로토콜의 단일 단계를 보내고. 자세한 프로토콜에 대한 프로토콜 섹션의 제 2 장을 참조하십시오. 3. 마이그레이션 분석 <ol><li> T75 플라스크에 내피 전구 세포에서 매체를 제거합니다. </li><li> 조심스럽게 흔들어 5 mL의 PBS로 세척. </li><li> PBS를 제거하고 5 ㎖ 상업 세포 분리 솔루션을 추가 할 수 있습니다. 세포가 분리 될 때까지 (현미경으로 확인) 기다립니다. 조심스럽게 플라스크의 바닥을 탭하여 분리를 가속화합니다. </li><li> 세포가 분리되는 경우, 신속 MV2 완전 배지 5 ㎖를 추가하여 다른 튜브에 세포 현탁액을 전송. </li><li> 5 분 동안 2,000 XG에 원심 분리기. </li><li> 5 분 동안 2000 × g으로 다시 50-10 ㎖의 PBS에서 세포를 재현 탁 및 원심 분리기. </li><li> 단계를 반복 3.6. </li><li> MV2 결핍 배지에서 세포 펠릿 (윤회 웰 당 75 μL가 필요한 50,000 세포)에 재현 탁. 주 : 필요한 이동 시스템은 세포 형태 및 분석에 따라 달라진다. 사랑하는 있습니다<html> erent 기공 직경 및 판 크기 (우물의 수). 내피 전구 96 웰 시스템에 5 ㎛의 공극 크기가 최적이다. </li><li> 하부 챔버 (그림 4)에 : 혈청 샘플의 235 μL를 추가하여 마이그레이션 판을 준비 (MV2 굶어 매체에 5 혈청 1 희석). </li></ol><img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/55192/55192fig4.jpg" /> 그림 4 : 수정 된 보이든 상공 회의소에서 마이그레이션 분석. 수정 된 보이든 챔버의 일반적인 설계가 도시. 세포 배양 인서트 (= 상부 챔버) 진한 청색으로 표시되고, 상기 하부 챔버 내에 삽입된다. 이 인서트의 바닥 (그러나 벽)은 공극을 포함하는 필터 시스템을 나타낸다. (a)는 시점 제로 설정을 표시합니다. (b) 선택된 시점 후에, 세포를 자극쪽으로 필터를 통해 이주된다.fig4large.jpg &quot;대상 =&quot;_ 빈 &quot;&gt;이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <ol start="10"><li> 얼마 전에 세포 용액을 첨가 삽입을 추가합니다. </li><li> 상부 챔버 내로 세포 용액 75 μL (= 50,000 세포)를 추가한다. </li><li> 내피 전구 세포 2 (이동 시간은 세포 유형 및 시스템에 따라 다름) 37 ° C에서 3 시간 5 % CO에 대한 마이그레이션 할 수 있습니다. <ol><li> 혈청 자동 형광 유물을 방지하기 위해, 반 자동화 된 소프트웨어 &quot;ImageJ에&quot;를 사용하여 세포를 현미경으로 잘 사진을 복용하여 마이그레이션 세포를 정량화 계산합니다. </li></ol></li><li> 상부 챔버 (모든 이주되지 않은 세포를 포함)를 제거합니다. </li><li> (1,000 1 희석) 훽스트 염료를 포함, 70 μL 3.6 % 파라 포름 알데히드 용액을 추가합니다. 플레이트를 37 ℃ 및 5 % CO 2에서 밤새 저장 될 수있다. </li><li> 1 ~ 2 분 동안 2,000 XG에서 같은 초점면에 모든 세포를 얻기 위해 곧 접시를 원심 분리기. </li><li> w 당 5 사진을 촬영엘 (도 5 및 6) 100 배 배율. </li></ol><img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/55192/55192fig5.jpg" /> 그림 5 : 촬영 한 사진의 위치를 표시 제도. 계획은 잘 관련 마이그레이션 세포의 판정에 필요한 다섯 찍은 사진의 위치를 ​​나타낸다. 사진은 세포를 계산하고 잘 모든에 대한 평균 값을 계산 가져옵니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55192/55192fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/55192/55192fig6.jpg" /> 그림 6 : 셀 정량화에 대한 현미경 이미지. 세포 정량 찍은 대표적인 이미지는 보여진다. 세포를 염색 USI을 고정시켰다3.6 % 파라 포름 알데히드에 NG 훽스트 (Hoechst) 염료. 점은 고정 내피 전구 세포를 염색 나타냅니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55192/55192fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol start="17"><li> 건강의 국립 연구소에 의해 반 자동화 된 소프트웨어 &quot;ImageJ에&quot;를 사용하여 마이그레이션 된 세포를 계산합니다. </li></ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

본 연구의 첫 번째 부분은 심장 수술 환자의 혈액의 포괄적 인 평가를 가능하게 건강한 지원자의 말초 혈액에서 인간의 내피 전구 세포의 분리를 포함했다. 따라서, 밀도 구배 원심 분리 혈장, 적혈구 및 과립구로부터 PBMC의 분획을 분리 하였다. 오염 혈소판의 대부분을 제거하려면,이 세포 분획 짧은 하였다 느린 세척, (30)를 29 단계를 반복합니다. 다음...

<html> 내피 전구 세포 (내피 전구 세포)는 인간의 혈액 순환 및이 내피 세포로 분화 할 수있는 능력을 가지고있다. 이들은 혈관 형성에 참여하고 다양한 방법으로 3,4- 염증 및 허혈 / 재관류 (I / R) 손상에 의한 피해를 최소화 할 수있다. 예를 들어, 내피 전구 세포는 카탈라아제, 글루타티온 과산화 망간 슈퍼 옥사이드 dismutases (MnSOD) 5와 같은 세포 내 항산화 효소의 높은 수준을 보여줍니다. 산화 적 스트레스에 대한 높은 저항은 내피 전구 세포가 허혈 손상 6 후 상승 된 활성 산소 종 (ROS)와 미세 환경에서 작동 할 수 있습니다. 이전의 연구는 또한 내피 전구 세포의 개수는 혈관 내피 전구 세포 수리하고 순환 수가 감소는 심혈 관계 사건 (7)의 발생을 예측하는 것이 상관 될 수 있음을 지적클래스 = &quot;외부 참조&quot;&gt; 8. 그러나, EPC 명확한 정의은 아직 발견하지 못했다. 지금까지가 내피 전구 세포에 대한 특정한 세포 표면 마커 또는 일관성 표현형이 없으며 이들 세포는 말초 혈액 (9)은 매우 드물다. 인간 EPC는 손상된 내피 새로운 혈관 구조의 재구성에 기여하는 기능과 순환 셀로서 고려되어야한다. 단리 및 내피 전구 세포를 특징 짓는 한 가지 방법은, 피브로넥틴의 밀착성을 통해서이다. 따라서, 이들 전지의 용량은 실시 예 3, 10, 11, 1, 콜라겐을 입력 비해 코팅 요리 피브로넥틴 우수한 밀착성을 표시하는 데 사용된다. 그러나, 다른 임의의 이전 또는 추가의 정제 단계없이 피브로넥틴 코팅 접시에 단핵구 도금하는 골수 전구 세포, 단핵구 및 T 림프구를 포함 하나 콜로니 리드 것으로2, 13, 14. 또한,이 경우, 혈소판 단핵 세포 (MNC) 부분을 오염시킬 수 있으며 따라서 임의의 부착 세포 (15) 세포막 단백질을 옮긴다. 시험 관내 접착 분석을 통해 특성화 이외에 다른 세포 표면 마커의 조합은 EPC 간주 세포 유형을 서술하기 위해 사용된다. 이 때, 피브로넥틴 매개을 접착 한 후, 세포는 내피 세포와 같은 특성에 관하여 분석된다. 이 과정에서, 두 개의 내피 세포 - 관련 마커 아세틸 - 저밀도 지단백질 (acLDL) 및 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR-2, KDR)에 역할을한다. 내피 세포와 대 식세포는 특히 &quot;폐품 세포 경로&quot;(16)라고하는 과정에서 acLDL을 차지하는 것으로 나타났다. 또 다른 마커 단백질은 내피 세포의 주 VEGF 수용체로 KDR입니다세포 17. 일반 내피 전구 세포는 혈관 내피 성장 인자 및 소 태아 혈청이 보충 된 배지에서 배양 그러나, 마크로파지 것은 또한 실수, 전시 내피 형 마커 프로필 격리되었을 수있는 것이 가능하다. 이전에 도시 된 바와 같이, 내피 에어컨 배지에서 배양하면, 대 식세포는 &quot;내피 별&quot;단백질 18 표현한다. 일반적으로, 혈액에서 발견 될 수 있거나 시험 관내에서 배양 이상의 아형 내의 내피 전구 세포의 두 가지 종류가있다. 늦게 가지 내피 전구 세포 (후기 내피 전구 세포)를 배양 2-3 주 후에 나타납니다. 이러한 세포는 인간 제대 정맥 내피 세포의 단층으로 빠른 통합되어 모세관 튜브 (19)를 형성 할 수있다. 또한, 혈관 내피 성장으로 제공하는 혈관 신생 분자를 통해 더 수동적 인 방법으로 일주일 정도 및 행위의 혈액 순환 &quot;초기 내피 전구 세포 소위&quot;인자 (VEGF), 또는 CXCL8 19. 관상 동맥 질환 (CAD) 환자들은 CAD (20)가없는 대조군에 비해 초기 내피 전구 세포의 매우 낮은 양을 보여 주었다. 흥미롭게도, 같은 그룹은 대조군에 비해 늦은 내피 전구 세포의보다 많은 양을 보였다. 또 다른 연구는 초기 내피 전구 세포가 분비 방식으로 6 산화 조건에서 세포 사멸에서 차별화 된 내피 전구 세포를 보호하는 것으로 나타났다. 따라서, 초기 내피 전구 세포는 말초 혈액 내에서 자동 또는 분비 방식으로 다른 세포의 이동을 통해 관련 보호 효과를 제공 할 수 있습니다. 이 프로토콜은 먼저 인간의 말초 혈액에서 PBMC-부분을 분리하고 이후에 원치 않는 세포에서이 세포 현탁액을 취소 할 PBMC-부분에서 CD34 + 세포를 분리하여 초기 내피 전구 세포를 정화하는 방법을 설명합니다. CD34 인간 조혈 줄기 세포 (9)의 분리에 사용되는 마커 인 </sup&gt;. 이후, CD34 + 세포가 피브로넥틴 코팅 조직 배양 표면에 배양한다. 사흘, 배지함으로써 모든 비 부착 세포를 잃고, 변경된다. 마지막으로, 고립 된 내피 전구 세포는 acLDL의 흡수 및 형광 활성화 된 셀 정렬 (FACS)를 사용하여 내피 세포 마커로 KDR의 존재를 확인하기 위해 염색된다. 추가적인 마커로서, 우리는 또한 내피 세포에서 발생 혈소판 내피 세포 부착 분자 (PECAM-1, CD31)을 분석 하였다. 내피 전구 세포의 강화 된 채용에 의해 손상되거나으로 경색 심근 조직의 복원은 심혈관 질환에 집중적으로 조사 치료 전략에 속한다. 그러나, 임상으로 실험 결과의 번역은 다양한 병태 생리 학적 조건에서 인체의 복잡한 세포의 상호 작용 주어, 여전히 도전이다. 또한, 심근 난 / R 부상 다양한 사이토 카인, 호르몬과 성장 FAC의 과도한 분비를 유발<html> 혈관 형성 (13)의 영역에 내피 전구 세포의 유도를 제어 TORS. 이미 도시 된 바와 같이, CXCL8, 간질 세포 유래 인자 1α (SDF-1α, CXCL12)은 VEGF 및 대 식세포 이동 억제 인자 (MIF)를 크게 심근 I / R 손상 한 다음 혈청 샘플에서 증가된다. 이들 요소 중에서, MIF 주로 친 염증 특성을 갖는다면 발현 케모카인과 같은 사이토 카인이다. 역사적 이름 달리 MIF는 다양한 세포 유형 1 (21, 22)에 대한 진정한 케모카인으로 작용 친 이동성 기능을 갖는다. MIF 매개 세포 채용 프로세스 MIF는 결합 및 비 - 동족 방법 (21)에 활성화 케모카인 수용체 CXCR4 및 CXCR2에 연결되어있다. 참고로, 내피 전구 세포는 또한 저산소 조건 하에서 상향 조정되고 그 표면에 수용체를 모두 표현엉덩이 = &quot;외부 참조&quot;&gt; 23, 24. 또한, 축적 증거는 MIF 심장 22, 25, 26의 I / R 손상시 전체 심장 보호 효과가 있음을 시사한다. 이러한 맥락에서, 상기 MIF는 손상된 심근 (27)의 제한된 복구 메커니즘을 고려하면, 특히 관련이있다 저산소 스트레스 동안의 혈관 신생을 지원할 수 있음을 보여왔다. 전 임상 마우스 모델에서 이전 체외 연구와 실험은 내피 전구 세포 모집 4 MIF의 역할에 대해 첫 번째 증거를 제공했다. 참고로, MIF는 허혈성 사이트 (28) 내에서 내피 전구 세포 모집 중에 해제 될 수 내피 전구 세포의 저명한화물 단백질이다. 그러나, 다른 (혈관) 혈청 사이토 카인에 비해 특히 임상에서 연구하기 어려운 남아있다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="803">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:185px;">Biochrom AG</td>
			<td style="width:155px;">L7117</td>
			<td style="width:207px;">Coating of T-75 flasks</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Aqua ad iniectabilia</td>
			<td style="width:185px;">Fresenius Kabi</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Endothelial cell growth medium MV2</td>
			<td style="width:185px;">Promo Cell</td>
			<td style="width:155px;">C-22221</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Endothelial cell growth medium MV2 SupplementMix</td>
			<td style="width:185px;">Promo Cell</td>
			<td style="width:155px;">C-39226</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">Ficoll-Paque plus</td>
			<td style="width:185px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:155px;">17-1440-03</td>
			<td style="width:207px;">Density centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">EasySep human CD34 positive Selection Kit</td>
			<td style="width:185px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:155px;">18056</td>
			<td style="width:207px;">Isolation of CD34+ cells</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">EasySep magnet</td>
			<td style="width:185px;">Stemcell Technologies</td>
			<td style="width:155px;">18000</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Accutase</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">A6964-100ML</td>
			<td style="width:207px;">Detachment of cells</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Corning HTS transwell 96 well permeable supports</td>
			<td style="width:185px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:155px;">CLS3387-8EA</td>
			<td style="width:207px;">Migration system</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Hoechst solution</td>
			<td style="width:185px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:155px;">33342</td>
			<td style="width:207px;">Staining of migrated cells</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">ImageJ</td>
			<td style="width:185px;">National institutes of health</td>
			<td style="width:155px;">xxx</td>
			<td style="width:207px;">Counting of migrated cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of endothelial progenitor cells from healthy volunteers and their migratory potential influenced by serum samples after cardiac surgery

내피 전구 세포 (내피 전구 세포)은 저산소증과 같은 병리 적 조건에서 골수로부터 모집 결정적 허혈성 조직의 혈관 신생에 관여한다. 내피 전구 세포의 기원, 분류 및 특성은 복잡; 에도 불구하고, 내피 전구 세포의 두 눈에 띄는 하위 유형이 설립되었습니다 소위 &quot;초&quot;내피 전구 세포는 늦게-가지 내피 전구 세포 (후기 내피 전구 세포) (이후로-초기 내피 전구 세포 함). 이들은 생물학적 특성에 의해뿐만 아니라, 체외 배양시 그 모양에 따라 분류 할 수있다. &quot;초기&quot;내피 전구 세포는 EC-특정 미디어의 말초 혈액 유래 단핵구 세포의 배양 후보다 일주일에 표시되지만, 늦은 가지 내피 전구 세포 2 ~ 3 주 후에 찾을 수 있습니다. 늦게 가지 내피 전구 세포는 &quot;초기&quot;내피 전구 세포가 Endogen 사 등 다양한 혈관 신생 인자를 표현하는 반면, 직접 주로 성숙 내피 세포로 분화 할 수있는 능력을 통해, 혈관 신생에 관여하는 것으로 인정 받고 있습니다OU에화물이 분비 방식으로 혈관 신생을 촉진합니다. 심근 허혈 / 재관류 (I / R) 동안, 다양한 요소가 혈관 형성의 영역에 내피 전구 세포의 원점 복귀를 제어 할 수 있습니다. 대 식세포 이동 억제 인자 (MIF)은 케 모킨과 같은 염증성 사이토킨 및 보편적으로 발현하고 최근 생리적 농도 1 내피 전구 세포 이주 같은 주요 조절 기능하도록 설명 하였다. 흥미롭게 MIF는 세포 풀에 저장되고 신속하게 여러 자극 후의 혈류 내로 (예를 들면, 심근 경색)을 해제 할 수있다. 이 프로토콜은 혈청 샘플에 대한 시험 관내 마이그레이션 분석에 사용 피브로넥틴 - 코팅 된 플레이트에 내피 성장 인자가 포함 된 배지에서 이후의 문화와 CD34 양성 선택에 따라 성인의 말초 혈액에서 초기 내피 전구 세포의 신뢰성 분리 및 배양하는 방법을 설명합니다 심장 수술 환자. 또한,다른 잘 알려진 혈관 신생 촉진 사이토 카인에 비해 내피 전구 세포의 화학 주성에 MIF의 철새 영향이 설명된다.

격리 된 내피 전구 세포의 특성 먼저 acLDL의 흡수가 확인되었다뿐만 아니라 단리 된 세포 집단의 표면에 KDR의 발현, 및 CD31. 도 7a에서 보듯이, 고립 된 내피 전구 세포의 85.1 %가 acLDL의 흡수를 보여 CD31를 표명했다. 두 마커에 대한 부정적인 작은 인구있을 것 같습니다 있지만,도 7B 및 7C는 상?...

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Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery

내피 전구 세포 (내피 전구 세포는) 결정적으로 허혈성 조직의 혈관 신생에 관여한다. 이 방법은 말초 혈액에서 인간 내피 전구 세포의 분리뿐만 아니라, 심장 수술 환자의 혈청 샘플에 대한 그들의 이동성 전위의 식별을 설명한다.

심장 수술 후 혈청 샘플의 영향을 건강한 자원 봉사자와 그들의 철새 잠재력에서 내피 전구 세포의 분리

Endothelial progenitor cells (EPCs) are recruited from the bone marrow under pathological conditions like hypoxia and are crucially involved in the ...

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Medicine

10.9K 조회수.  University Hospital Aachen.  내피 전구 세포 (내피 전구 세포는) 결정적으로 허혈성 조직의 혈관 신생에 관여한다. 이 방법은 말초 혈액에서 인간 내피 전구 세포의 분리뿐만 아니라, 심장 수술 환자의 혈청 샘플에 대한 그들의 이동성 전위의 식별을 설명한다. 

비디오: Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human pulp-derived stem cells (hDPSCs) possess high proliferation potential with multi-lineage differentiation capacity compare to the ordinary source of adult stem cells1-8; therefore, hDPSCs could be the good candidates for autologous transplantation in tissue engineering and regenerative medicine. Along with these benefits, possessing the mesenchymal stem cells (MSC) features, such as immunolodulatory effect, make hDPSCs more valuable, even in the case of allograft transplantation6,9,10. Therefore, the primary step for using this source of stem cells is to select the best protocol for isolating hDPSCs from pulp tissue. In order to achieve this goal, it is crucial to investigate the effect of various isolation conditions on different cellular behaviors, such as their common surface markers &amp; also their differentiation capacity.
Thus, here we separate human pulp tissue from impacted third molar teeth, and then used both existing protocols based on literature, for isolating hDPSCs,11-13 i.e. enzymatic dissociation of pulp tissue (DPSC-ED) or outgrowth from tissue explants (DPSC-OG). In this regards, we tried to facilitate the isolation methods by using dental diamond disk. Then, these cells characterized in terms of stromal-associated Markers (CD73, CD90, CD105 &amp; CD44), hematopoietic/endothelial Markers (CD34, CD45 &amp; CD11b), perivascular marker, like CD146 and also STRO-1. Afterwards, these two protocols were compared based on the differentiation potency into odontoblasts by both quantitative polymerase chain reaction (QPCR) &amp; Alizarin Red Staining. QPCR were used for the assessment of the expression of the mineralization-related genes (alkaline phosphatase; ALP, matrix extracellular phosphoglycoprotein; MEPE &amp; dentin sialophosphoprotein; DSPP).14

The method described isolation and characterization of human Dental Pulp Stem Cells (hDPSCs) by using either enzymatic dissociation of pulp (DPSC-ED) or direct outgrowth of stem cells from pulp tissue explants (DPSC-OG). Then followed by in vitro comparative differentiation of both types of hDPSCs into odontoblasts.

인간 치과 펄프의 줄기 세포의 분리, 특성화 및 비교 차별화 두 가지 방법을 사용하여 영구 치아에서 파생

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

연구

의학

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly isolated from human tissues and serially propagated in immunodeficient mice, typically through antibody labeling of subpopulations of cells and fractionation by flow cytometry. However, the unique clinical features of prostate cancer have considerably limited the study of prostate CSCs from fresh human tumor samples. We recently reported the isolation of prostate CSCs directly from human tissues by virtue of their HLA class I (HLAI)-negative phenotype. Prostate cancer cells are harvested from surgical specimens and mechanically dissociated. A cell suspension is generated and labeled with fluorescently conjugated HLAI and stromal antibodies. Subpopulations of HLAI-negative cells are finally isolated using a flow cytometer. The principal limitation of this protocol is the frequently microscopic and multifocal nature of primary cancer in prostatectomy specimens. Nonetheless, isolated live prostate CSCs are suitable for molecular characterization and functional validation by transplantation in immunodeficient mice.

The isolation of cancer stem cells (CSCs) directly from human tissues is requisite for their biological characterization. This manuscript describes a methodology for the isolation of prostate CSCs from human tissues, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

인간의 전립선 암 샘플에서 암 줄기 세포의 분리

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity but little is known about their biology. Isolating highly pure human lymphatic endothelial cells (LECs) from diseased and healthy tissue would facilitate studies of the lymphatic endothelium at genetic, molecular and cellular levels. It is anticipated that these investigations may reveal targets for new therapies that may change the clinical management of these conditions. A protocol describing the isolation of human foreskin LECs and lymphatic malformation lymphatic endothelial cells (LM LECs) is presented. To obtain a single cell suspension tissue was minced and enzymatically treated using dispase II and collagenase II. The resulting single cell suspension was then labelled with antibodies to cluster of differentiation (CD) markers CD34, CD31, Vascular Endothelial Growth Factor-3 (VEGFR-3) and PODOPLANIN. Stained viable cells were sorted on a fluorescently activated cell sorter (FACS) to separate the CD34LowCD31PosVEGFR-3PosPODOPLANINPos LM LEC population from other endothelial and non-endothelial cells. The sorted LM LECs were cultured and expanded on fibronectin-coated flasks for further experimental use.

The goal of this protocol is to isolate lymphatic endothelial cells lining human lymphatic malformation cyst-like vessels and foreskins using fluorescence-activated cell sorting (FACS). Subsequent cell culturing and expansion of these cells permits a new level of experimental sophistication for genetic, proteomic, functional and cell differentiation studies.

다중 매개 변수 형광 활성화 된 셀 정렬하여 인간의 림프 내피 세포의 분리

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Isolation and Culture Expansion of Tumor-specific Endothelial Cells

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model for developing new angiogenesis inhibitors for cancer. However, long-term in vitro expansion of murine endothelial cells (EC) is challenging due to phenotypic drift in culture (endothelial-to-mesenchymal transition) and contamination with non-EC. This is especially true for TEC which are readily outcompeted by co-purified fibroblasts or tumor cells in culture. Here, a high fidelity isolation method that takes advantage of immunomagnetic enrichment coupled with colony selection and in vitro expansion is described. This approach generates pure EC fractions that are entirely free of contaminating stromal or tumor cells. It is also shown that lineage-traced Cdh5cre:ZsGreenl/s/l reporter mice, used with the protocol described herein, are a valuable tool to verify cell purity as the isolated EC colonies from these mice show durable and brilliant ZsGreen fluorescence in culture.

We report a reliable method to isolate and culture primary tumor-specific endothelial cells from genetically engineered mouse models.

종양 특이 내피 세포의 분리 및 문화 확장

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study vasculogenesis, (tumor) angiogenesis, and atherosclerosis. The current standard for in vitro research on human endothelial cells (ECs) is the use of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVECs) and Human Umbilical Artery Endothelial Cells (HUAECs). For canine endothelial research, only one cell line (CnAOEC) is available, which is derived from canine aortic endothelium. Although currently not completely understood, there is a difference between ECs originating from either arteries or veins. For a more direct approach to in vitro functionality studies on ECs, we describe a new method for isolating Canine Primary Endothelial Cells (CaPECs) from a variety of vessels. This technique reduces the chance of contamination with fast-growing cells such as fibroblasts and smooth muscle cells, a problem that is common in standard isolation methods such as flushing the vessel with enzymatic solutions or mincing the vessel prior to digestion of the tissue containing all cells. The technique we describe was optimized for the canine model, but can easily be utilized in other species such as human.

Novel isolation methods of primary endothelial cells from blood vessels are needed. This protocol describes a new technique that completely inverts blood vessels of interest, exposing only the endothelial side to enzymatic digestion. The resulting pure endothelial cell culture can be used to study cardiovascular diseases, disease modelling, and angiogenesis.

개 동맥과 정맥에서 차 내피 세포의 분리 및 문화

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene and cell therapies are highly promising alternative approaches for CVD treatment. However, the broad clinical application of gene therapy is greatly limited by the lack of suitable gene delivery systems. The development of appropriate gene delivery vectors can provide a solution to current challenges in cell therapy. In particular, existing drawbacks, such as limited efficiency and low cell retention in the injured organ, could be overcome by appropriate cell engineering (i.e., genetic) prior to transplantation. The presented protocol describes the efficient and safe transient modification of endothelial cells using a polyethyleneimine superparamagnetic magnetic nanoparticle (PEI/MNP)-based delivery vector. Also, the algorithm and methods for cell characterization are defined. The successful intracellular delivery of microRNA (miR) into human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) has been achieved without affecting cell viability, functionality, or intercellular communication. Moreover, this approach was proven to cause a strong functional effect in introduced exogenous miR. Importantly, the application of this MNP-based vector ensures cell magnetization, with accompanying possibilities of magnetic targeting and non-invasive MRI tracing. This may provide a basis for magnetically guided, genetically engineered cell therapeutics that can be monitored non-invasively with MRI.

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

This manuscript describes the efficient, non-viral delivery of miR to endothelial cells by a PEI/MNP vector and their magnetization. Thus, in addition to genetic modification, this approach allows for magnetic cell guidance and MRI detectability. The technique can be used to improve the characteristics of therapeutic cell products.

준비 및<em&gt; 체외</em&gt; 자화 특성의 내피 세포를 미르 변성

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

A Flow Cytometry-based Assay for Measuring Mitochondrial Membrane Potential in Cardiac Myocytes After Hypoxia/Reoxygenation

Timely and efficient reperfusion of the occluded coronary artery is the best strategy for decreasing myocardial infarct size in patients with a ST-segment elevated myocardial infarction. However, reperfusion per se can result in further cardiomyocyte death, a phenomenon known as reperfusion injury. The opening of the mitochondrial permeability transition pore (mPTP), with the decrease of the mitochondrial membrane potential (MMP), or mitochondrial depolarization, is universally recognized as the final step of reperfusion injury and is responsible for mitochondrial and cardiomyocyte death. JC-1 is a lipophilic cationic dye that accumulates in mitochondria depending on the value of MMP. The higher the MMP is, the more JC-1 accumulates in the mitochondria. The increasing amounts of JC-1 in mitochondria can be reflected by a fluorescence emission shift from green (~530 nm) to red (~590 nm). Therefore, the reduction of the red/green fluorescence intensity ratio can indicate the depolarization of mitochondria. Here, we take advantage of JC-1 to measure MMP, or the opening of mPTP in human cardiac myocytes after hypoxia/reoxygenation, detected by flow cytometry.

Here, we present a protocol that uses JC-1 dye to assess the mitochondrial membrane potential of cells after being exposed to hypoxia/reoxygenation with or without a protective agent.

Hypoxia/Reoxygenation 후 심장 Myocytes에서 미토 콘 드리 아 막 잠재력을 측정 하기 위한 교류 Cytometry 기반 분석

Timely and efficient reperfusion of the occluded coronary artery is the best strategy for decreasing myocardial infarct size in patients with a ST-segment ...

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

Enteric bacterial communities are established early in life and influence immune cell development and function. The neonatal microbiota is susceptible to numerous external influences including antibiotics use and diet, which impacts susceptibility to autoimmune and inflammatory diseases. Disorders such as Inflammatory Bowel Disease (IBD) are characterized by a massive influx of immune cells to the intestines. However, immune cells conditioned by the microbiota may additionally emigrate out of the intestines to influence immune responses at extra-intestinal sites. Thus, there is a need to identify and characterize cells that may carry microbial messages from the intestines to distal sites. Here, we describe a method to label cells in the colon of newborn mice in vivo that enables their identification at extra-intestinal sites after migration.

In Vivo Photolabeling of Cells in the Colon to Assess Migratory Potential of Hematopoietic Cells in Neonatal Mice

The protocol described here utilizes a photolabeling approach in newborn mice to specifically identify immune cells that emigrate from the colon to extra-intestinal sites. This strategy will be useful to study host-microbiome interactions in early life.

Vivo에서 Photolabeling 신생아 쥐에 있는 조 혈 모 세포의 이동성 잠재력을 평가 하는 콜론에 셀의

Enteric bacterial communities are established early in life and influence immune cell development and function. The neonatal microbiota is susceptible to ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents responsible for the action potential can cause pro-arrhythmic substrates that underlie arrhythmias, such as atrial fibrillation, which are highly prevalent in many conditions and disease states. Isolating adult mouse atrial cardiomyocytes for use in patch-clamp experiments has greatly advanced our knowledge and understanding of the cellular electrophysiology in the healthy atrial myocardium and in the setting of atrial pathophysiology. In addition, studies using genetic mouse models have elucidated the role of a vast array of proteins in regulating atrial electrophysiology. Here we provide a detailed protocol for the isolation of cardiomyocytes from the atrial appendages of adult mice using a combination of enzymatic digestion and mechanical dissociation of these tissues. This approach consistently and reliably yields isolated atrial cardiomyocytes that can then be used to characterize cellular electrophysiology by measuring action potentials and ionic currents in patch-clamp experiments under a number of experimental conditions.

This protocol is used to isolate single atrial cardiomyocytes from the adult mouse heart using a chunk digestion approach. This approach is used to isolate right or left atrial myocytes that can be used to characterize atrial myocyte electrophysiology in patch-clamp studies.

성인 마우스에서 심방 근세포의 격리

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

Pre-clinical Model of Cardiac Donation after Circulatory Death

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after circulatory death (DCD) is a solution to address this limited availability, but due to a period of prolonged warm ischemia and the risk of tissue injury, its routine use in cardiac transplantation is seldom seen. In this manuscript we provide a detailed protocol closely mimicking current clinical practices in the context of DCD with continuous monitoring of heart function, allowing for the evaluation of novel cardioprotective strategies and interventions to decrease ischemia-reperfusion injury.
In this model, the DCD protocol is initiated in anesthetized Lewis rats by stopping ventilation to induce circulatory death. When systolic blood pressure drops below 30 mmHg, the warm ischemic time is initiated. After a pre-set warm ischemic period, hearts are flushed with a normothermic cardioplegic solution, procured, and mounted onto a Langendorff ex vivo heart perfusion system. Following 10 min of initial reperfusion and stabilization, cardiac reconditioning is continuously evaluated for 60 min using intraventricular pressure monitoring. A heart injury is assessed by measuring cardiac troponin T and the infarct size is quantified by histological staining. The warm ischemic time can be modulated and tailored to develop the desired amount of structural and functional damage. This simple protocol allows for the evaluation of different cardioprotective conditioning strategies introduced at the moment of cardioplegia, initial reperfusion and/or during ex vivo perfusion. Findings obtained from this protocol can be reproduced in large models, facilitating clinical translation.

This protocol shows a simple and flexible approach for the evaluation of new conditioning agents or strategies to increase the feasibility of cardiac donation after circulatory death.

순환사망 후 심장 기증 전 임상 모델

Cardiac transplantation demand is on the rise; nevertheless, organ availability is limited due to a paucity of suitable donors. Organ donation after ...